急性一氧化碳中毒大鼠迟发性神经元损伤与记忆功能改变

目的 观察急性一氧化碳 (CO)中毒大鼠脑内迟发性神经元损伤和记忆功能的改变 ,探讨CO中毒导致的迟发性神经损伤和记忆功能改变两者之间的关系。方法 SD大鼠暴露在空气或CO(345 1ppm) 6 0min ,暴露后 1、3、5、7d处死大鼠 ,大脑经处理制成石蜡切片 ,行HE染色以观察脑内病理损伤程度。通过被动回避跳台实验评估CO中毒对大鼠记忆保持巩固能力的影响。结果 大鼠海马CA1区发生迟发性神经元损伤。锥体细胞从CO暴露后第 3天开始显著减少。被动回避跳台实验中 ,CO中毒大鼠从染毒后第 5天开始跳台潜伏期明显缩短 ,记忆力部分丧失 ,出现迟发性健忘症 (delayedamnesia,DA)。结论 急性CO中毒导致迟发性神经元损伤 ,迟发性神经元损伤引起DA。

转化生长因子β-1在全脑缺血再灌注后迟发性神经元坏死时的表达

目的 探讨转化生长因子β- 1(TGF-β1 )在迟发性神经元坏死时对中枢神经系统的保护与修复作用。方法 采用 HE染色、尼氏染色、透射电镜、免疫组化及 RT- PCR技术。结果 常规光镜及电镜观察均显示再灌注后额叶皮质及海马有不同程度的神经元变性、坏死。免疫组织化学结果及 RT- PCR结果均显示皮质与海马区内的TGF-β1 在缺血再灌注后呈明显阳性改变。结论 TGF-β1 在脑缺血损伤时尤其在发生迟发性神经元坏死时可呈现明显强于正常脑组织的表达 ,因此 ,TGF-β1 不仅在脑缺血早期而且在发生迟发性神经元坏死时 。

脑缺血后迟发性神经元坏死的超微病理

大白鼠4VO模型,全脑缺血10分钟后再灌流1、2、3、5、7天和对照共6组。经心脏灌流固定后取材,电镜下观察。缺血后1天出现核膜不规则、粗面内质网增生,多聚核蛋白体解聚;胞浆内出现致密物和脂褐素颗粒。2天时除上述改变外可见高尔基氏器肿胀,粗面内质网呈板层状排列,神经网肿胀,空泡形成。3天时主要表现核基质肿胀,异染色质增多并附着于核膜;线粒体肿胀、嵴破坏,少数线粒体基质致密,内含绒毛状致密物;高尔基氐器肿胀,周围出现被膜小泡。树突内和突触内可见大量致密小泡。5天和7天时,大部分神经元空化,神经细胞核周围和树突内出现大量的原纤维,胞质内和树突内可见一种指纹状包涵体,呈螺旋状;另一种神经细胞的改变为变暗、固缩,树突迂曲,最后完全崩解。

缝隙连接对局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及神经行为学的影响

目的探讨阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡(DND)及神经行为学的影响。方法术前2h左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(CBX),对照组左侧脑室注射生理盐水,颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。术后72h采用尼氏染色检测海马迟发性神经元死亡,术后24h和72h进行神经行为学评分,数据进行统计学分析,观察阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血72h后海马迟发性神经元死亡及神经行为学的影响。结果不用CBX预处理,大脑中动脉缺血模型72h后有45%的动物出现海马DND,用CBX预处理后,DND发生率降到30%,较对照组明显降低(P<0.01)。CBX干预组的行为学评分明显比对照组低(P<0.01)。结论阻断缝隙连接可以减少局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡的发生率,改善局灶性脑缺血术后动物行为学表现。

