TLR4/NF-κB信号通路在介导睡眠剥夺诱导膜迷路积水中的作用研究

目的探讨TLR4/NF-κB信号通路在介导睡眠剥夺诱导膜迷路积水中的作用。方法选取30只健康SD大鼠,分为空白对照组、大平台对照组、睡眠剥夺2周组、睡眠剥夺3周组、睡眠剥夺4周组,每组6只。睡眠剥夺组大鼠选用改良多平台睡眠剥夺法进行造模,大平台对照组在小平台上放置网格所制大平台,空白对照组不做处理。实验前后对各组大鼠进行旷场实验评估行为学,行听性脑干反应(ABR)检测评估听力水平;ABR检测结束后腹主动脉取血,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清中TNF-α、MCP-1的水平;解剖耳蜗,HE染色行中阶横截面积(SM)/(中阶+前庭阶横截面积)(SM+SV)比值评价膜迷路积水情况;通过免疫组化染色检测耳蜗中IL-1β、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB P65的表达,观察实验后不同睡眠剥夺时间大鼠听力水平、膜迷路积水程度及TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及下游炎症因子表达水平变化规律,分析大鼠听力水平、膜迷路积水程度与TLR4/NF-κB信号通路的相关性。结果睡眠剥夺组大鼠ABR波II反应阈升高,较空白对照组及大平台对照组均有统计学意义(P<0.01);形态学观察:空白对照组及大平台对照组积水率为0,睡眠剥夺2周组积水率为16.67%,睡眠剥夺3周组积水率为25%,睡眠剥夺4周组积水率为25%;睡眠剥夺组大鼠血清中TNF-α、MCP-1浓度均高于空白对照组及大平台对照组,其中睡眠剥夺4周组TNF-α、MCP-1浓度较空白对照组及大平台对照组均具有统计学意义;睡眠剥夺组大鼠耳蜗螺旋神经节、螺旋器、血管纹螺旋韧带IL-1β、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB P65表达均高于空白对照组及大平台对照组。结论睡眠剥夺可能通过TLR4/NF-κB信号通路对内耳产生影响从而诱导膜迷路积水。

建立标准梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型方法实验研究

目的:研究建立一种操作方法简单、稳定可靠、重现性高的豚鼠膜迷路积水模型。方法:采用腹腔注射醋酸去氨加压素不同给药时间和剂量诱导豚鼠膜迷路积水,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值等为指标,比较不同给药时间和剂量造模方法对指标的影响。结果:不同造模方法均可诱发膜迷路积水,以先注射醋酸去氨加压素4μg/kg,连续注射7d后,将剂量加大为6μg/kg,继续注射3d的造模方法最佳。结论:此法优于现有的其他建立膜迷路积水的方法,推荐优先选用。

不同针灸方法对膜迷路积水模型豚鼠听力及耳蜗形态结构的影响

目的探讨不同针灸方法干预对豚鼠膜迷路积水的效应差异。方法 50只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组、电针组,每组10只。采用腹腔注射醛固酮的方法诱导膜迷路积水模型。各治疗组分别在"百会""听宫"实施相应穴位刺激,每日1次,连续治疗10 d。治疗结束后,行听觉脑干诱发电位测试,观察听阈值。HE染色法观察耳蜗积水程度,计算蜗管横截面积与蜗管加前庭阶横截面积之和的比值(R值)。结果 1针刺组、艾灸组、电针组听阈值均较模型组降低(P<0.01),电针组听阈值较艾灸组、针刺组降低(P<0.01),艾灸组听阈值较针刺组降低(P<0.05)。2针刺组、艾灸组、电针组R值均较模型组降低(P<0.01),电针组R值较针刺组、艾灸组降低(P<0.01,P<0.05),艾灸组R值较针刺组降低(P<0.01)。结论针刺、艾灸、电针刺激"百会""听宫"均能减轻豚鼠膜迷路积水,并且改善耳蜗听功能。电针表现出最好的效应,优于艾灸、针刺;艾灸优于针刺。

眼性前庭诱发肌源电位对迷路积水定位诊断的价值探讨

目的探讨膜迷路积水患者眼肌前庭诱发肌源性电位(oVEMP)的临床特征。方法对40例膜迷路积水患者患者及38例(76耳)年龄、性别与之匹配的健康人进行眼肌前庭诱发肌源性电位(oVEMP)测试,分析对比oVEMPs的引出率及各参数指标。结果 (1)病例组患耳和健耳的oVEMP引出率和振幅均低于对照组;(2)病例组患耳和健耳的oVEMP与对照组oVEMP引出率、峰-峰波幅差异有显著性意义;(3)病例组与对照组振幅比、不对称性比较差异具有著性意义结论 oVEMP可以作为迷路积水异常变化的客观量化评估指标,并迷路积水的确诊提供一定帮助。

