牛至渣饲料发酵过程中迷迭香酸等活性成分的变化规律研究

本试验旨在研究中草药牛至渣微生物发酵过程中迷迭香酸、绿原酸、总苷、多酚、总酚酸等活性成分的变化规律,为生产制备绿色、环保的发酵饲料提供理论依据。设计单因素及正交试验考察培养基成分、菌种及发酵条件对上述5种活性成分含量的影响。单因素试验方差分析和显著性检验结果显示:总苷、总多酚和总酚酸在发酵20 d时含量最高,迷迭香酸和绿原酸在发酵15 d时含量最高。正交试验结果表明采用高含量菌种发酵中药渣,并以粗麸皮+次粉为辅料,所得饲料营养成分含量最高。其中总苷含量1.351%,迷迭香酸含量2.733%,绿原酸含量12.323%,总多酚含量21.604%,总酚酸含量0.16%。经微生物发酵后,所得牛至渣发酵饲料中总苷、迷迭香酸、绿原酸和总多酚的含量均有显著提高。该研究为生产制备以牛至渣等中药渣为原料的发酵饲料、实现牛至中药材资源的综合开发利用提供参考。

利用纳滤传质模型定量计算迷迭香酸分子状态的实验教学设计

该文设计了利用纳滤传质模型定量计算迷迭香酸分子状态的教学实验。实验以丹参中代表性的酚酸为研究对象,计算了迷迭香酸的纳滤膜通量、传质系数和截留率,构建了迷迭香酸分子态比例定量计算数学模型,对制药过程中的醇沉、树脂吸附、澄清过滤、浓缩、干燥等工艺的转移率和成分存在状态进行了相关性分析,研究了制药工艺成分量值传递的内在机制。实验结果表明,迷迭香酸存在状态对制药工艺中的成分转移率有重要影响。这一结论对提升生产过程的规范化和标准化很有意义。本实验与制药生产热点问题相结合,通过科研反哺教学,有助于增强学生的科研素养和实践能力,并实现科研应用与教学拓展的协同提升。

迷迭香酸对子痫前期大鼠炎症和内皮功能障碍的影响

目的 探究迷迭香酸(RA)对子痫前期(PE)大鼠的治疗作用及机制。方法 从孕第11天开始,对孕鼠连续4 d每天皮下注射左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,200 mg/kg)建立PE大鼠模型,将30只成功建模的大鼠随机分为3组:模型组、50RA组(50 mg/kg RA)和100RA组(100 mg/kg RA),每组10只。另选10只同期孕鼠作为对照组。孕第15天时,50RA组和100RA组大鼠灌胃不同浓度RA,对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,连续灌胃7 d。孕第21天时,检测各组大鼠的收缩压(SBP)、24 h尿蛋白、胎鼠体质量和死亡率,并对胎盘组织进行苏木精-伊红(HE)染色,对肾脏组织进行过碘酸-雪夫(PAS)染色。按照试剂盒说明检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。使用ELISA试剂盒检测大鼠血清中细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1的水平。通过Western blot检测胎盘组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞功能相关抗原(LFA-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠的SBP和24 h尿蛋白水平升高(P<0.05),胎鼠体质量降低(P<0.05),胎鼠死亡率升高(P<0.05),胎盘和肾脏组织出现明显损伤,血清SOD水平降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6、IFN-γ和MCP-1水平升高(P<0.05),胎盘组织中ICAM-1、LFA-1、VCAM-1、TLR4和MyD88的蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,50RA组和100RA组大鼠的SBP和24 h尿蛋白水平均降低(P<0.05),胎鼠体质量均升高(P<0.05),胎鼠死亡率均降低(P<0.05),胎盘和肾脏组织形态明显改善,血清SOD水平均升高(P<0.05),MDA水平均降低(P<0.05),血清IL-1β、IL-6、IFN-γ和MCP-1水平均降低(P<0.05),胎盘组织中ICAM-1、LFA-1、VCAM-1、TLR4和MyD88的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与50RA组相比,100RA组大鼠的SBP和24 h尿蛋白水平降低(P<0.05),胎鼠体质量升高(P<0.05),胎盘和肾脏组织形态明显改善,血清SOD水平升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05),血清IL-1β、IL-6、IFN-γ和MCP-1水平降低(P<0.05),胎盘组织中ICAM-1、LFA-1、VCAM-1、TLR4和MyD88的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 RA有效减轻了PE大鼠的病理改变,RA可能通过减轻TLR4信号通路介导的炎症、氧化应激和内皮功能障碍来发挥其对PE的治疗作用。