扩散性抑制对脑缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的为了研究阻断大鼠局灶性脑缺血诱导的扩散性抑制对同侧海马迟发性神经元死亡的影响。方法颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用电生理学方法记录扩散性抑制波,尼氏染色和TUNEL染色检测海马迟发性神经元死亡;观察阻断局灶性脑缺血再灌注诱导的扩散性抑制对海马迟发性神经元死亡的影响。结果不给予SD阻断剂,大脑中动脉缺血模型有39%的动物出现海马迟发性神经元死亡;用MK-801阻断扩散性抑制后仅10%的动物出现海马迟发性神经元死亡,机率明显减小。结论局灶性脑缺血引起的海马迟发性神经元死亡可能与扩散性抑制由缺血区不断向远隔部位播散有关。

全脑缺血再灌注后迟发性神经元坏死与细胞因子bFGF的相关性研究

目的 探讨细胞因子 b FGF在迟发性神经元坏死时表达的动态变化及对中枢神经系统起到的保护与修复作用。方法 采用了 HE染色、尼氏染色、透射电镜、免疫组化及 RT- PCR等技术。结果 常规光镜及电镜观察均显示再灌注 1～ 7d额叶皮层及海马有不同程度的神经元变性、坏死。免疫组化学结果及 RT- PCR检测均显示皮层与海马区缺血组织 b FGF在缺血再灌注后呈明显阳性表达。结论 在脑缺血损伤 ,尤其是在发生迟发性神经元坏死时 b FGF可呈现明显强于正常脑组织的表达且贯穿于缺血再灌注全过程中。 b FGF在发生迟发性神经元坏死时 。

周期素依赖激酶抑制剂对大鼠大脑中动脉缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖激酶(CdK)抑制剂--olomoucine对大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的影响。方法 给予大脑中动脉阻塞再灌流大鼠腹腔注射olomoucine,观察再灌流后3,7 d皮层损伤侧海马半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达水平;同时,应用免疫组织化学方法测定再灌流后3,7 d皮层损伤侧海马CAl区神经元细胞核特异性抗原(NeuN)的表达。结果olomoucine能明显抑制大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马PCNA蛋白的表达(P＜0.01),降低caspase-3水平(P＜0.01);同时显著减少了海马CAl区神经元的丢失(P＜0.01)。结论研究表明,olomoucine通过抑制细胞增殖活动、减少caspase-3生成,从而降低局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的发生。

细胞周期调控对大鼠全脑缺血后海马迟发性神经元死亡的影响EFFECTOFCEL

目的 观察细胞周期调控对大鼠全脑缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡 (delayed neuronal death,DND) 以及星形胶质细胞的活化、增殖的影响。方法 建立大鼠短暂性全脑缺血再灌流模型, 利用尼氏染色、TUNEL、免疫组织化学方法观察再灌流后细胞周期素依赖的蛋白激酶 (cyclin depedent kinase, CDK) 抑制剂 Olomoucine 对海马DND以及星形胶质细胞活化增殖的影响。结果 全脑缺血再灌流后 3d、7d、30d海马神经元明显脱失, 部分 CA1、CA2区神经元凋亡; 星形胶质细胞数目增多, GFAP表达上调, 应用Olomoucine后TUNEL阳性神经元数目明显减少, 幸存神经元数目增加; 星形胶质细胞数目无明显增多, GFAP表达明显下调。结论 CDK抑制剂 Olomoucine可有效抑制大鼠全脑缺血后海马神经元DND以及星形胶质细胞活化增殖。

脑缺血-再灌注后海马迟发性神经元死亡的实验研究

目的 :用重复脑缺血 再灌注小鼠模型的海马切片观察迟发性神经元死亡的形态学特点。方法 :用重复双侧颈总动脉夹闭方法制作不完全脑缺血 再灌注动物模型。于造模后 2 4h、72h、7d取材 ,HE染色及原位DNA末端标记法观察海马切片的病理改变。结果 :造模后 7d ,海马锥体细胞出现广泛的细胞坏死 ,以CA1区最明显。使用原位DNA末端标记法 ,在坏死神经元的邻近部位以及CA2 ,CA3区 ,齿状回可见部分膜结构完整的神经细胞核内出现特征性阳性颗粒 ,为细胞核内DNA链断裂所引起的凋亡细胞。结论 :海马神经元的迟发性死亡表现为坏死与凋亡共存现象 ,海马CA1段锥体细胞的病理改变以坏死为主 ,齿状回颗粒细胞的改变以凋亡为主。对于迟发性神经元死亡的病因 ,生物学过程 ,及与神经系统退行性变的关系进行了初步探讨。