醛固酮诱发豚鼠双耳膜迷路积水

目的豚鼠腹腔注射醛固酮建立膜迷路积水的动物模型。方法30只豚鼠平均分成3组。A组:左耳皆行内耳Kimura手术,右耳为对照;B组:经腹腔注射醛固酮0.1mg/(0.1kg·d),连续5d;C组经腹腔注射生理盐水0.5ml/d,连续5d。分别在1、2月时,每组随机各选5只进行血钾、钠、钙离子浓度检查,并观察耳蜗、心、肺、脑、肝和肾病理变化。结果膜迷路积水状况A组1、2月时手术耳皆为中、重度;B组1月时皆为双耳轻度,2月时皆为双耳中、重度;C组双耳皆无积水表现。与C组相比,A组血液电解质无显著变化;B组钾、钙浓度下降,钠浓度升高。30只豚鼠重要脏器皆正常。结论醛固酮能够诱发豚鼠双耳膜迷路积水。

正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的检测正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白(aquaporins,AQPs)的表达,探讨其机理和意义。方法 20只健康豚鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组(膜迷路积水模型组)豚鼠腹腔注射醋酸去氨加压素,4μg·kg-1·d-1,共1周,诱导其内耳膜迷路积水,对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。用免疫组化方法检测两组豚鼠内耳水通道蛋白的表达,并进行比较。结果对照组豚鼠内耳中有AQP0、1、2、3、5、7、8的表达,其中AQP0仅在血管纹和螺旋神经节细胞有较弱的表达;AQP1分布于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节等;AQP2表达在血管纹、Corti’s器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中;AQP3、7、8三者的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中表达,包括Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘、椭圆囊壁、球囊壁、内淋巴囊等;AQP5则表达在Corti’s器、内外螺旋沟、螺旋神经节、螺旋韧带纤维细胞。实验组豚鼠内耳中,血管纹AQP2的表达与对照组较正常豚鼠表达增加,其它亚型AQPs的表达与对照组无明显差异。结论正常豚鼠内耳中有多种AQPs表达,膜迷路积水后豚鼠内耳中AQP2的表达增强,提示膜迷路积水可能与AQP2表达上调有关。

不同方法构建豚鼠膜迷路积水模型的对比研究

目的采用不同的方法建立豚鼠膜迷路积水的动物模型并对相关参数进行对比分析,确定目标建模的有效方法。方法 80只豚鼠分成四组,每组20只,包括手术单耳建模,手术双耳建模,注射醛固酮组,注射血管加压素组。1月后,取存活的豚鼠的颞骨,分别进行火棉胶和冰冻切片,光学显微镜观察建模状况。通过统计学方法,对不同组间动物的成活率、建模的成功率、耳蜗积水特点、以及制片因素对成像效果影响进行对比分析。结果手术的方法可以分别建立单耳模型和双耳模型,成功率100%(22/22),死亡率分别为15%(3/20),75%(15/20)组间有显著性差异P<0.05。药物的方法建立双耳模型,醛固酮组死亡率为5%(1/20),成功率89.4%(17/19);血管加压素组死亡率为5%(1/20),成功率73.7%(14/19),成功率在药物组间有显著性差异P<0.05。手术组总死亡率为45%(18/40),药物组总死亡率为5%(2/40),有显著性差异P<0.01。手术组耳蜗积水程度重度90.9%(20/22),中度18.1%(4/22);药物组耳蜗积水程度重度21%(8/38),中度47.3%(18/38),轻度31.5%(12/38)。火棉胶和冰冻切片的选择不影响组织切片结果。结论根据实验目标进行选择建模方法,可以节约动物成本,提高建模效率。

《金匮要略》泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水模型影响的研究

目的:研究泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水豚鼠模型的影响。方法:采用醋酸去氨加压素复制膜迷路积水模型,以豚鼠颞骨切片耳蜗蜗管面积和蜗管加前庭阶面积之和之比值以及耳蜗及肾的水通道蛋白-2的免疫组化表达为药效学的主要指标,研究泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水豚鼠模型的作用。结果:模型组与正常对照组比较有非常显著性差异(P<0.01);模型组与泽泻汤超临界萃取液治疗组比较有非常显著性差异(P<0.01)。水通道蛋白-2免疫组化表达实验组较模型组减弱。结论:泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水模型有较好作用,且机制可能为抑制其内耳及肾脏水通道蛋白-2的表达。