基于Wnt/β-catenin通路探究迷迭香酸对结直肠癌上皮-间质转化的抑制作用

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞恶性行为的影响及机制。方法通过收集2019年1月至2020年12月在如皋市人民医院接受手术治疗的初诊未经治疗的CRC患者的肿瘤组织以及正常人的结肠组织,用免疫组化和Western blotting方法检测β-catenin的表达,分析与临床分期、预后和免疫浸润的关系。CCK-8检测10、15、20μmol/L的RA对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力变化;Western blotting检测凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及Wnt/β-catenin通路的相关蛋白表达情况。CRC SW480细胞系悬液皮下接种制作移植瘤小鼠模型,150 mL/kg RA溶液灌胃,观察RA对移植瘤生长的影响,ELISA检测了血清炎症因子变化。结果正常结肠组织中β-catenin的表达很低,而CRC组织中β-catenin的表达明显增高。在CRC患者β-catenin高表达组中,肿瘤大于5 cm的患者数显著高于低表达组,而患者总生存期却显著小于低表达组(P<0.05)。各浓度RA组细胞增殖显著抑制,且呈浓度依赖性降低(P<0.05)。移植瘤小鼠模型中,RA处理组凋亡蛋白Bax和Bad表达较对照组显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05)。同时可见SW480细胞的侵袭和迁移能力显著被抑制(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加,Snail、N-cadherin和Vimentin表达显著减少(P<0.05),而且Axin和GSK-3β表达增加,β-catenin表达减少(P<0.05)。结论RA可能通过干预Wnt/β-catenin通路介导的EMT抑制SW480的生物学活性。

迷迭香酸⁃锌配合物的抗氧化和抗菌性研究

目的:研究迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)和锌(zinc,Zn)离子络合后的结构、抗氧化性、抗菌性和生物相容性。方法:利用扫描电子显微镜、红外和紫外⁃可见光谱分析迷迭香酸锌配合物(RA⁃Zn)的结构。通过细胞增殖实验比较RA和RA⁃Zn对成骨细胞增殖活性的影响,通过铁离子还原抗氧化能力实验和2,2⁃联氮⁃二(⁃3⁃乙基苯并噻唑⁃6⁃磺酸)二铵盐[2,2′⁃azinobis(3⁃ethylbenzothiazoline⁃6⁃sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]自由基清除实验分析两者的抗氧化性,最小抑菌浓度法比较两者对金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果:成功合成了RA⁃Zn。作用第5天,RA⁃Zn促进成骨细胞增殖的作用优于RA(P<0.05),200μmol/L RA⁃Zn的抗氧化能力比RA更强(P<0.05)。RA浓度≥400μmol/L、而RA⁃Zn浓度≥25μmol/L时能抑制金黄色葡萄球菌活性(P<0.05)。结论:RA和Zn离子络合后抗氧化性和抗菌性增强,具有促进成骨细胞增殖的作用。

迷迭香酸共价偶联对β-乳球蛋白结构及性质的影响

以β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)为对象,探究膳食多酚迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)共价偶联对蛋白结构和性质的影响。采用自由基法和碱法制得β-LG-RA共价偶联复合物;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、傅里叶变换红外光谱、紫外吸收光谱、荧光光谱、圆二色光谱等技术,分析RA共价偶联后β-LG结构变化规律;通过对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率检测及酶联免疫吸附测试,评价β-LG与RA共价偶联前后抗氧化性和与血清特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合能力的变化。结果表明:RA共价偶联后β-LG的二级结构由α-螺旋向β-折叠和无规卷曲转变,蛋白的二、三级结构发生改变。此外,与β-LG相比,β-LG-RA共价偶联复合物的抗氧化性显著增强,与血清特异性Ig G的结合能力显著减弱。综上,RA共价偶联通过引入酚羟基增强了蛋白的抗氧化性,改变了β-LG的结构,降低了其与血清特异性IgG的结合能力。

