核小体的提取纯化及鉴定

目的 探索一种操作简便、实用的核小体提取方法。方法 取无菌新鲜鸡血 ,提取细胞核 ,用葡萄球菌核酶消化后裂解、离心 ,获得上清组分用连续性密度梯度蔗糖进行分离 ,收集分子量 3 5 0bp左右的组分。结果 2 %琼脂糖电泳显示该组分含有长度为 15 0bp的双链DNA ,15 %SDS PAGE电泳显示该组分含有组蛋白H2A、H2B、H3和H4;本实验分离的核小体在 0℃条件下存放 4周未见DNA成分和组蛋白成分发生解聚。结论 该方法可以正确的分离出核小体 ,且具有良好的稳定性 ,为深入研究核小体在SLE自身抗体产生中的作用打下基础。

还原性谷胱甘肽对兔骨髓间充质干细胞体外冷藏保存活性保护作用研究

目的观察冷藏保存对兔骨髓间充质干细胞生长活性的影响及还原性谷胱甘肽对其可能存在的保护作用。方法日本雄性大耳白兔12只,取出兔骨髓后,采用Percoll非连续性密度梯度离心法分离出单个核细胞,取原代培养后细胞经免疫磁珠分析和流式细胞术鉴定后进行传代培养。第3代传代培养细胞分别在体外4℃冷藏后分为对照组(0h)和实验组。实验组分为冷藏6h(6h组),12h(12h组)和24h(24h组)。部分冷藏12h单个核细胞分别加入0.5mmol/L和1.0mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)共培养,分别为12h+0.5mmol/L GSH组和12h+1.0mmol/L GSH组。对各组进行8天生长曲线的绘制并完成活性的测定。采用SPSS 17.0软件进行配对t检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组分离出单个核细胞12天可铺满瓶底。细胞原代培养后,流式细胞仪显示经免疫磁珠分选的细胞CD29阳性率达91.7%,表达CD29,CD44,CD90,不表达CD19,CD45,CD34。生长曲线显示,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组,12h+1.0mmol/L GSH组与对照组的细胞增殖能力差异均无统计学意义(均P>0.05)。统计学显示12h组和24h组的细胞增殖能力与对照组,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组及12h+1.0mmol/L GSH组的细胞相比差异有统计学意义(均P<0.01);24h组的细胞增殖能力与12h组的细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Percoll非连续性密度梯度离心法对于兔骨髓的骨髓间充质干细胞分离起着良好的效果。体外4℃冷藏保存对骨髓间充质干细胞的生长活性起着抑制效果,且随着冷藏时间的延长而更加明显。还原性谷胱甘肽对冷藏保存后的骨髓间充质干细胞起着保护活性的作用。