中耳加压治疗膜迷路积水及其机制的研究

目的探讨中耳加压是否可以抑制豚鼠膜迷路积水,并探究其可能机制。方法将30只豚鼠随机分为3组,每组10只:对照组不做处理;积水组和加压组腹腔注射醋酸去氨加压素1周(4μg/kg·d),制备膜迷路积水模型。且加压组第2、3周放进压力舱行加压治疗。观察3组动物耳蜗形态和功能的变化;用免疫组化方法检测三组豚鼠耳蜗AQP-2的表达。结果①积水组听脑干反应(ABR)听阈值为([58.34±7.79)dB SPL]高于加压组([33.29±3.26)dB SPL]和对照组([20.84±2.13)dB SPL(]P<0.05);②膜迷路积水程度:积水组R值为(0.49±0.11)较加压组(0.36±0.06)膜迷路积水重(P<0.05);对照组无膜迷路积水。③免疫组化实验:AQP-2主要表达在蜗管外侧壁、Corti’s器、螺旋神经节细胞等处,积水组蜗管外侧壁平均灰度值为(134.63±6.64)较对照组(159.36±2.63)、加压组(147.06±4.91)豚鼠AQP-2的表达增加(P<0.05)。结论①中耳加压可显著减轻豚鼠膜迷路积水并改善了耳蜗功能。②中耳加压使膜迷路积水减轻的治疗机制可能与AQP-2的表达下降有关。

自身对照内耳外淋巴钆造影3D-FLAIR成像评估膜迷路积水

目的采用经鼓膜穿刺鼓室内注入对比剂Gd-DTPA后行MR扫描的方法,探讨内耳外淋巴钆造影三维液体衰减反转恢复(3D-FLAIR)成像量化评估膜迷路积水程度的可行性,以及梅尼埃病(MD)时对比剂在耳蜗底转和前庭处的分布特点。方法对66例经临床确诊的单侧MD患者双侧耳均经鼓膜穿刺鼓室内注入Gd-DTPA稀释液,24 h后行内耳3D-FLAIR MR扫描和内耳3D MR水成像(MRH)。选定耳蜗层面和前庭层面,分别测量内耳3D MRH图像上双侧耳蜗底转宽度(d耳蜗)和前庭面积(f前庭),以及内耳3D-FLAIR图像上双侧耳蜗底转外淋巴显影宽度(D耳蜗)、前庭外淋巴显影范围(S前庭)和前庭外淋巴与同层面脑干的信号强度比(SIR前庭)。通过上述数值计算出3D-FLAIR图像耳蜗底转宽度系数R耳蜗(患侧D耳蜗/健侧D耳蜗)、前庭范围系数R前庭(患侧S前庭/健侧S前庭)和前庭/脑干信号系数R SIR(患侧SIR前庭/健侧SIR前庭),比较R前庭与R SIR之间、R耳蜗与R前庭之间有无相关性及相关程度。结果66例单侧MD患者的患侧与健侧的D耳蜗分别是(1.29±0.65)mm和(2.03±0.27)mm、S前庭分别是(5.09±4.59)mm^2和(12.70±2.46)mm^2、SIR前庭分别是(0.48±0.54)和(1.25±0.64),比较差异均有统计学意义(t=8.476、t=10.615、t=7.339,P<0.05),且患侧数值明显低于健侧。R前庭与R SIR呈高度正相关(r=0.890,P<0.01),R耳蜗与R前庭呈低度正相关(r=0.315,P<0.05)。结论基于相应层面内耳3D MRH,内耳外淋巴钆造影3D-FLAIR成像可活体显示膜迷路积水并量化评估积水程度,为MD的诊断与治疗提供影像学依据。MD膜迷路积水时,对比剂在前庭外淋巴的分布范围和分布浓度均明显减少,而对比剂在耳蜗底转与前庭外淋巴的分布范围相关性不明显,提示两处的膜迷路积水程度可能是不均衡的。

速尿对诊断膜迷路积水的临床探讨

为研究速尿试验诊断膜迷路积水的可靠性，对膜迷路积水患者（实验组）及非膜迷路积水的眩晕患者（对照组）各５４例行速尿试验。静脉注射２０ｍｇ速尿，眼震电图（ＥＮＧ）记录用药前后眼震的变化，以用药后眼震最大慢相速度（ＭＳＶ）上升２２．９７％为阳性指标。两组阳性率分别为７０．４％及２５．９％。两组速尿试验阳性患者用药后优势偏向（ＤＰ）阳性率均明显降低，实验组降低率为７７．８％（２１／２７），其中９例降至正常，提示ＤＰ的变化亦有重要意义。全部受试者无１例听功能受损或原症状加重。速尿试验为诊断膜迷路积水的有价值的方法之一。

《金匮》泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的影响

目的:本文探讨《金匮》泽泻汤水煎液对梅尼埃病模型膜迷路积水的影响,为临床治疗本病提高药效学依据。方法:采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制梅尼埃病豚鼠膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值等为指标,研究《金匮》泽泻汤对其的影响。结果:泽泻汤高剂量组、中剂量组与模型组比较,有显著性差异(P<0.05);泽泻汤低剂量组与模型组比较无显著性差异(P>0.05);泽泻汤中剂量组与低剂量组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:《金匮》泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水的程度,证实了本方治疗梅尼埃病的有效性。