基于网络药理学与脂质组学探讨迷迭香酸缓解食物过敏的效应机制

为研究迷迭香酸缓解食物过敏的效应机制,利用网络药理学和分子对接以及脂质组学探究迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)缓解食物过敏的效应机制。利用数据库分析平台(TCMSP)、Swiss Target Prediction、Pharm Mapper、Super Pred和Gene Cards等获得RA的潜在效应靶点。通过软件Cytoscape和String数据库构建“活性成分-靶点”蛋白互作(PPI)网络,并采用AutoDockTools软件进行分子对接验证。进一步通过建立卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)食物过敏小鼠模型验证RA缓解食物过敏的效应,并基于高分辨质谱对小鼠血清进行脂质代谢分析。结果表明,网络药理分析共筛选到关联靶点46个。基因本体(Geno ontology,GO)富集分析表明RA主要通过对蛋白质磷酸化、鞘糖脂、磷脂和类固醇等的结合发挥作用。京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析表明关联靶点主要富集在Th1和Th2细胞分化通路、脂代谢和炎症性肠病通路等。动物实验结果显示RA干预可以显著(P<0.05,P<0.01,P<0.001)抑制OVA致敏引起的小鼠血清过敏反应介质上升,且RA干预组小鼠血清总胆固醇(Total Cholesterol,T-CHO)和甘油三酯(Triglyceride,TG)水平下降。脂质组学分析中,在正/负离子模式下分别筛选出25/36种潜在差异脂质代谢物。对脂质差异代谢物的富集分析表明,小鼠的血清脂质代谢影响甘油磷脂代谢和鞘脂代谢通路。因此,本研究表明RA主要通过调节脂质代谢和机体炎症反应发挥缓解食物过敏的作用。

基于PI3K/Akt通路探究迷迭香酸对自身免疫性甲状腺炎大鼠的作用及机制

目的基于磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路探究迷迭香酸对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠的作用及机制。方法通过高碘水喂养联合皮下注射甲状腺球蛋白及弗氏佐剂来诱导建立AIT大鼠模型,随机分为4组:模型组、迷迭香酸低剂量(20mg/kg)组、迷迭香酸高剂量(40mg/kg)组、迷迭香酸高剂量(40mg/kg)+IGF-1(PI3K/Akt激活剂,0.75μg/kg)组,每组10只,另选10只SD大鼠,正常水喂养并皮下注射等剂量生理盐水作为对照组,以迷迭香酸和IGF-1分组处理后,ELISA测量大鼠血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)水平;HE染色检测各组大鼠甲状腺组织病理损伤;免疫组织化学染色检测各组大鼠甲状腺组织CD45R表达;TUNEL染色检测各组大鼠甲状腺细胞凋亡情况;ELISA测量大鼠血清中Th细胞分泌的炎症相关因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17、IL-10水平;免疫印迹实验检测各组大鼠甲状腺组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠TGAb、TPOAb、IFN-γ及IL-17水平、病理损伤评分、CD45R相对阳性表达、甲状腺细胞凋亡率、p-PI3K/PI3K、p-AKT/Akt明显升高(P<0.05),IL-4、IL-10水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,迷迭香酸低剂量组、迷迭香酸高剂量组大鼠TGAb、TPOAb、IFN-γ及IL-17水平、病理损伤评分、CD45R相对阳性表达、甲状腺细胞凋亡率、p-PI3K/PI3K、p-AKT/Akt均降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平均升高(P<0.05),且高剂量迷迭香酸作用更强;IGF-1可减弱迷迭香酸对AIT大鼠的作用。结论迷迭香酸可通过阻断PI3K/Akt通路激活来调控Th细胞因子分泌,从而抑制免疫炎症反应,减轻甲状腺组织淋巴细胞浸润及甲状腺细胞凋亡,改善AIT大鼠症状。

