UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量

目的 建立同时测定连翘花中芦丁、连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素5种成分的方法。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)法进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);流速为0.3 mL/min;检测波长为275 nm(0~8 min)、330 nm(8~10.5 min)、275 nm(10.5~32 min);柱温为25℃;进样量为1μL。以芦丁为参照物,采用一测多评(QAMS)法计算各成分含量,并与外标法进行比较。结果 QAMS法所得连翘花中连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的含量分别为7.472~7.671、2.919~2.986、1.439~1.486、1.523~1.566mg/g,外标法测定结果为7.454~7.664、2.913~2.996、1.444~1.484、1.519~1.562 mg/g,两种方法测定结果无明显差异,相对偏差<1.0%。结论 本研究成功建立了UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量,且该方法与外标法所得结果无明显差异,可用于连翘花的质量控制。

卢氏连翘花季将于3月19日开幕

“迎得春来非自足,百花千卉共芬芳。”连翘产量占到全国三分之一的“中国连翘第一县”河南省卢氏县,将于3月19日举办第三届连翘花季。今年连翘的花季盛花期预计为3月15-31日,届时百万余亩连翘花将绽放,漫山遍野灿若云霞,形成花海奇观,令人叹为观止。卢氏县是中国十大中药材生产基地县,全县盛产中药材1225种,尤以连翘久负盛名,卢氏连翘是农业农村部和原国家质检总局授予的全国唯一“双地标”产品。

连翘花茶制备及其活性成分分析

采用HPLC方法对河南连翘花提取物中芦丁、金丝桃苷、连翘酯苷A、连翘苷、齐墩果酸和熊果酸含量进行分析,并对连翘花提取物稳定性进行研究,并进一步将连翘花开发成连翘花茶,连翘花茶具有微量元素、茶多酚、氨基酸、总黄酮、总木脂素和总三萜酸含量较高,本文为综合利用连翘花资源提供有用信息。

连翘花黄色素的提取及其对光热稳定性的研究

研究了连翘花中黄色素的提取方法 ,并对色素溶液在光照及加热等条件下的稳定性进行了初步研究。结果表明 :该黄色素易溶于乙醇、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂。当选用乙醇为溶剂时 ,色素提取的最佳条件为 :在 70℃、用 1g干花加 10 0mL体积分数为 95 %的乙醇的料液比浸提 3次、每次浸提 2h ,可将色素基本提取完全。该色素对强光的稳定性很差 ,而对弱光及热有较好的稳定性。不同波长的光对色素稳定性的影响也不相同。

乙醇提取连翘花黄色素溶液稳定性的研究

研究了酸、碱、氧化剂、还原剂、金属离子、阴离子、蔗糖及VC 等添加物对乙醇浸提的连翘花黄色素溶液稳定性的影响。结果表明 :该黄色素溶液对碱、还原剂、金属离子、阴离子及蔗糖等添加物有较好的稳定性 ,而对酸、氧化剂及Vc 。

连翘花醇提物保护线粒体及抗氧化研究

目的:探索连翘花醇提物(FFE)对自由基所致的线粒体损伤的保护作用,并研究其抗氧化能力、超氧阴离子的清除活性及抗衰老机制。方法:采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量、分光光度法测线粒体的肿胀度,并以还原型辅酶I-氮蓝四唑-吩嗪硫酸甲酯(NADH-NBT-PMS)为超氧阴离子生成系统测定对超氧阴离子的清除能力。小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(D-gal)100mg/(kg.d),连续给药7周造衰老模型,利用钼酸胺比色法、黄嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸比色法、Fenton反应显色法分别测定FFE对小鼠肝匀浆过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及抗羟自由基活力的影响。结果:FFE可明显抑制肝匀浆及线粒体的脂质过氧化、线粒体肿胀,并呈剂量依赖关系,清除超氧阴离子的能力显著,且能明显增强CAT、SOD、GSH-Px及抗羟自由基活力。结论:FFE能通过清除活性氧自由基及提高抗氧化酶活力来保护线粒体,具有一定的抗氧化及抗衰老药用价值。

