连翘酯苷B抑制小鼠脑缺血/再灌注引起的氧化应激损伤:基于激活AAMPK/DAF-16/FOXO3通路

目的 研究连翘酯苷B(FB)对脑缺血/再灌注(I/R)引起的氧化应激损伤的保护作用及作用机制。方法 将90只C57BL/6小鼠随机分为5组,假手术组(Sham),模型组(model),FB低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg),采用大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h,再灌注24 h,制备脑I/R模型。试剂盒检测小鼠脑组织ROS、MDA、PCO、8-OhdG、SOD、GSTα4、CAT、GPx水平,Western blot检测小鼠脑组织AMPK、P-AMPK、DAF-16、FOXO3、P-FOXO3蛋白表达。在此基础上,采用AMPK抑制剂Compound C(CC)验证FB是否通过AMPK发挥抑制氧化应激损伤作用,将36只C57BL/6小鼠随机分为,Sham组、model组、FB(40 mg/kg)组、FB(40 mg/kg)+CC(10 mg/kg)组。TTC染色检测脑梗死体积,试剂盒检测ROS、SOD水平,Western blot检测小鼠脑组织AMPK、P-AMPK、DAF-16、FOXO3、P-FOXO3蛋白表达。结果 与model组比较,FB可降低小鼠脑组织ROS、MDA、PCO、8-OHdG水平,升高小鼠脑组织中抗氧化酶SOD、GSTα4、CAT、GPx活性,提高AMPK、FOXO3磷酸化及DAF-16蛋白表达水平(P<0.01)。与FB组比较,FB+CC组AMPK和FOXO3磷酸化水平降低,DAF-1表达减少,脑梗死体积增加,ROS水平升高,SOD水平降低(P<0.01)。结论 FB能够抑制I/R引起的脑组织氧化应激损伤,作用机制是通过促进AMPK磷酸化、其下游DAF-16蛋白表达及FOXO3磷酸化,促进抗氧化酶的表达,清除过量ROS,从而发挥治疗缺血性脑卒中的作用。

河南和山西连翘叶中总木脂素、连翘酯苷A、连翘酯苷B和连翘苷的含量比较

测定河南和山西连翘叶中总木脂素、连翘酯苷A、连翘酯苷B和连翘苷含量。采用分光光度法测定连翘叶中总木脂素含量,结果显示山西连翘叶高于河南连翘叶总木脂素含量。采用高效液相色谱法(HPLC)测定连翘叶中连翘酯苷A、连翘酯苷B和连翘苷的含量。连翘酯苷A平均回收率为99.6%,RSD为1.23%;连翘酯苷B平均回收率为101.3%,RSD为1.74%;连翘苷平均回收率为102.3%,RSD为2.58%;连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷的含量较高,并且不同产地连翘叶中连翘苷含量差异较大;另外对于富含连翘酯苷和连翘苷的连翘叶能否代替果实或者与果实合并用药有待于进一步研究。

四季抗病毒合剂制备中连翘酯苷A和连翘酯苷B转移率的研究

目的建立连翘与四季抗病毒合剂中连翘酯苷A和连翘酯苷B的含量测定方法,阐明其在连翘药材至四季抗病毒合剂制剂间的转移率。方法采用超快速液相色谱(UFLC)法,选取3批连翘药材,每批对应5批制剂。结果 1 3批连翘药材中连翘酯苷A的含量分别为12.57,20.26和18.64mg·g^(-1),3批连翘药材中连翘酯苷B的含量依次分别为2.22,3.76和3.07mg·g^(-1);2每批连翘药材对应5批制剂中连翘酯苷A的平均含量分别为1 129.40,1 828.30和1 666.30μg·mL^(-1),每批连翘药材对应5批制剂中连翘酯苷B的平均含量依次分别为224.80,382.60和315.70μg·mL^(-1);3 15批制剂中连翘酯苷A和连翘酯苷B的转移率分别为74.86%和84.95%,RSD分别为0.88%和1.43%。结论该含量测定方法具有简便、稳定、可靠、准确等优点,可作为连翘与四季抗病毒合剂中连翘酯苷A和连翘酯苷B的定量方法;连翘酯苷A和连翘酯苷B的转移率高,表明制剂制备工艺有利于2种有效成分的溶出,为保证制剂疗效提供了理论依据。