迷迭香酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

自饲料禁抗实施后,寻找绿色、安全和高效的抗生素替代品成为畜牧业发展的重要环节,其中植物提取物具有很大潜能。迷迭香酸是一种广泛分布在植物中的天然酚酸类化合物,具有抗氧化、抗炎和抗菌等诸多生物学功能,对动物疾病的预防和治疗有一定潜力。本文通过对文献进行分析整理,介绍了迷迭香酸的理化性质与吸收代谢,综述了其抗氧化、抗炎和抗菌等生物学功能以及潜在的作用机理,提示了迷迭香酸对维持动物氧化应激、炎症反应和免疫三方效应稳定有一定作用,但目前对迷迭香酸的研究主要集中在模型动物上,在畜禽方面的研究不够深入,将来还需对迷迭香酸在畜禽机体的作用进行更加深入和全面的研究。

迷迭香酸的生物学功能及其在动物生产中的应用研究进展

迷迭香酸是一种广泛存在于多种植物中的天然酚酸类化合物,可以从紫草科、葫芦科、唇形科等植物中分离得到,具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗癌和抗病毒等多种生物学功能,广泛应用于食品、药物和化妆品等领域。在兽医临床中,迷迭香酸及其来源植物广泛应用于生猪、家禽、反刍动物、水产和兔等多种经济动物的生产中,在调节肠道微生物群落、提高机体免疫力和生产性能等方面具有广阔的应用前景。作者围绕迷迭香酸的生物学功能及其在多种经济动物生产中的应用进行系统综述,旨在为迷迭香酸的基础研究以及在动物生产中的进一步应用与推广提供参考。

迷迭香酸体外抗水痘-带状疱疹病毒的作用及其机制研究

目的研究迷迭香酸(RosA)体外抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)的作用及其机制。方法采用不同浓度的RosA(400、200、100、50μmol/L)处理VZV感染的Vero细胞,采用细胞病变效应(CPE)法和MTT法评价RosA体外抗VZV的作用以及对细胞的毒性,采用RT-qPCR法检测RosA对VZV ORF36 mRNA表达的影响。结果当RosA浓度为100、200、400μmol/L时,RosA对VZV的抑制率分别为55.88%、78.99%和98.19%,其抑制效果与RosA浓度呈正比。当RosA浓度为400μmol/L时,RosA对VZV的灭活率为85.44%,灭活作用的EC_(50)为185.95μmol/L,RosA的CC 50为2362.10μmol/L,EC_(50)为63.02μmol/L,SI为37.48。当RosA浓度为100、200、400μmol/L时,VZV ORF36 mRNA的表达量分别下调了48.2%、85.9%、97.2%。结论RosA在体外具有抗VZV的作用,其抗病毒作用与RosA抑制VZV ORF36的转录有关。

迷迭香酸抑制荷瘤小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用机制

目的 观察迷迭香酸抑制荷瘤小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用机制。方法 建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,根据随机数字表法分为模型组、迷迭香酸组、环磷酰胺(CTX)组,每组5只。迷迭香酸组灌胃给予迷迭香酸,CTX组腹腔注射CTX,模型组灌胃给予等体积0.9%氯化钠注射液,3组均连续给药14 d。比较3组肿瘤生长情况、免疫器官指数、肿瘤组织病理变化、T淋巴细胞(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、CD3^(+)、CD4^(+)凋亡率、肿瘤组织中免疫细胞因子[干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)]水平。结果 给药14 d后,CTX组和迷迭香酸组的肿瘤重量和体积低于模型组(P均<0.01);迷迭香酸组小鼠体质量、胸腺指数和脾脏指数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);CTX组小鼠体质量和胸腺指数低于模型组(P均<0.01),脾脏指数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE切片染色结果显示,模型组小鼠肿瘤组织中肿瘤细胞分布密集且数目丰富,坏死细胞较少;CTX组肿瘤细胞数明显减少,细胞排列稀疏,肿瘤细胞坏死较多;迷迭香酸组出现肿瘤细胞凋亡和坏死,肿瘤细胞数目减少。CTX组脾脏组织中CD3^(+)、CD4^(+)水平高于模型组(P均<0.05),CD8^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);迷迭香酸组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)高于模型组,CD8^(+)水平低于模型组(P<0.05或P<0.01),CD3^(+)水平与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);CTX组荷瘤小鼠脾脏组织中CD4^(+)、CD8^(+)凋亡率高于模型组,迷迭香酸组CD4^(+)凋亡率低于模型组,CD8^(+)凋亡率高于模型组(P<0.05或P<0.01);CTX组与迷迭香酸组肿瘤组织中IFN-γ水平高于模型组,TNF-α、IL-10水平低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论 迷迭香酸可抑制H22肝癌移植瘤的生长,其机制可能为通过调节免疫细胞功能和免疫细胞因子分泌,改善机体肿瘤免疫抑制微环境,减少肿瘤细胞免疫逃逸,发挥抗肿瘤作用。