贯叶连翘花中挥发油的提取工艺优选及抑菌活性研究

采用水蒸气蒸馏法对贯叶连翘花中挥发油进行提取,以挥发油提取率为响应值,通过单因素实验对影响提取工艺的参数(浸泡时间、提取时间和料液比)进行考察,并利用三因素三水平响应曲面实验法确定了贯叶连翘花中挥发油的最优提取工艺,即浸泡时间19 h,液固比9∶1 m L/g,提取时间10 h,该条件下贯叶连翘花中挥发油的提取率为1.03 m L/100 g,与理论值1.10 m L/100 g仅相差2.73%。同时测试了该挥发油的抑菌活性,其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为9、10、12 mm,表明贯叶连翘花中挥发油有一定的抑菌活性。

连翘花提取物活性成分及其稳定性

采用高效液相色谱方法对河南连翘花提取物中芦丁、金丝桃苷、连翘酯苷A、连翘苷、齐墩果酸、熊果酸含量进行分析,并对连翘花提取物稳定性进行研究。结果表明：连翘花提取物中含有较高含量的芦丁、金丝桃苷、连翘苷、齐墩果酸和熊果酸;在中性和弱酸性环境中连翘花提取物具有较强的稳定性;在25-75℃范围内,温度对连翘花提取物影响较小;室光和避光对连翘花提取物的影响小于自然光;金属离子K^＋、Na^＋、Ca^2＋对连翘花提取物的吸光度影响较小,Mg^2＋、Fe^3＋有增强连翘花提取物吸光度作用;氧化剂、还原剂、蔗糖、食盐和淀粉对连翘花提取物稳定性影响较小。本实验为综合利用连翘花提取物资源提供有用信息。

陕北产连翘花挥发油的提取与GC-MS分析

对陕北延安产连翘花的化学成分进行研究,采用水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,以气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术结合计算机的检索进行化学成分分离和鉴定,用色谱峰面积归一法计算各组分的相对百分含量,结果从陕北产连翘花中鉴定出52种化合物,占连翘花挥发油总量的70.29%,主要化学成分有烯类、烷类、醇类、醛酮、酸酯多种化合物等,研究结果为进一步开发和利用陕北产连翘花奠定了基础。

连翘花精油的化学成分研究

水蒸气蒸馏法提取和乙醚萃取甘肃天水产的连翘花油挥发性成分 ,经空白对比 ,GC- MS法分离、鉴定了含量大于 0 .1%的 4 8个化合物。占精油总量的 82 .6 5 %。其中烃类 4 9.84 % ,醇酚醚类 11.6 1% ,醛酮类 12 .6 8% ,酯类 1.35 % ,卤代烃 7.17%等。表明花中的有效成分较果实低。

高效液相色谱法测定不同产地连翘花中四种有效成分含量

目的建立测定不同产地连翘花中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷、松酯酚含量的高效液相色谱法,为其有效成分控制提供有效方法。方法采用Symmetry C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长230 nm,柱温25℃。结果不同产地的连翘花之间各成分的含量差异显著,其中连翘酯苷A在各样品中含量最高,芦丁含量次之,连翘苷含量最少;其中菏泽产的样品连翘酯苷A含量高达119.38±5.78 mg/g,连翘苷的含量达4.71±0.09 mg/g;临沂产的样品芦丁含量最高达75.64±2.09 mg/g;日照、青岛和烟台的样品中松脂酚含量较高且相差不大,分别是25.41±1.51、24.45±0.98、23.60±1.19 mg/g。结论 12个产地连翘花中连翘酯苷A的含量远远高于药典规定的最低含量要求。但连翘花中连翘苷的含量较低。

连翘花总黄酮含量的分光光度法测定及其对NO^(2-)清除作用

利用不同溶剂提取连翘花中总黄酮,分光光度法测定了其中总黄酮含量,并研究了其对亚硝酸盐的清除能力。结果表明:连翘花总黄酮最佳提取试剂为50%乙醇溶液,含量测定最佳显色体系为NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH显色体系,最佳测定时间为显色反应后20~40min范围内,测定方法精密度RSD=0.67%(n=5),加标回收率为102.67%(RSD=1.16%),利用该法测得连翘花总黄酮含量为12.74%(RSD=2.71%,n=5);在模拟胃液条件下,连翘花总黄酮浓度从8.00μg/mL增加至96.00μg/mL时,清除率从(27.69±2.10)%逐渐增加至(96.08±0.90)%,IC50值为18.05μg/mL,该测定方法简便可靠,连翘花总黄酮对亚硝酸盐具有很强的清除作用。

