高效液相色谱与荧光法测定细菌染色体碱基组成的比较

目的 比较连续荧光检测法 (荧光法 )与高效液相色谱 (HPLC)法测定细菌染色体鸟嘌呤、胞嘧啶百分比 (GC % )的稳定性、准确性和适应性。方法 应用双股DNA结合染料 (SYBRGreen1)和能够快速升降温度的连续荧光检测仪 ,测定 9株细菌染色体的变性温度℃值 ,并根据相应的公式算出GC % ;以HPLC法直接检测细菌染色体的GC %。结果 DNA纯度对荧光法测得的GC %结果无显著影响 ,但影响HPLC的测定结果 ,荧光法 3次检测获得的 9株细菌GC %有 4株略高于文献值 ,而HPLC法测得的结果与文献值完全相符 ;用荧光法测得的标准差 ,7/ 9的菌株高于HPLC法。结论 荧光法检测细菌染色体GC %具有简便、快速且不受DNA纯度影响等优点 ,适用于临床微生物的快速诊断。HPLC法在DNA高度纯化的基础上测得的GC %准确、可靠、结果稳定 ,适于细菌分类研究 ,然而限于对标本纯度的要求及操作的复杂性 ,难以在临床推广应用。