单细胞退变寡核苷酸引物PCR-比较基因组杂交研究

目的 探索单细胞退变寡核甘酸引物PCR(DOP-PCR) -比较基因组杂交 (CGH)技术应用于单细胞全基因组分析及着床前胚胎遗传学研究的可能性。方法 建立单个淋巴细胞的DOP -PCR技术 ,分别以正常男性的组织DNA和单细胞DOP -PCR产物为参照 ,进行正常男、女性和X单体、X、13和21三体单细胞DOP-PCR产物的CGH。结果 X染色体在以组织DNA为参照的CGH中呈假性过度表达,13、21三体未能显示阳性结果。以单细胞DOP -PCR产物为参照的CGH不仅能正确反映X和Y拷贝数 ,而且能显示13和21三体相应染色体的过度表达。结论 单细胞DOP-PCR存在非随机的不均匀扩增 ,其对CGH的影响 ,能通过应用单细胞DOP -PCR产物为参照而得以纠正。单细胞DOP-PCR

单细胞的DOP—PCR—CGH分析

为探索退变寡核甘酸引物多聚酶链反应(DOP-PCR)比较基因组杂交(CGH)单细胞基因组研究的可能性,用DOP-PCR扩增正常XX、XY,异常XO、XXY、13三体和21三体单个细胞基因组DNA,经萤光标记后,分别以正常男性基因组DNA和正常男性单个淋巴细胞DOP—PCR产物为参照,进行CGH分析。结果以基因组DNA为参照的CGH双色荧光强度比均数波动围大,约30％区域的标准差超过正常允许范围,X染色体呈假性过度表达,未能检出13,21三体。以单细胞DOP-PCR产物为参照的CGH强度比均数接近期望值1.0,仅6％的标准差超出正常波动范围,13和21三体的相应染色体大部分常染色质区过度表达。结论:单细胞DOP-PCR存在非随机的不均匀扩增,其对CGH的影响,能通过应用单细胞DOP-PCR产物为参照而得以纠正。单细胞DOP-PCR-CGH及其用于着床前胚胎及母体血胎儿单细胞全基因组研究具有可能性。