HPLC法测定连翘花中连翘苷的含量

目的：建立测定连翘花中连翘苷含量的方法。方法：采用HPLC法测定连翘花中连翘苷的含量。结果：HPLC法测定连翘苷的线性范围为0.02056-0.2056 mg/ml,平均回收率为102.33%（RSD为2.33%,n=6）。结论：定量方法简便、准确,重现性好,可用于连翘花中连翘苷的含量测定。

连翘花中齐墩果酸超声提取工艺的研究

目的研究连翘花中齐墩果酸的最佳超声提取工艺。方法本研究采用正交试验设计,分别考察了提取时间、乙醇浓度、溶剂用量、提取次数对连翘花中齐墩果酸提取率的影响。结果影响连翘花中齐墩果酸超声提取率的主次因素依次为:乙醇浓度>提取次数>溶剂用量>提取时间,其中提取次数和乙醇浓度有显著影响,最佳超声提取工艺条件为:用12倍量的85%乙醇,超声提取3次,每次60min。结论超声波法是提取连翘花中齐墩果酸的一种有效方法,简便可行,可应用于连翘花的资源开发。

连翘花中抑制酪氨酸酶活性成分研究

本文首次对连翘花抑制酪氨酸酶活性成分进行了研究。首先,对连翘不同器官[叶、果实(青翘、老翘)、花]抑酶活性进行比较分析,发现连翘花对酪氨酸酶的抑制表现出了浓度依赖性;进而对连翘花不同溶剂提取物进行抑酶活性评价,结果表明95%乙醇提取物抑酶活性最高。然后根据活性导向分离方法,对连翘花95%乙醇提取物进行了化学成分分离,从中分离得到5个化合物,鉴定为:连翘酯苷A(1)、芦丁(2)、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷(3)、(+)-甲基松脂素-β-D-葡萄糖苷(4)、连翘苷(5),其中化合物4是首次从连翘花中分离得到。酪氨酸酶抑制活性测试表明化合物均显示出一定的抑酶活性,同时各化合物之间表现出明显的协同作用,这表明这些成分可能是连翘花美白作用的物质基础。

连翘花美白活性有效部位的筛选及其成分分析

本文以山西产连翘花为实验原料,采用RP-C18中低压制备分离技术,对连翘花水提物(LQH-W)进行了有效部位的初步制备,得到五个组分。对初提物和五个组分进行了酪氨酸酶抑制活性的测试,结果显示各组分均表现出了较好的抑酶活性,其中组分LQH-W-4的抑酶活性与阳性对照物熊果苷相当,其IC_(50)值为0.668mg·mL^(-1)。继续对各有效部位进行了抗氧化能力测试,结果显示各有效部位均表现出较好的清除DPPH·能力,显示出一定的抗氧化能力,这表明连翘花的抑酶活性应该与其抗氧化能力相关,其抗氧化作用可能是连翘花美白功效的作用机制。进一步对各有效部位进行了总酚、总黄酮含量测定,结果显示各有效部位的总酚和总黄酮含量较高,且各有效部位的含量差异顺序与其抗氧化顺序有一致性,表明黄酮、总酚类物质可能是连翘花起美白作用的物质基础。最后对各有效部位进行了HPLC分析,结果表明各有效部位的化学成分差异较大,其中抑酶活性最好的有效部位LQH-W-4中有两个含量较突出的成分,经标品比对其中之一是连翘脂素,为木脂素酚类成分,有研究表明其确有抑制B16黑色素瘤细胞内酪氨酸酶的作用。

