连续细胞培养诱导骨髓间充质干细胞分化

目的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)能够在多种诱导条件下向血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)方向分化。文中通过采取连续细胞培养的方式,探讨能否体外诱导BMSCs向VSMCs分化。方法采用全骨髓贴壁的方法将BMSCs从骨髓中提取出,并进行体外扩增,流式及三系分化验证BMSCs。将BMSCs随机分为实验组和对照组,实验组采取连续细胞培养的方法,中途不换液,而对照组采取常规方法培养,每2天换液1次。将BMSCs连续培养5 d后,通过免疫荧光、Western blot、Real-time PCR等方法测定VSMCs的特异性标志物。结果 BMSCs阳性表达CD29、CD90,而阴性表达CD45、CD34、CD49 d,而且经成骨、成脂和成软骨诱导后,茜素红、油红、阿辛蓝染色均呈阳性。通过连续细胞培养5 d后,实验组细胞的α-SMA、Calponin1的蛋白表达水平均较对照组明显增高[(0.84±0.04)vs(0.19±0.02)、(0.87±0.03)vs(0.05±0.06),P<0.01],且免疫荧光实验阳性。实验组较对照组α-SMA mRNA、CNN1 mRNA、SM-MHC mRNA、SM22 mRNA表达升高[(9.33±0.14)vs(1.00±0.18)、(12.64±0.23)vs(1.00±0.17)、(4.75±0.28)vs(1.00±0.23)、(10.26±0.29)vs(1.00±0.22)],差异有统计学意义(P<0.01)。结论在缺乏外源性刺激的情况下,通过采取连续细胞培养的方式,可成功诱导BMSCs向VSMCs分化。