17β-雌二醇对大鼠蛛网膜下腔出血后迟发型脑血管痉挛的作用

目的研究17β-雌二醇(E2)对蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发型脑血管痉挛(DCV)的抑制作用。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为5组:①空白组,②假穿刺组,③SAH组,④SAH+E2组,⑤SAH+安慰剂组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中内皮素-1(ET-1)含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测颞叶神经元凋亡情况,通过测定基底动脉血管横截面积判断脑血管痉挛情况。结果实验结果显示SAH后7 d SAH+E2组基底动脉横截面积与SAH组和SAH+安慰剂组相比明显变大(P<0.01);与SAH组和SAH+安慰剂组相比,SAH+E2组血浆ET-1浓度明显减少(P<0.01);TUNEL染色显示SAH+E2组颞叶皮质神经元凋亡程度较SAH组和SAH+安慰剂组显著性减轻。结论持续给予E2维持其生理浓度可以有效预防SAH后迟发型脑血管痉挛,部分可能与E2可以抑制ET-1的产生有关。

促红细胞生成素对迟发型脑血管痉挛抑制作用的实验研究

目的研究全身应用重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对蛛网膜下腔出血后(SAH)迟发型脑血管痉挛(DCVS)的抑制作用。方法清洁级雄性wistar大鼠40只随机分为四组:空白组、SAH组、SAH+rHuEPO组、SAH+安慰剂组。采用枕大池2次注血法建立蛛网膜下腔出血模型。注血后7d取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测测血浆中内皮素-1(ET-1)含量,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测颞叶神经元凋亡情况,通过测定基底动脉血管横截面积判断脑血管痉挛情况。结果实验显示SAH后第7dSAH+rHuEPO组基底动脉横截面积比SAH组和SAH+安慰剂组相比明显变大(P<0.01);血浆ET-1浓度SAH+rHuEPO组与SAH组和SAH+安慰剂组相比明显减少(P<0.01);TUNEL染色显示SAH+rHuEPO组皮质神经元凋亡程度较SAH组和SAH+安慰剂组显著减轻。结论早期全身应用rHuEPO可以有效预防SAH后迟发型脑血管痉挛,并有脑保护作用,部分与rHuEPO能抑制ET-1的产生有关。

迟发型脑血管痉挛致脑缺血后神经元自噬

目的探讨迟发型脑血管痉挛(DCVS)致脑缺血后神经元自噬的现象。方法建立自发性蛛网膜下腔出血(SAH)后DCVS兔模型,检测脑组织含水量以确定模型成功程度。在二次注血后的不同时间处死兔,取痉挛血管供血区域脑组织进行Western印迹、免疫组织化学等检测脑组织中神经元细胞坏死、凋亡和自噬现象。结果 SAH兔模型脑组织中存在神经元细胞坏死、凋亡和自噬现象。梗死后24 h脑组织含水量相比梗死前增多(P<0.05)。Western印迹及免疫组化证实DCVS和神经元细胞自噬存在关联。结论 DCVS致脑缺血组织中存在神经元自噬现象,脑血管痉挛的程度与神经元自噬存在一定的关联性。

上胸段硬膜外应用罗哌卡因纳米微粒对兔迟发型脑血管痉挛的作用

目的探讨上胸段硬膜外应用罗哌卡因纳米微粒对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发型脑血管痉挛(DCVS)的影响。方法将上胸段硬膜外置管成功的新西兰兔75只随机均分为5组(n=15):假手术组、SAH组、纳米粒空载体组、纳米粒载药组和泵注药物组;各组再分为造模后1、7、14 d三个亚组(n=5)。采用枕大池二次注血法制作SAH模型,二次注血后30 min,纳米粒空载体组经硬膜外导管注射等体积纳米微粒空载体,纳米粒载药组注射罗哌卡因纳米微粒(60 mg/kg;含罗哌卡因8 mg/kg),泵注药物组经硬膜外导管接镇痛泵持续泵入0.1%罗呱卡因(1 ml/h)。采用Yamaguchi评分评估神经功能,采用经颅多普勒超声检测基底动脉平均血流速度(Vm)和收缩期峰值血流速度(V_p),ELISA法检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B水平,HE染色光镜下观察基底动脉(BA)形态并测量其管径,免疫组化染色观察BA内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)与内皮素(ET-1)表达。结果造模后1、7、14 d,与假手术组相比,SAH组兔神经功能评分均明显增高(P<0.05),BA V_m和V_p均明显增高(P<0.05),血清NSE和S100B水平均明显增高(P<0.05),BA管径均明显缩小(P<0.05),BA内皮细胞e NOS表达水平明显降低(P<0.05),BA内皮细胞ET-1表达水平明显增高(P<0.05);SAH组与纳米粒空载体组上述指标均无明显差异(P>0.05);与SAH组相比,泵注药物组V_m和V_p显著降低(P<0.05),神经功能显著改善(P<0.05),血清NSE和S100B水平和BA内皮细胞ET-1表达水平显著降低(P<0.05),BA内皮细胞e NOS表达水平显著增高(P<0.05);纳米粒载药组与泵注药物组无明显差异(P>0.05)。结论上胸段硬膜外泵注罗哌卡因能改善兔SAH后DCVS,而硬膜外应用罗哌卡因纳米微粒能够获得同样的效果。