连翘酯苷B与毛蕊花糖苷稳定性研究

目的研究连翘酯苷B与毛蕊花糖苷在不同条件下的稳定性。方法采用超高效液相色谱法在不同pH及加入不同量抗坏血酸条件下,测定连翘酯苷B与毛蕊花糖苷的稳定性。结果连翘酯苷B与毛蕊花糖苷在酸性条件下2 h内稳定,而在碱性环境中2 h后有明显降解,加入抗坏血酸可明显抑制其降解。结论连翘酯苷B与毛蕊花糖苷在酸性条件下稳定,而在碱性条件下稳定差,加入抗坏血酸可提高其稳定性。

NF-κB介导的连翘酯苷B对宫颈癌细胞增殖活性的抑制作用

目的:研究连翘酯苷B是否通过抑制NF-κB调控p21/Cyclin E/CDK2信号通路,对宫颈癌细胞(He La)增殖产生影响。方法:在培养的HeLa细胞,不同浓度(1,2,4μmol/L)连翘酯苷B处理24、48、72 h后采用MTT实验观察细胞活力变化。观察不同浓度的连翘酯苷B对肿瘤细胞克隆形成的影响。连翘酯苷B处理细胞后,观察转录因子NF-κB(p-p65、p65)蛋白调控变化,并检测蛋白p21、以及细胞周期蛋白Cyclin E、CDK2的表达变化。结果:连翘酯苷B浓度依赖性抑制肿瘤细胞克隆形成,且对HeLa细胞增殖效应的抑制呈时间及浓度依赖性。连翘酯苷B浓度依赖性上调p21蛋白水平,并且下调p-p65、Cyclin E与CDK2水平。结论:连翘酯苷B通过抑制转录因子NF-κB,影响p21/Cyclin E/CDK2信号通路抑制了HeLa细胞增殖。

HPLC法同时测定江西不同产地广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定江西不同产地的广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量。方法:使用 Dia-monsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸(19:81),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长332 nm。结果:连翘酯苷 B、金石蚕苷进样量分别在0.2～2.0μg和0.28～2.8μg范围内,与峰面积呈良好线性关系;连翘酯苷 B 及金石蚕苷的平均回收率(n=6)分别为97.7%和101.8%,RSD 分别为1.0%和1.7%。结论:本法简便、准确,重复性好,可作为广东紫珠药材的质量控制方法。

HPLC法同时测定两种抗宫炎软胶囊中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量

目的:建立同时测定用脂溶性和水溶性基质制备的抗宫炎软胶囊中有效成分连翘酯苷B和金石蚕苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,Thermo Hypersil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(14∶86);流速0.8 m L/min;检测波长332 nm;柱温30℃。结果:连翘酯苷B与金石蚕苷对照品进样量分别在0.02443~2.03575μg(r=0.9999)、0.02400~2.00002μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为103.3%(RSD=1.8%)、96.2%(RSD=0.4%)。所测8批样品连翘酯苷B和金石蚕苷含量分别为1.6744~2.9924mg/g、2.2271~3.4162 mg/g。结论:该方法简便、稳定、重复性好,可为抗宫炎软胶囊质量控制提供依据。

连翘酯苷B对肺炎克雷伯菌外排泵活性的影响

目的研究连翘酯苷B对肺炎克雷伯菌外排泵活性的影响,探讨连翘酯苷B抗菌的作用机制。方法收集10株临床对环丙沙星敏感的肺炎克雷伯菌,用环丙沙星逐步诱导直至细菌MIC不再升高为止,将诱导后菌株作为实验对象,与连翘酯苷B共培养,采用溴化乙锭(EB)蓄积实验比较连翘酯苷B作用前后菌株外排泵活性的变化。结果连翘酯苷B的亚抑菌浓度为512 mg.L-1。连翘酯苷B作用前后的菌株在加入外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)后胞内荧光量均明显高于各自未加CCCP的荧光量。有8株细菌不论加或不加CCCP,其经连翘酯苷B作用后的荧光量均高于连翘酯苷B作用前的荧光量;2株细菌在连翘酯苷B作用前后外排泵活性无明显变化。结论外排泵普遍存在于肺炎克雷伯菌中,连翘酯苷B可抑制肺炎克雷伯菌外排泵的活性。

独一味中洋丁香苷和连翘酯苷B对照品的制备

目的研究从独一味中分离制备连翘酯苷B和洋丁香苷对照品的方法。方法结合大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、制备HPLC法分离制备独一味中连翘酯苷B和洋丁香苷单体。结果分离制备的连翘酯苷B的质量分数达98.93%,洋丁香苷的质量分数达99.91%。结论该方法所得洋丁香苷和连翘酯苷B质量分数高,可用于制备中药定性、定量分析使用的对照品。