迷迭香酸对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠的作用及机制

目的探究迷迭香酸(rosmarinic acid,RosA)对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导肺动脉高压(pulmonary arterialhypertension,PAH)大鼠的影响及其作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)、肺动脉高压模型组(MCT,n=10)、迷迭香酸治疗组(MCT+RosA,n=10),MCT组和MCT+RosA组使用MCT(60 mg/kg)单次腹腔注射给药构建PAH模型,对照组单次腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液(60 mg/kg)。与对照组相比,MCT组出现唇部和爪部发绀、呼吸急促、进食减少,肺动脉压力升高,RV/(LV+S)升高,肺血管重构等现象,提示PAH造模成功,第2日起对照组和MCT组每天腹腔注射给予0.9%氯化钠(20 mg·kg^(-1)·d^(-1)×21 d),MCT+RosA组每天腹腔注射溶解于0.9%氯化钠的RosA(20 mg·kg^(-1)·d^(-1)×21 d)。用药21天后检测大鼠平均肺动脉压力(mean pulmonaryarterialpressure,mPAP)、右心室肥厚指数(right ventricularhypertrophyindex,RVHI);HE染色测量肺小动脉重构情况;Elisa检测肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)表达水平;免疫组化检测肺组织中α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、增殖细胞核抗体(proliferating cellnuclearantigen,PCNA)表达水平。结果与MCT组相比,MCT+RosA组mPAP、RVHI降低,肺动脉重构及肺血管纤维化减少,肺小动脉α-SMA、PCNA表达量降低,肺组织SOD表达水平显著增加,MDA表达水平显著减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论RosA可以降低MCT诱导PAH大鼠的右心室收缩压、改善右心室肥厚和肺血管重构,并可能与其降低肺组织氧化应激和肺血管α-SMA、PCNA表达水平有关。

迷迭香酸对笼养樱桃谷肉鸭生长性能、血清抗氧化、免疫功能及肝脏生化指标的影响

试验旨在探究日粮中添加500 g/t迷迭香酸(RA)对樱桃谷肉鸭生长性能、血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。选取1日龄健康樱桃谷肉鸭210羽,随机分为2组,分别为对照组(基础日粮)、RA组(基础日粮+500 g/t RA),试验期42 d,测定肉鸭生长性能、血清抗氧化、免疫功能及肝脏抗氧化指标。结果表明:①与对照组相比,在42日龄时,RA组樱桃谷肉鸭的末重和平均日增重极显著增加(P<0.01),死淘率有降低趋势(P<0.10)。②与对照组相比,RA组樱桃谷肉鸭血清中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著升高(P<0.01),丙二醛(MDA)含量极显著降低(P<0.01)。③与对照组相比,RA组樱桃谷肉鸭血清中免疫球蛋白M(IgM)含量显著升高(P<0.05),免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)含量极显著升高(P<0.01)。④与对照组相比,RA组樱桃谷肉鸭肝脏总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量极显著升高(P<0.01),碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)含量极显著降低(P<0.01),此外,RA组肝脏三酰甘油(TG)含量显著降低(P<0.05)。综上所述,日粮添加500 g/t RA可促进肉鸭生长,提高抗氧化能力、免疫功能以及肝脏蛋白质合成能力,保护肝脏。