阻断缝隙连接对脑缺血后海马迟发性神经元凋亡的影响

目的探讨阻断缝隙连接(gap junction)通讯对大鼠局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡(delayed neuronal death,DND)及Bcl-2蛋白表达的影响。方法术前2h左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX),对照组左侧脑室注射生理盐水,颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用DNA原位末端标记TUNEL技术及免疫荧光技术,观察阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血3d后海马迟发性神经元死亡及BCL-2蛋白表达的影响。结果不给予缝隙连接阻断剂,大脑中动脉缺血模型有45%的大鼠在术后3d出现海马迟发性神经元死亡;用甘珀酸阻断缝隙连接后,30%的大鼠出现海马迟发性神经元死亡,其发生率明显减小(P<0.01);与对照组相比,干预组Bcl-2蛋白的表达较高(P<0.01),两组Bcl-2蛋白的表达均高于假手术组(P<0.01)。结论阻断缝隙连接通讯可以减少局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡的发生率,Bcl-2参与了局灶性脑缺血后海马神经元凋亡的调节。

阻断缝隙连接通讯对局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响

目的:探讨阻断缝隙连接通讯对大鼠局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响。方法:大鼠左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸,对照组左侧脑室注射生理盐水,2h后颈内动脉插线法制备大脑中动脉缺血再灌注模型,采用DNA原位末端标记TUNEL技术及红四氮唑(TTC)染色,观察阻断缝隙连接通讯对大鼠局灶性脑缺血3d后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响。结果:不给予缝隙连接阻断剂,大脑中动脉缺血模型大鼠有45%在术后3d出现海马迟发性神经元死亡;用甘珀酸阻断缝隙连接后30%的大鼠出现海马迟发性神经元死亡,几率明显减小(P<0.01);与对照组相比,干预组的脑梗死体积明显减少(P<0.01)。结论:阻断缝隙连接通讯,局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡的发生率降低,脑梗死体积减小。

内侧隔区预毁损对海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的 :探讨乙酰胆碱 (ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元死亡 (DND)的作用。方法 :46只健康雄性Wistar大鼠随机分为 3组 :Ⅰ 手术对照组 ;Ⅱ MS假性损毁脑缺血再灌组 ;Ⅲ MS预损毁缺血再灌组 ,动物先行MS损毁 ,第 15天再行 4 VO ,使脑缺血 2 0min恢复灌注 72h后取材 ,采用NissleHE和TUNEL染色 ,在光镜下观测计数 ,经统计学处理。结果 :①Ⅱ、Ⅲ组缺血再灌后海马CA1出现迟发性神经元死亡 ;②Ⅲ组较Ⅱ组迟发性神经元损伤明显减轻。结论 :乙酰胆碱参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性损伤过程 。

黄芪多糖对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡影响的实验研究

目的:观察黄芪多糖(APES)对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)的形态学影响,并探讨黄芪多糖对脑缺血损伤的保护机制。方法:用重复双侧颈总动脉夹闭方法制作不完全前脑缺血再灌注动物模型。于造模后3天取材,HE染色及原位DNA末端标记法观察模型组和APES治疗组动物脑缺血再灌注后海马神经细胞迟发性神经元死亡的情况。结果:造模后3天,模型组海马锥体细胞出现广泛的细胞坏死,以CA1区和齿状回最明显。TUNEL染色法显示模型组CA1区坏死神经元的邻近部位以及齿状回可见大量特征性阳性颗粒的凋亡细胞,治疗组坏死及凋亡细胞明显少于模型组(P<0.05)。结论:黄芪多糖减少缺血再灌注对神经细胞的损害,对缺血再灌注后神经元迟发性死亡具有保护作用。