广东紫珠不同产地、不同部位中连翘酯苷B和金石蚕苷含量的测定

采用反相高效液相色谱法，对江西、湖南、贵州等地的广东紫珠及其不同部位茎枝、叶、果实中的连翘酯苷B和金石蚕苷进行含量测定。连翘酯苷B和金石蚕苷进样量分别在0．106—3．18，0．1052—3．156Ixg，与峰面积呈良好线性关系，平均回收率分别为99．01％，100．13％，RSD分别为1．2％，0．9％。广东紫珠连翘酯苷B和金石蚕苷含量以产地江西萍乡芦溪的较高，江西萍乡芦溪地区三年生广东紫珠茎枝叶果实部位连翘酯苷B和金石蚕苷含量，叶〉茎枝〉果实。测定结果为广东紫珠药材质量评价和资源合理利用提供实验依据。

不同产地广东紫珠的连翘酯苷B和金石蚕苷含量测定及指纹图谱

采用高效液相色谱法测定了广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量,并建立了HPLC指纹图谱比较不同产地广东紫珠的质量差异。含量测定结果显示,不同生长环境、不同生长年限的广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷含量相差比较大。广东紫珠山地2年生栽培品、农田3年生栽培品和野生品的连翘酯苷B和金石蚕苷含量较接近,生长半年的种苗及一年采2次的栽培品与野生品中上述2个成分含量差异较大。20批广东紫珠样品的指纹图谱相似度均大于0.9,聚类分析结果显示,生长半年的种苗与其他样品不同,单独聚为一类。本研究可为广东紫珠药材的质量评价提供参考。

HPLC法测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸

目的建立HPLC法同时测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸。方法 Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:275 nm(0~21.0 min检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷)和210 nm(21.0~55.0 min检测去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素、青蒿酸);柱温25℃;体积流量0.9 mL/min;进样量:10μL。结果连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸分别在3.47~69.40μg/mL(r=0.999 5)、18.78~375.60μg/mL(r=0.999 2)、6.64~132.80μg/mL (r=0.999 7)、2.57~51.40μg/mL (r=0.999 5)、4.86~97.20μg/mL(r=0.999 3)、4.23~84.60μg/mL(r=0.999 8)、0.79~15.80μg/mL(r=0.999 1)、2.16~43.20μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为98.76%、100.12%、99.34%、97.57%、98.29%、99.25%、96.87%、98.02%,RSD值分别为1.53%、0.89%、0.91%、1.38%、1.02%、0.83%、1.26%、1.15%。结论所建立的方法结果准确,可用于儿感退热宁口服液中多成分的质量控制研究。

HPLC法同时测定不同来源抗宫炎片中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定抗宫炎片中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量。方法:使用Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸(18:82),流速1.0mL.min-1,检测波长332nm。结果:连翘酯苷B、金石蚕苷进样量分别在0.12～4.7μg和0.12～4.8μg范围内,与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999);连翘酯苷B及金石蚕苷的平均回收率(n=6)分别为99.7%和100.1%,RSD分别为1.8%和1.9%。结论:本法简便、准确,重复性好,可为抗宫炎片的质量控制提供实验依据。

高效液相一测多评法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷

目的建立高效液相一测多评(HPLC-QAMS)法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷。方法以乙腈-0.2%磷酸为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min;Agilent HC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃;检测波长203 nm(测定羧基苍术苷和苍术苷)、275 nm(测定连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷)和254 nm(测定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷)。进行专属性试验、线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验;以连翘苷为内参物,建立该成分与羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷间的相对校正因子,并计算鼻炎片中9种成分的含量,同时与外标法(ESM)的测定结果进行比较,验证该方法的可行性。结果建立了鼻炎片中9种成分的定量控制方法,方法学验证结果符合要求。鼻炎片中各成分的计算值与实测值无显著性差异。结论HPLC-QAMS法适用于鼻炎片的多指标成分质量评价模式,可以为鼻炎片质量控制方法的建立提供参考。

高效液相色谱法同时测定中药连翘药用及非药用部位中7种有效成分含量

[目的]建立同时测定连翘药用部位和非药用部位中连翘酯苷A、连翘酯苷B、紫云英苷、连翘苷、牛蒡子苷、槲皮素和牛蒡子苷元7种化学成分的高效液相色谱(HPLC)方法。[方法]采用反相高效液相色谱法,以AgilentEclipse Plus C18(4.6mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,检测波长为280 nm,体积流量为0.3 mL/min,柱温为30℃。[结果]连翘酯苷A、连翘酯苷B、紫云英苷、连翘苷、牛蒡子苷、槲皮素和牛蒡子苷元分离与线性关系良好,平均回收率分别为100%、99.1%、104%、104%、98.4%、99.0%、103%,RSD分别为2.27%、1.59%、1.94%、1.25%、2.97%、2.10%、2.67%。[结论]该方法分离度好,简便快速,可用于同时检测连翘药用及非药用部位中连翘酯苷A,连翘酯苷B,紫云英苷,连翘苷,牛蒡子苷,槲皮素和牛蒡子苷元的含量,为连翘资源全面质量评价提供依据。