外耳道间断加压对豚鼠膜迷路积水及ANP表达的影响

目的 研究外耳道 2 0cmH2 O间断加压对豚鼠膜迷路积水及耳蜗外侧壁心钠素 (ANP)表达的影响。方法 建立豚鼠外耳道间断加压模型 ,常规火棉胶切片观察膜迷路积水的发展 ,用免疫组化S P法研究ANP的表达。结果 2 0cmH2 O间断加压对中耳及内耳均无明显损伤。间断加压使膜迷路积水程度减轻 ;加压组与对照组间反应阈无明显差异。加压耳蜗管外侧壁ANP表达减弱。结论 2 0cmH2 O的压力相对安全 ,可以此为参考进行外耳道加压实验。间断加压可减缓膜迷路积水的发展 ,但对提高听功能无明显效果。耳蜗ANP阳性细胞可能有内分泌或旁分泌作用。

泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究

目的:本文探讨泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究,为临床使用本方提供实验依据,并揭示其可能的作用机制。方法:采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制梅尼埃病膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值、耳蜗的免疫组化AQP-2的表达强度等为指标,研究泽泻汤对其影响。结果:泽泻汤组与模型组的蜗管面积与总面积的比值比较,有显著性差异(P<0.01);免疫组化中AQP-2在泽泻汤组耳蜗表达强度较模型组明显降低。结论:《金匮要略》中的泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水程度的作用,证实了本方治疗梅尼埃病的有效性;并揭示了本方治疗梅尼埃病的作用机制可能是通过直接抑制内耳血管纹、螺旋韧带的AQP-2表达,借助抑制内耳中的AVP-V2R-cAMP途径,从而有利于减轻耳蜗积水。

豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca^(2+)-ATP酶的变化

目的了解Ｃａ２＋ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的变化。方法选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只，左耳装圆窗电极后阻塞内淋巴，经声反应阈（ＣＡＰ阈值）证明膜迷路积水形成；右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ２＋ＡＴＰ酶，在透射电镜下Ｃａ２＋ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果对照耳Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮板及静纤毛、血管纹中间细胞指突膜等处；实验性膜迷路积水后，声反应阈提高，前庭膜、内外毛细胞等处之Ｃａ２＋ＡＴＰ酶颗粒明显减少。结论膜迷路积水后声反应阈提高，前庭膜、内外毛细胞等处Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性明显下降，两者呈负相关。

水通道蛋白1、2、5在膜迷路积水豚鼠耳蜗中的分布及表达研究

目的观察水通道蛋白(aquaporin,AQ)1、2、5(AQP1、AQP2、AQP5)三种蛋白在膜迷路积水豚鼠耳蜗的表达及分布情况,探讨其在内淋巴积液中可能的发生机制。方法选择健康红目豚鼠60只,随机分为空白组(30只)和模型组(30只),模型组给予醋酸去氨加压素6μg·kg-1·d-1腹腔注射10 d,空白组以1 ml生理盐水腹腔注射10 d;常规饲养7天后取出耳蜗,通过免疫组化、Western-blot方法观察AQP1、AQP2、AQP5蛋白在豚鼠耳蜗的分布及表达。结果免疫组化示空白组、模型组豚鼠耳蜗组织中AQP1表达的光密度值分别为0.134±0.021、0.273±0.053;AQP2表达分别为0.089±0.013、0.261±0.100;AQP5表达分别为0.264±0.065、0.151±0.098;与空白组比较,模型组AQP1、AQP2蛋白表达明显上调(P<0.01),AQP5蛋白表达明显下调(P<0.05)。Western-blot示空白组、模型组豚鼠耳蜗组织中AQP1表达分别为0.214±0.034、0.313±0.032;AQP2表达分别为0.283±0.050、0.544±0.042;AQP5表达分别为0.291±0.041、0.199±0.033;与空白组比较,模型组AQP1、AQP2蛋白表达上调(P<0.01),AQP5蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论AQP1、AQP2、AQP5蛋白均可能参与了豚鼠耳蜗膜迷路积水的发生。

《四型突发性聋患者内耳膜迷路积水的临床观察》摘译

突聋的确切病因和病理机制尚不明确,其病因假说聚焦于微循环障碍、病毒感染或自身免疫性疾病等。2002年初Tran等提出内耳膜迷路积水(EH)与听力下降之间存在一定联系,Nagawama及Nakashima等提出的内耳膜迷路磁共振的3D-FLAIR成像推动了相关研究。本研究纳入单侧突聋患者,进行鼓室内注射钆内耳膜迷路MRI检查(3D-FLAIR序列),运用课题组提出的容积参考评分系统(VR评分)评估膜迷路积水程度,旨在探讨EH在四型单侧突聋中的分布。