连翘苷元通过抑制TLR4介导的NF-κB信号通路减轻大鼠骨关节炎软组织损伤和基质降解

目的研究连翘苷元调控TLR4介导的NF-κB信号通路的活化对骨关节炎大鼠软组织损伤和基质降解的影响。方法建立骨关节炎大鼠模型,将大鼠随机分为6组:健康对照组,模型组,连翘苷元低、中、高剂量组和双醋瑞因组进行后续实验;苏木素-伊红染色和番红O-固绿染色检测大鼠骨关节病理损伤程度;ELISA检测炎症因子的含量;蛋白免疫印迹检测半胱氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸蛋白酶-9、聚集蛋白聚糖、基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原蛋白、Toll样受体4、髓样分化因子88、核因子κB蛋白表达水平。结果与模型组相比较,连翘苷元中、高剂量组和双醋瑞因组骨关节病理损伤程度明显改善,Caspase-3、Caspase-9蛋白水平显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.05),Aggrecan、type II collagen(ColⅡ)蛋白水平显著升高(P<0.05),MMP-13蛋白水平显著降低(P<0.05),IL-6、IL-17、TNF-α、MCP-1含量显著降低(P<0.05),TLR-4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论连翘苷元抑制TLR4介导的NF-κB信号通路的活化对骨关节炎大鼠软组织损伤和基质降解具有修复作用。

连翘苷元对老年大鼠氧化应激和肾功能的改善作用

目的研究连翘苷元对老年大鼠氧化应激和肾功能的影响及相关机制。方法将15只SD雌性老年大鼠(24月龄)随机分成3组,每组5只,老年对照组(Aged rats),老年连翘苷元低剂量组[Aged rats+FA(20 mg/kg)],老年连翘高剂量组[Aged rats+FA(100 mg/kg)]。另取5只12周龄SD雌性大鼠为青年对照组(Young rats)。连翘苷元低、高剂量组大鼠灌胃给药60 d。考马斯亮蓝检测24 h尿液总蛋白并分析血清肌酐和尿素氮水平。HE染色和TUNEL染色检测肾组织病理损伤情况。Western Blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达。检测氧化应激标记物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的水平。ELISA检测血清中炎症因子IL-18和IL-1β水平。Western Blot检测核因子E2相关因子(Nrf 2)、血红素氧合酶1(HO-1)和还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO-1)的表达。结果老年对照组与青年对照组相比,尿中蛋白含量显著提升,血清中肌酐和尿素氮含量显著上升;肾组织细胞排列不规则,出现大量炎性细胞浸润,凋亡细胞比率显著提高;Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著上调;SOD活性显著降低,MDA含量显著上升,GSH含量显著下降;血清中IL-18和IL-1β含量显著升高;Nrf 2、HO-1和NQO-1的表达显著下调。连翘苷元低、高剂量组与老年对照组相比,尿液中蛋白含量显著降低,血清肌酐和尿素氮含量显著下降;肾组织细胞排列趋向规则,炎性细胞浸润明显减弱,凋亡细胞比率显著下降;Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著下调;SOD活性显著提高,MDA含量显著降低,GSH含量显著上升;血清中IL-18和IL-1β含量显著降低;Nrf 2、HO-1和NQO-1的表达显著上调。结论连翘苷元抑制老年大鼠氧化应激反应,改善老年大鼠肾功能,其作用机制可能与Nrf 2-ARE通路激活相关。

连翘苷元对四氯化碳大鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨连翘苷元对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤的保护作用。方法用CCl4诱导化学性急性肝损伤模型,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平;肝脏组织切片,苏木精-伊红(HE)染色,光镜观察病理学改变;用试剂盒测定肝组织中SOD、GSH-Px和GSH的活性及脂质过氧化产物MDA含量。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-8含量。结果在CCl4诱导的大鼠急性肝损伤模型中,连翘苷元(0.05、0.15、0.5mg·kg-1,sc)明显降低血清ALT、AST和TBIL水平;明显改善肝脏病理组织状况;连翘苷元(0.05、0.15、0.5 mg·kg-1,sc)明显降低CCl4诱导的急性肝损伤大鼠的肝组织匀浆中MDA的含量,明显增加SOD、GSH-Px和GSH的活性。连翘苷元(0.15、0.5 mg·kg-1,sc)明显降低TNF-α、IL-8含量。结论连翘苷元对CCl4诱导大鼠急性肝损伤具有保护作用,该作用与其增加肝组织中抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、降低TNF-α、IL-8等促炎因子水平有关。

连翘叶中连翘苷元制备工艺的研究

目的:研究从连翘叶中分离纯化高纯度连翘苷元的制备方法,为连翘苷元的规模化制备提供实验依据。方法:以浸膏中连翘苷元含量为考察指标,采用正交试验,确定水提最优工艺,提取液乙醇沉淀后,乙酸乙酯搅拌萃取、水反洗得到粗品。对粗品进行甲醇结晶,得高纯度的连翘苷元。结果:经水提醇沉萃取可得到纯度>75.0%的连翘苷元粗品,再经甲醇结晶,即可得纯度>99.0%的连翘苷元单体。结论:该工艺操作简单、成本低、效率高,可用于规模化制备连翘苷元。

连翘苷元对大鼠免疫性肝纤维化的影响

目的研究连翘苷元对牛血清白蛋白诱导的大鼠免疫性肝纤维化的影响。方法动物按照体质量随机分为对照组、模型组、连翘苷元低、中、高剂量(0.1、0.3、1.0 mg/kg)组和水飞蓟宾葡甲胺组(50 mg/kg),利用牛血清白蛋白建立大鼠免疫性肝纤维化模型。全自动生化分析仪检测血清蛋白水平;Elisa试剂盒检测血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平;分光光度计法检测肝脏组织羟脯氨酸(Hyp);取肝左叶固定、HE染色,显微镜下观察肝纤维化程度。结果连翘苷元能够显著降低肝纤维化大鼠血清HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ的量,减少肝脏质量和肝脏系数,降低肝脏Hyp水平,减轻肝纤维化程度。结论连翘苷元对免疫性大鼠肝纤维化有较好的治疗作用。

连翘苷元纳米混悬液的制备及微丸固化工艺的优化

首先用湿法研磨技术制备了连翘苷元(1)纳米混悬液,然后加入羟丙甲纤维素、乳糖和甘露醇配制成包衣液,采用流化床底喷包衣技术制备1微丸以提高稳定性。利用单因素试验和星点设计-响应面法优化包衣工艺参数。所得的优化参数为:包衣液黏度130 mPa·s、进风温度50 ℃、进液速率12 r/min。室温贮存3个月时,优化的纳米混悬液和微丸(再分散混悬液)的平均粒径为(265.5±5.9)和(220.6±3.8)nm,多分散性指数为0.253±0.071和0.199±0.069,提示固化工艺提高了药物纳米晶体的稳定性。体外溶出度结果显示,与微粉化原料药相比,纳米混悬液和微丸在不同pH介质中均能显著提高药物溶出度。