miR-210对大鼠蛛网膜下腔出血后迟发型血管痉挛的防治作用

【目的】探讨mi R-210对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛(DCVS)的防治作用及其相关机制。【方法】取60只清洁级的成年SD大鼠,雌雄不限,随机分3个实验组:SAH组、对照组、mi R-210治疗组,各组的大鼠数量为20只。SAH组:使用枕大池二次注血方案,制作动物模型;对照组:也采用枕大池注射方案,注射内容为生理性盐水;mi R-210治疗组:SAH模型建立后,mi R-210枕大池注射。SAH模型制备成功后第7天取材测量大鼠基底动脉的管径、壁厚,HE染色观察大鼠基底动脉痉挛的情况及病理变化。应用Western blot技术检测基底动脉TLR4和TNF-α的表达。【结果】1实验结果显示SAH组较对照组相比基底动脉管径明显减小,壁厚明显增大(P<0.01);2mi R-210治疗组与SAH组比较基底动脉管径增大、壁厚减小(P<0.01);3Western blot检测的结果表明,同SAH组比较,TLR4、TNF-α的表达水平在mi R-210治疗组中显著降低(P<0.01)。【结论】1mi R-210缓解SAH后CVS的作用,可能是通过降低TLR-4、TNF-α在基地动脉中的表达而实现的。2蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的产生与TLR4信号传导通路有一定的关系。

Toll样受体4拮抗剂防治兔蛛网膜下腔出血后迟发型血管痉挛

目的探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)拮抗剂依立托仑四钠(E5564)防治蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后迟发性脑血管痉挛(delayed cerebral vasospasm,DCV)的作用。方法新西兰大白兔60只随机分为3组,每组20只。模型组枕大池二次注血法建立SAH模型。对照组枕大池内注入0.9%氯化钠注射液。E5564组SAH模型建立后,E5564静脉给药。血管造影及经颅多普勒评估血管痉挛情况,造模后第7天取材,HE染色观察基底动脉痉挛情况。免疫组化和Western blot方法检测基底动脉Toll受体4的表达。结果 SAH后血管痉挛模型造模成功,模型组与对照组比较基底动脉直径明显降低(P<0.01);E5564组基底动脉直径较模型组明显增加(P<0.01);免疫组化及Western blot显示E5564组基底动脉TLR4表达较SAH组明显减少(P<0.05)。结论蛛网膜下腔出血后迟发型脑血管痉挛可能与Toll样受体4信号通路有关,E5564可以明显降低SAH后基底动脉TLR4表达,缓解SAH后迟发型脑血管痉挛。

杜仲缓解蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验研究

目的明确杜仲治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛发生的有效性,及其与内皮素-1的关系。方法 72只日本大耳白兔随机分为3大组,正常组仅做枕大池穿刺注生理盐水。SAH组和杜仲组采用枕大池二次注血法制作迟发性脑血管痉挛模型,杜仲组给予杜仲煎剂每日3 ml/kg灌胃,2次/日,造模成功后在相应的时间段分两批处死,半数甲醛灌注取基底动脉,切片HE染色后,观察形态变化,计算周长,半数处死后快速取脑分离出基底动脉用Western blot方法测定ET-1含量。结果 SAH组较正常组有明显基底动脉血管痉挛,而杜仲组较SAH组血管痉挛有明显缓解。正常组中基底动脉仅表达少量ET-1,SAH组中基底动脉ET-1表达较正常组明显升高(P<0.05),杜仲组较SAH组在蛛网膜下腔出血3~7 d时基底动脉中ET-1含量明显降低(P<0.05)。结论杜仲能有效的缓解蛛网膜下腔出血后引起的脑血管痉挛,并且是通过影响基底动脉中ET-1含量来实现的。

法舒地尔降低TLR4表达缓解蛛网膜下腔出血后血管痉挛的实验研究

目的建立兔蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(DCV)模型,探讨法舒地尔防治DCV的作用及相关信号通路。方法 60只新西兰大白兔分为3组,每组20只。实验组枕大池二次注血法建立SAH模型,对照组枕大池内注入生理盐水,治疗组SAH模型建立后,法舒地尔静脉给药。血管造影及经颇多普勒超声(TCD)评估血管痉挛情况,造模后第7天取材井行苏木素-伊红染色观察基底动脉痉挛情况。免疫组织化学和Mestern blot方法检测基底动脉Toll受体4(TLR4)的表达。结果SAH后血管痉挛模型造模成功,实验组与对照组比较基底动脉直径明显降低(P<0.01);治疗组基底动脉直径较实验组明显增加(P<0.01);免疫组织化学及Mestern blot显示治疗组基底动脉TLR4表达较实验组明显减少(P<0.05)。结论SAH后DCV可能与TLR4信号通路有关,法舒地尔能显著降低SAH后基底动脉TLR4表达,缓解SAH后DCV。