不同产地广东紫珠药材苯乙醇苷类成分含量与抗氧化能力的相关性

采用超声提取广东紫珠中的连翘酯苷B和金石蚕苷,用HPLC法测定其含量,并考察其与抗氧化活性的相关性。色谱柱为sunfire C184.6 mm×250 mm色谱柱;流动相为乙腈:水(含0.1%甲酸)的溶液(18∶82);检测波长为332 nm。抗氧化活性采用DPPH法和铁氰化钾还原法测定。测定结果,广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷含量最高的分别来自江西武宁和萍乡芦溪,相关性分析结果表明,连翘酯苷B和金石蚕苷含量与广东紫珠抗氧化能力均有一定的正相关性。表明不同产地广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量有显著差异;苯乙醇苷类成分为广东紫珠中主要的抗氧化成分,与自由基清除率和总还原力呈正相关。

竹节参皂苷类成分的研究

目的研究中药竹节参皂苷类化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及高效液相色谱等方法,提取分离纯化中药竹节参,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到3个化合物,分别为人参皂苷-Rg2(1)﹑人参皂苷-Rh1(2)﹑人参皂苷-Rk3(3)。结论化合物3为首次从该植物中分离得到。

连翘抗炎药效物质基础筛选研究

主要探索连翘几种成分的抗炎活性,并筛选其抗炎药效物质基础,为连翘抗炎新药的开发提供参考依据。建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型,计算肿胀度。采用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量。对比各组的肿胀度及TNF-α和IL-6的含量。连翘苷对小鼠耳肿胀度及TNF-α和IL-6的生成无明显抑制作用,与空白组相比无显著性差异(P>0.05)。连翘脂素、连翘酯苷A、连翘酯苷B均能有效抑制小鼠耳肿胀及TNF-α和IL-6的生成,与空白组相比有显著性差异(P<0.05)。由此可见对所筛选的连翘4种成分,通过口服给药的方式,连翘抗炎药效物质有连翘脂素、连翘酯苷A和连翘酯苷B。通过口服给药,尚未发现连翘苷的抗炎活性,而连翘脂素、连翘酯苷A及连翘酯苷B显示较强的抗炎活性。同时推测其抗炎机制可能与抑制TNF-α和IL-6这两种炎症因子的生成和多成分作用有关。

HPLC法同时测定裸花紫珠中3种苯乙醇苷类成分的含量

建立了同时测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B含量的方法。采用高效液相色谱(HPLC)法。色谱柱为Luna C18(2)(150mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.1%醋酸溶液(1585,v/v)为流动相;流速为1.0mL/min,检测波长为332nm;柱温为30℃;进样量:10μL。结果表明:毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B分别在0.1044~1.6704、0.1024~1.6384、0.0458~0.5569μg/mL范围内呈良好线性关系(r>0.9999);三者精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;平均加样回收率分别为99.80%、100.83%和100.83%,RSD分别为1.53%、1.45%和1.50%(n=6)。本实验建立的分析方法简单快速、稳定可靠,适用于裸花紫珠药材中3种活性成分毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B含量的同时测定。

UPLC-PDA法同时测定连翘中4种成分的含量

目的建立同时测定连翘中连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘苷、槲皮素4种化学成分的UPLC方法。方法采用Acquity UPLC BEH-C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;以0.2%甲酸溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱(0~15 min,90%~70%A;15~25 min,70%~30%A);柱温35℃,流速0.3 ml/min,检测波长235 nm,进样量2μl。结果使用此种方法能够在25 min内实现了对连翘中4种化学成分的分离,连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷和槲皮素分别在0.42~2.10μg(r=0.9999),0.92~4.60μg(r=0.9999),1.02~3.06μg(r=0.9997),0.098~2.45μg(r=1.0000)范围内与色谱峰峰面积线性关系良好,加样回收率分别为93.48%(RSD=0.81%),97.79%(RSD=1.10%),97.53%(RSD=1.23%),96.29%(RSD=1.88%)。结论该方法操作简单,结果准确,专属性强,可用于连翘药材的质量控制。