连翘花黄色素对秀丽隐杆线虫在氧化应激下的保护作用

自由基过度引起的氧化应激是多种疾病发生的因素。连翘花黄色素(forsythia flower yellow pigment, FFYP)中含有大量的抗氧化活性物质,但其对氧化应激的抵抗性仍不清楚。本文首先通过化学方法检测FFYP的体外抗氧化活性;用细胞内抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)方法检测FFYP细胞内抗氧化活性;然后以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)为模型,检测FFYP对线虫氧化应激抵抗力及体内抗氧化指标的影响;用Daf-16和Skn-1突变体线虫和qRT-PCR实验探究其作用机制。研究结果表明,FFYP具有1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除能力,铁离子还原能力和活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)清除能力,并且具有浓度依赖性。用500μmol/L的胡桃醌提供氧化应激压力时,FFYP能显著提高线虫在氧化应激下的寿命,表明FFYP可以提高线虫对氧化应激的抵抗力。进一步研究发现,FFYP可显著降低线虫体内ROS自由基含量,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性,增加还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,表明FFYP通过提高线虫体内抗氧化防御系统活性清除自由基来提高线虫对氧化应激的抵抗力。突变体线虫实验显示,FFYP对线虫延长氧化应激下寿命的效应在Skn-1突变体线虫中完全消失,在Daf-16突变体中效应被减弱。qRT-PCR实验也显示,Daf-16和Skn-1靶基因的表达量均被提高。表明FFYP对线虫氧化应激抵抗力提高的作用是通过Daf-16和Skn-1共同作用。这预示着FFYP具有很好的抗氧化及抗应激药用价值,有潜力成为一种新的有生物活性的天然色素。

连翘花黄色素超声波提取及其稳定性探究

采用乙醇为提取溶剂,通过超声波提取连翘花天然黄色素。采取正交试验法优化提取工艺,并对黄色素进行了稳定性试验。实验表明:乙醇浓度75%、超声时间30min、超声温度60℃、超声功率为85%、固液比1∶40时,黄色素的提取率最高。连翘花黄色素在弱酸、中性及稀碱性条件下均能稳定存在,而强氧化剂会影响其稳定性。

不同干燥方式对连翘花主要成分的影响

目的:建立测定阴干、真空冷冻干燥、烘箱干燥(30、50、70℃)、晒干等干燥方式下连翘花中4种成分含量的方法并进行比较,以评价不同干燥方式对连翘花主要成分含量的影响,筛选其最佳干燥方式。方法:采用超高效液相色谱法。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为35℃,进样量为1μL。采用优劣解距离法(TOPSIS)综合分析法计算不同干燥方式与理想方法的欧氏贴近度(Ci),以确定最佳干燥方法。结果:连翘酯苷A、芦丁、连翘酯苷、(+)-松脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷检测进样量的线性范围分别为0.0075~0.0377、0.0274~0.1372、0.0019~0.0095、0.0056~0.0288μg(r均大于0.999);精密度、稳定性(32 h)、重复性试验的RSD均小于2%;加样回收率分别为97.27%~102.53%、100.53%~104.11%、98.45%~104.02%、98.66%~104.82%,RSD均小于3%(n=3)。含量分别为1.6458~4.9879、11.7302~20.9780、0.8755~2.0050、2.3660~5.5357 mg/g。连翘酯苷A以30℃烘箱干燥后含量最高,芦丁、(+)-松脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷均以真空冷冻干燥后含量最高,连翘苷以50℃烘箱干燥后含量最高。TOPSIS分析结果显示,阴干、真空冷冻干燥、烘箱干燥(30、50、70℃)、晒干的Ci分别为0.0799、0.5535、0.4954、0.5038、0.1579、0.2172;Ci排序为真空冷冻干燥>50℃烘箱干燥>30℃烘箱干燥>晒干>70℃烘箱干燥>阴干。结论:所建含量测定方法简便、重复性好,可用于同时测定连翘花中4种成分的含量。连翘花样品以真空冷冻干燥方式最佳,其次为50℃烘箱干燥、30℃烘箱干燥,再次为晒干和烘箱干燥70℃,最后为阴干。

连翘花中连翘苷的超声提取工艺

目的:连翘花中连翘苷的最佳超声提取工艺及含量的测定。方法:通过单因素试验分别考察了甲醇体积分数、料液比、提取时间对连翘苷得率的影响,并在此基础上设计正交试验以确定超声提取连翘苷的最佳提取工艺。结果:料液比对连翘苷的得率有显著的影响,且最佳提取工艺条件为用25倍量的70%甲醇,超声提取40 min。结论:超声提取工艺简单、快捷,适用于连翘花中连翘苷的提取、测定和资源开发。