生产过程中应用UV-LED光源在线检测迷迭香酸含量的研究

本研究采用275~285 nm波段的UV-LED灯替代氘灯作为迷迭香酸含量检测的单波长光源,优化电路设计,自制UV-LED光源。经验证,光源的性能参数:20 min内280 nm波长下的基线最大漂移量为0.005;波长日内波动绝对差值≤0.414 nm,日间波动绝对差值≤0.827 nm;吸光度日内波动绝对差值≤0.023,波长日间波动绝对差值≤0.039;3天内280 nm波长下的光强波动幅度在2%以内,吸光度波动幅度低于0.008。针对迷迭香酸溶液,经验证UV-LED光源检测结果与氘灯光源检测结果线性相关系数0.99以上,并将UV-LED光源成功应用于在线判定迷迭香酸生产最佳吸附饱和点检测,解决了氘灯光源寿命短、在线检测运行成本高等难题。且自制UV-LED光源光强可调,扩大了光纤光谱仪应用范围,这有助于推动企业实现自动化、数字化的进程。

紫苏籽粕迷迭香酸的亚临界水提取工艺优化及其抗氧化活性

本研究采用绿色环保的亚临界水提取技术从紫苏籽粕中提取迷迭香酸。在单因素实验基础上,采用3因素3水平的响应面分析法,以迷迭香酸的提取得率为响应值,以提取温度(140~180℃)、提取时间(20~40 min)、料液比(1:30~1:50 g/mL)为自变量,确定亚临界水提取的最佳工艺参数。同时,比较了亚临界水提取法和几种常规提取法对迷迭香酸提取得率及其抗氧化活性(DPPH和ABTS自由基清除力)的影响。结果表明,优化后的亚临界水提取工艺参数为:提取温度163℃、提取时间30 min、料液比1:41 g/mL;此条件下,迷迭香酸的提取得率为4.91±0.16 mg/g dw,其清除DPPH和ABTS自由基能力的V_(C)当量分别为10.62和13.46 mgV_(C)/g dw,均显著高(P<0.05)于几种常规提取法。此外,扫描电子显微镜(SEM)结果显示,亚临界水提取后的紫苏籽粕粉末结构更疏松,说明亚临界水更有利于迷迭香酸的提取。

迷迭香酸甲酯通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌细胞凋亡

目的探讨迷迭香酸甲酯(methyl rosmarinate,MR)诱导人肝癌细胞(HCC)Hep-3B、SK-Hep1凋亡的作用及其机制。方法CCK-8法检测各浓度MR(0~200μmol/L)对Hep-3B、SK-Hep1、MIHA细胞的增殖-毒性作用;光学显微镜观察不同浓度MR处理三种细胞后的形态变化;EdU实验及流式细胞术分别检测Hep-3B、SK-Hep1细胞增殖及凋亡情况;Transwell迁移和侵袭实验检测MR对Hep-3B、SK-Hep1细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blotting检测凋亡、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。结果不同浓度MR(0~200μmol/L)处理Hep-3B、SK-Hep1细胞48 h,其细胞活性呈浓度依赖性显著降低(P<0.01),而对MIHA细胞活性无显著影响(P>0.05),Hep-3B、SK-Hep1细胞MR的IC 50分别为102.5μmol/L和99.3μmol/L。MR(0~150μmol/L)处理后显著抑制Hep-3B、SK-Hep1细胞增殖(P<0.05),通过光学显微镜观察到Hep-3B、SK-Hep1贴壁细胞死亡脱落和细胞外形凹陷萎缩,而MIHA细胞形态无明显改变。与对照组相比,100、150μmol/L MR诱导Hep-3B、SK-Hep1细胞凋亡,凋亡蛋白Bax和cleaved PARP的表达显著增加(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著下降(P<0.05);且HCC细胞的迁移和侵袭均被抑制,E-cadherin的表达显著增加,N-cadherin和Vimentin的表达降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,经MR处理的Hep-3B和SK-Hep1的p-Akt和p-mTOR的表达显著降低且呈剂量依赖性,这提示MR可能通过抑制Akt/mTOR信号通路发挥抗癌作用。结论MR促进Hep-3B、SK-Hep1细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。

