坛紫菜体细胞的连续克隆培养和悬滴培养

随着用于分离海藻体细胞和原生质体工具酶的增多,近几年来,海藻单离细胞和原生质体的培养取得了较大进展,特别是对一些经济海藻如海带、紫菜的原生质体培养,国内外均进行了大量研究。严兴洪等把坛紫菜叶状体体细胞的复杂发育分化趋势初步归结成八类,并且建立了坛紫菜叶状体体细胞的分化模型。阐明坛紫菜叶状体体细胞的发育分化规律,不仅能为利用坛紫菜体细胞直接快速采苗,改进传统采苗工艺的新技术提供科学的理论依据,而且对于开展坛紫菜体细胞与其它紫菜间的细胞融合的正确选材以及细胞融合以后的杂种筛选等研究均具较大意义。为此,我们对坛紫菜叶状体体细胞进行了连续数代克隆培养。单个细胞培养在高等植物中已获成功,但在海藻细胞培养中还未见报道,探讨单个细胞培养途径,对开展海藻细胞工程研究具重要价值。结果报告如下:

8p11.2亚带ANK1位点附近区域YAC连续克隆群的构建

我们分离了３个８ｐｌ１．２亚带ＡＮＫ１位点附近区域的单拷贝片段，应用这些片段之一Ｓ９２５作为探针筛到４个阳性ＣＥＰＨＹＡＣ（ｙｅａｓｔａｒｔｉｆｉｃｉａ１ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）克隆。结合文献报道资料及其多态性位标检测结果，我们在ＡＮＫ１附近区域构建一个ＹＡＣ连续克隆群，从而填补了Ｄ８Ｓ５３２和Ｄ８Ｓ２６８之间的间隙。这个ＹＡＣ连续克隆群可用于分离基因。

继代核移植能成倍提高来自奶山羊卵胞质体的异种间核移植重构胚的发育率(英文)

为了提高异种间核移植重构胚的发育率,本研究以体内排放的奶山羊成熟卵为供胞质的受体细胞,以人、兔、波尔山羊等的异种或亚种体细胞的原代核移植(Primary Somatic Cell Nuclear Transfer,PSCNT)重构早胚(8-16细胞期)的卵裂球作供核体,观察经亚种或异种卵胞质体短期"修饰"的核再移植产生的继代(Secondary SCNT,SSCNT)重构胚的着床前发育潜能。结果:人、兔、波尔山羊的继代桑椹/囊胚发育率均显著地高于其PSCNT胚胎(人,14.81%VS.7.79%;兔,23.53%VS.12.50%;波尔羊,55.35%VS.24.53%);这些早胚的各阶段发育时程仍遵循供核体动物正常受精卵的发育时程。结果启示:奶山羊成熟卵胞质对异种体细胞核亦具一定的去分化能力,能支持重构胚发育到囊胚;异种重构胚的发育特征是由供体核所决定的;继代核移植几乎能够成倍提高异种间重构胚的着床前发育率,提示核的去分化完全是在母型信息主导的调控之下完成的,而进一步发育的时序似乎是由核决定的;成倍延长在含母型信息主导调控环境中的时间能成倍提高SCNT重构胚的着床前发育率。