连香方药自微乳载药系统的研究

目的:研制连香方药的自微乳载药系统。方法:经溶解度试验初步筛选后,采用三元相图法研究不同表面活性剂、助表面活性剂和油相体系自微乳化的能力和组成区域,筛选表面活性剂和助表面活性剂;在此基础上,考察方药组分、介质、温度等因素对体系自微乳化的能力和组成区域的影响,结合微乳粒径测定,筛选连香方药自微乳处方;进行稳定性及自微乳化速率的考察,初步评价自微乳处方。结果:优化的处方为黄连总生物碱-丁香油-Cremophor RH60-1,2-丙二醇(40∶20∶60∶20,w/w);处方经分散后可得到平均粒径为17.4 nm、PDI为0.176的微乳,稳定性好,自微乳化效率高。结论:优化的处方可作为连香方药的自微乳载药系统供后续研究。

连香微乳灌胃后小鼠血浆中盐酸小檗碱的测定

目的:测定小鼠血浆中的盐酸小檗碱,以考察连香微乳在小鼠体内的生物利用度。方法:采用小鼠单次灌胃给药,在不同时间点取血,建立高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的血药浓度;以连香普通乳为参比,计算连香微乳的相对生物利用度。结果:盐酸小檗碱与血浆中内源性杂质分离度好,线性范围为10.4～156μg/L(r=0.9991),方法回收率在89.6%～94.7%之间,日内和日间精密度RSD≤12.9%;单次灌胃给药后连香微乳和连香普通乳中盐酸小檗碱的AUC0→24 h分别为(688.3±123.7)、(371.4±68.4)μg.h/L;连香微乳相对于连香普通乳的生物利用度为(193.1±63.2)%。结论:建立的高效液相色谱法可用于测定小鼠血浆中的盐酸小檗碱;微乳化可显著提高连香方药中盐酸小檗碱在小鼠体内的生物利用度。

香连化浊方对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜EGFR/MAPK/ERK信号通路的影响

目的 探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的可能作用机制。方法 利用GEO数据库筛选出基因芯片数据集,基于GEO2R工具、GeneCards数据库获得CAG增殖相关差异基因。采用Metascape平台对CAG增殖相关差异基因进行GO分析和KEGG富集分析,寻找与CAG相关的生物过程及重要信号通路,并进行动物实验验证。70只Wistar大鼠,随机抽取14只作为正常组进行常规饲养,其余56只大鼠采用“N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍+饥饱失常+水杨酸钠”联合造模法制备CAG模型。造模成功的50只大鼠随机分为模型组、摩罗丹组和香连化浊方低、中、高剂量组,每组10只。摩罗丹组大鼠给予摩罗丹溶液1.4 g/(kg·d)灌胃,香连化浊方高、中、低剂量组大鼠分别给予香连化浊方溶液36、18、9 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水0.01 ml/g灌胃,各组均每日1次,连续60天。HE法观察大鼠胃黏膜组织病理学变化,透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞超微结构,Western-blot法检测胃黏膜组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1 (p-ERK1)、原癌基因(c-myc)蛋白表达水平,RT-PCR法检测胃黏膜组织EGFR、细胞外信号调节蛋白激酶1 (ERK1)、c-myc mRNA表达。结果 最终得到45个CAG增殖相关差异基因。GO和KEGG富集分析结果显示,可影响正向调控细胞因子的产生、正向调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应、调节氧化应激诱导的细胞死亡等,涉及与癌症通路、MAPK信号通路、辅助性T细胞17(Th17)细胞分化等多个信号通路。HE染色可见各给药组大鼠胃黏膜厚度、固有层腺体排列状态、炎性细胞浸润情况等方面较模型组均有改善,其中以香连化浊方高、中剂量组效果最佳。透射电镜结果显示,与模型组比较,各药物干预后,线粒体结构恢复,内质网肿胀减轻,以香连化浊方高、中剂量组效果较为显著。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜EGFR、p-ERK1、c-myc蛋白及EGFR、ERK1、c-myc mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,香连化浊方高剂量组胃黏膜EGFR及c-myc、摩罗丹组c-myc、各给药组p-ERK1蛋白表达降低,各给药组EGFR、ERK1、c-myc mRNA表达亦明显降低(P<0.05);与摩罗丹组比较,香连化浊方低剂量组c-myc蛋白表达明显升高,香连化浊方高、中剂量组EGFR、c-myc mRNA表达降低,香连化浊方高、低剂量组ERK1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论 香连化浊方治疗CAG可能机制是调控胃黏膜组织EGFR/MAPK/ERK信号通路,阻断细胞异常分化、增殖,从而减轻CAG胃黏膜组织损伤。

基于网络药理学及实验验证探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎大鼠作用机制

目的:基于网络药理学和实验验证,探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的作用机制。方法:利用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、SWISS TARGETS数据库、基因组注释数据库平台(GENE CARDS)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)筛选香连化浊方和疾病的作用靶点,利用STRING数据库、Cytoscape软件构建蛋白互作网络,筛选核心靶点,利用Metascape数据库进行基因本体论(GO)分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。制备CAG大鼠模型后予香连化浊方干预治疗,观察大鼠胃黏膜组织病理学改变,采用免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)对核心靶点进行验证。结果:网络药理学结果显示香连化浊方中口服利用度较高的成分有珊瑚甙、过氧化苯甲酰内酯、芍药花酮等;主要活性成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等作用于192个靶点,生物学途径主要为参与蛋白磷酸化正调控、氧化应激反应、损伤应答、凋亡信号通路等;细胞组分主要包括膜侧、膜筏、细胞外基质、细胞质的核周围区域等;分子功能包括激酶结合、转录因子结合、蛋白域特异性结合、蛋白激酶活性等。KEGG富集通路与磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞凋亡通路。实验验证研究发现香连化浊方治疗后大鼠胃黏膜萎缩病理程度减轻,胃组织核心靶点AKT1、C-MYC的蛋白表达明显下调(P<0.05),胃组织Cmyc mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:香连化浊方中有效成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等可能通过下调Cmyc mRNA、AKT1、C-MYC蛋白表达抑制胃黏膜细胞过度增殖实现对CAG的治疗作用。