迷迭香酸通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制喉癌细胞的增殖和迁移

目的探讨迷迭香酸(RA)对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖、迁移的影响,并分析其潜在机制。方法取对数生长期的Hep-2和TU686细胞,分为对照组(未处理的Hep-2和TU686细胞)、低剂量组(20μmol/L的RA处理)、中剂量组(50μmol/L的RA处理)、高剂量组(100μmol/L的RA处理)、胰岛素生长因子1(IGF-1)组(10 nmol/mL IGF-1处理)、IGF-1+RA组(100μmol/L的RA与10 nmol/mL IGF-1同时处理)。倒置显微镜观察各组Hep-2和TU686细胞形态;CCK-8法检测各组Hep-2和TU686细胞增殖能力;细胞划痕实验检测各组Hep-2和TU686细胞迁移能力;Western blot检测各组Hep-2和TU686细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果RA可显著抑制Hep-2和TU686细胞的增殖、迁移,降低Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.05);IGF-1可有效逆转RA对Hep-2和TU686细胞增殖、迁移以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制作用(P<0.05)。结论RA可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制LSCC细胞的增殖和迁移。

NLRP3炎症小体在迷迭香酸抑制视网膜色素上皮细胞衰老中的作用

目的研究迷迭香酸(RA)对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19衰老模型的影响,并探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在其中的作用。方法分别用0、20、40、80μmol/L的RA预处理ARPE-19细胞48 h后,加入200μmol/L的H2O2诱导细胞衰老模型,细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞活性,筛选RA的最佳剂量。将ARPE-19细胞分为对照组(CG)、模型组(MG)、RA组(80μmol/L),再次按照上述方法处理细胞。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测细胞衰老,Western Blot法检测细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子2A、1A(P16、P21)、NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)表达。结果(1)RA最佳剂量:80μmol/L的RA干预后ARPE-19细胞活性最高,作为最佳剂量。(2)细胞衰老:与CG组比较,MG组ARPE-19细胞衰老率增加(t=8.642,P=0.000);与MG组比较,RA组ARPE-19细胞衰老率降低(t=7.585,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)NLRP3炎症小体通路关键蛋白:与CG组比较,MG组ARPE-19细胞P16、P21、NLRP3、ASC、Caspase-1表达升高(tP16=8.483,tP21=8.111,t_(NLRP3)=6.976,t_(ASC)=11.550,t_(Caspase)-1=7.300,均P=0.000);与MG组比较,RA组ARPE-19细胞P16、P21、NLRP3、ASC、Caspase-1表达降低(tP16=4.342,P=0.004;tP21=4.580,P=0.005;t_(NLRP3)=4.022,P=0.007;t_(ASC)=4.243,P=0.005;t_(Caspase)-1=4.434,P=0.004),差异均有统计学意义。结论RA预处理可以减轻H2O2诱导的ARPE-19细胞衰老,该效应可能与RA下调H2O2刺激下NLRP3炎症小体的表达有关。

迷迭香酸及咖啡酸的ESI四级杆飞行时间高分辨质谱裂解规律研究

为了研究咖啡酸和迷迭香酸的质谱裂解规律,使用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF/MS)对咖啡酸和迷迭香酸对照品进行了0~40 eV碰撞能下的二级质谱分析,观察碎片离子丰度变化,以总结二者裂解行为。实验发现咖啡酸在质谱裂解中极易脱羧基形成m/z 135.04碎片离子,高碰撞能下继续裂解脱去水分子或氢自由基;迷迭香酸酯键两端均可断裂,分别形成m/z 197.04、m/z 179.03碎片离子,高碰撞能下这两种碎片离子可进一步裂解生成m/z 123.02和m/z 135.04碎片离子。实验提供了一种使用ESI-Q-TOF/MS研究化合物质谱裂解规律的方法。