迟发性神经元死亡的研究进展

迟发性神经元死亡(DND)自1982年被首次提出以来,始终是研究者关注的热点。DND的机制复杂,涉及兴奋性氨基酸、扩散性抑制、钙超载、胶质细胞过度活化增殖、线粒体损伤以及自由基过度生成等多种机制。因此,调控胶质细胞细胞周期、改善微环境、清除自由基及抑制兴奋性氨基酸等脑保护治疗有望成为预防迟发性神经元死亡的新途径。

硫酸镁和低分子肝素联合应用对海马迟发性神经元坏死的保护作用

目的 研究硫酸镁和低分子肝素在短暂局灶性脑缺血再灌注后海马迟发性神经元坏死中的保护作用。方法新西兰大白兔夹闭单侧颈总动脉制成模型,缺血30 min再灌注72 h后通过HE染色进行组织观察,同时检测血清中IL-8的含量,探讨硫酸镁和低分子肝素对保护脑的作用机制。结果 硫酸镁联合低分子肝素治疗组迟发性神经元坏死程度显著低于盐水治疗组,低分子肝素能降低缺血再灌注后血清中的IL-8含量。结论IL-8做为一种急性炎症的趋化因子,在脑缺血时升高,可作为脑缺血炎症期或再灌注损伤重要的观察指标之一。硫酸镁没有抗炎作用,单用硫酸镁或低分子肝素的治疗效果,没有联合应用的治疗效果显著。

蛋白激酶C抑制剂对缺血/再灌注海马CAl区迟发性神经元死亡的作用研究

目的:蛋白激酶C与脑组织缺血性损害有密切关系,且证明可调节一氧化氮合成酶的活性。作为PKC抑制剂,灯盏花素可抑制蛋白激酶C的活性,但其对大鼠海马CAl区缺血/再灌注损害的作用和机制需深入研究。方法:四血管闭塞复制大鼠前脑缺血／再灌注模型,观察PKC抑制剂灯盏花素对海马CAl区NO浓度、局部脑血流量及CAl区锥体细胞密度变化的影响。结果:PKC抑制剂灯盏花素对大鼠海马CAl区缺血／再灌注脑组织的作用为降低CAl区局部NO的产生、明显改善脑组织的rCBF和显著降低该区锥体细胞的脱失。结论:PKC抑制剂对大鼠前脑缺血／再灌注所致海马CAl区迟发性神经元死亡的保护作用与其降低局部NO的产生及增加局部脑血流量有密切关系。

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡的保护作用

目的观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡的保护作用。方法夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉20min造成脑缺血模型,再灌注7d后,观察灯盏花素低、高剂量对海马CA1区神经元组织病理学及神经元密度的影响。结果缺血再灌注后灯盏花素组海马CA1区组织学状况明显改善,神经元密度显著增加(与模型组比较P<0.01),且与剂量无明显关系(P>0.05)。结论蛋白激酶C抑制剂灯盏花素能减轻脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡,具有脑保护作用。

大鼠内侧隔区预损毁对海马迟发性神经元死亡的影响

目的 :探讨乙酰胆碱 (ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马迟发性神经元死亡 (DND)的作用。方法 :80只健康雄性Wistar大鼠随机分为 5组。Ⅰ组 :手术对照组 ;Ⅱ组 :单纯内侧隔区 (MS)损毁组 ;Ⅲ组 :单纯脑缺血再灌注组 ;Ⅳ组 :MS假性损毁脑缺血再灌注组 ;Ⅴ组 :MS预损毁脑缺血再灌注组 ,动物先行MS损毁 ,第 15d再行血管阻断 ,使脑缺血 2 0min ,并于恢复灌注 72h后处死 ,将脑采用常规石蜡包埋、切片 ,Nissle、HE和Tunel免疫组化染色 ,在光镜下观测计数海马的神经元数。结果 :①DND细胞主要发生在各缺血再灌注组 (Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组 )的海马CA1区 ,其他各区未发现明显变化 ;②Ⅴ组较Ⅲ、Ⅳ组DND明显减轻 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :ACh参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元损伤过程 。