超声引导下针刀松解黄韧带对兔退变腰椎间盘整合素α5、β1表达的影响

背景:针刀松解黄韧带可有效改善腰椎退行性患者的症状,超声引导可增加针刀松解的精准性,但针刀松解黄韧带后对退变椎间盘的具体影响及可能的机制尚待明确。目的:探讨超声引导下针刀松解黄韧带对兔腰椎间盘退变的作用。方法:取24只新西兰兔,采用随机数字表法分为对照组(n=6)与造模组(n=18)。造模组采用横断L5/6、L6/7节段棘上、棘间韧带并保持站立姿势对腰椎施加轴向载荷的方式建立兔腰椎间盘退变模型,造模成功后再随机分为模型组、超声针刀组、假针刀组,每组6只,超声针刀组在超声引导下使用针刀松解L7/S1右侧黄韧带,假针刀组针刀入路同超声针刀组,但不松解黄韧带,1次/周,共4次。针刀干预后30 d,利用MRI观察L7/S1椎间盘髓核信号强度变化,苏木精-伊红染色观察L7/S1椎间盘形态变化,免疫组化染色检测L7/S1椎间盘髓核内Ⅰ,Ⅱ型胶原表达,RT-PCR、Western Blot检测L7/S1椎间盘中整合素α5、β1、p38、核因子κB的表达。结果与结论:①MRI成像显示,模型组兔椎间盘髓核呈灰-黑色,髓核灰度值明显低于对照组(P<0.01);超声针刀组兔椎间盘髓核亮度较模型组升高,髓核灰度值高于模型组(P<0.01);②苏木精-伊红染色显示,模型组髓核形状不规则,髓核细胞数量减少,细胞外基质被压缩,纤维环破裂,终板结构与边界不清,软骨细胞排列紊乱;与模型组相比,超声针刀组髓核细胞数量增多,纤维环破裂情况有改善,软骨终板细胞排列较为规则;③免疫组化染色显示,与对照组比较,模型组髓核内Ⅰ型胶原阳性表达增加(P<0.01),Ⅱ型胶原阳性表达减少(P<0.01);与模型组比较,超声针刀组髓核内Ⅰ型胶原阳性表达减少(P<0.01),Ⅱ型胶原阳性表达增加(P<0.01);④RT-PCR、Western Blot检测显示,与对照组比较,模型组兔椎间盘中整合素α5、整合素β1、p38、核因子κB的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,超声针刀组兔椎间盘中整合素α5、整合素β1、p38、核因子κB的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.01);⑤结果表明,超声引导下针刀松解黄韧带可改善兔腰椎间盘退变程度,该作用与通过调控整合素α5、β1表达、抑制p38和核因子κB表达有关。

人退变腰椎间盘特异性表达microRNA的靶基因及JNK信号转导通路在椎间盘退变中的分子生物学机制

目的探讨筛选人退变腰椎间盘特异性表达microRNA靶基因JNK信号转导通路在椎间盘退变过程中的分子生物学机制。方法选取腰椎退行性疾病患者10例为研究组,术中均切除退变髓核组织块。选取腰椎爆裂性骨折接受前路减压髓核切除术患者4例为对照组,术中均切除正常髓核组织块。收集到的髓核组织分别进行髓核细胞分离、培养、鉴定,并提取总RNA;使用microRNA微阵列芯片方法筛选得到差异表达的microRNA,采用实时q PCR技术验证其中高表达者,采用Targetscan6.2软件进行靶基因预测,并分析靶基因和差异表达基因功能明显相关的信号通路;定量PCR方法对筛选的结果进行验证。结果在人退变腰椎间盘组织中microRNA.494和microRNA.513a.5p呈明显的高表达,比值分别为2.8351、2.1157,与验证结果一致。预测靶基因分别为MKK4、Jun D,分别处于JNK信号通路的上游和下游,参与JNK信号传导。结论 microRNA.494和microRNA.513a.5p在人退变腰椎间盘中高表达,相应的靶基因为MKK4、Jun D;JNK信号转导通路在人退变腰椎间盘发病机制中发挥关键的正负反馈调节作用。

Toll样受体4及白细胞介素-23、白细胞介素-17A在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)及白细胞介素-23(IL-23)、IL-17A在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其临床意义。方法选取2019年2月—2022年2月青海大学附属医院收治的97例腰椎间盘突出症(LDH)患者作为研究组。另选取同期该院行前路减压内固定切除的脊柱骨折患者58例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组腰椎间盘髓核组织TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量。比较研究组不同腰椎间盘退变等级患者TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量,分析研究组TLR4与IL-23、IL-17A mRNA相对表达量的相关性。结果研究组TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05)。V级组TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量高于Ⅱ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组(P<0.05),Ⅳ级组高于Ⅱ级组、Ⅲ级组(P<0.05),Ⅲ级组高于Ⅱ级组(P<0.05)。重度腰痛组TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量高于中度腰痛组(P<0.05)。重度腰椎功能丧失组TLR4、IL-23、IL-17A mRNA相对表达量高于中度腰椎功能丧失组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,研究组退变腰椎间盘髓核组织TLR4 mRNA相对表达量与IL-23 mRNA、IL-17A mRNA相对表达量呈正相关(r=0.662和0.671,均P<0.05)。结论LDH患者退变腰椎间盘髓核组织TLR4、IL-23、IL-17A异常高表达,且与LDH患者腰椎间盘退变等级、病情严重程度关系密切。

HIF-1α和GLUT-1在人体退变腰椎间盘中的表达及意义

目的:研究低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(glucosetransporter-1,GLUT-1)在人体退变腰椎间盘髓核中的表达及意义。方法:对照组为取自青壮年腰椎爆裂性骨折患者的正常椎间盘髓核组织;实验组取自临床患者退变椎间盘髓核组织,依据术前MRI影像表现分为2组。术中所取标本分别进行免疫组织化学染色及RT-PCR检测,比较3组椎间盘髓核组织中HIF-1α和GLUT-1的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果:免疫组织化学结果显示在正常人类腰椎间盘组织中HIF-1α和GLUT-1的表达呈弱阳性,中度退变组中HIF-1α和GLUT-1的表达为阳性,重度退变组中HIF-1α和GLUT-1的表达为强阳性,且随着腰椎间盘组织退变的程度加重其表达也进行性加强(P<0.01)。RT-PCR结果显示,HIF-1α和GLUT-1基因存在于人体椎间盘髓核组织中,3组患者差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HIF-1α和GLUT-1均可能参与了人类腰椎间盘组织的退变过程,二者在人体退变腰椎间盘组织中有相同的增高趋势。可以考虑通过检测HIF-1α和GLUT-1在椎间盘组织中表达来检测腰椎间盘组织退变情况,从而为预防和治疗腰椎间盘退变的提供新思路和切入点。

白介素-1α在退变腰椎间盘中的分布与神经根性疼痛的相关性

目的研究白介素-1α(IL-1α)在退变腰椎间盘中的表达与分布,探讨其在坐骨神经痛发生机制中的作用。方法收集30例腰椎间盘突出症手术切除的椎间盘组织,每例在3个部位取材:(1)凸入椎管内与神经根紧贴的椎间盘组织(A组);(2)软骨终板间的椎间盘(B组);(3)软骨终板(C组)。6份正常髓核取自4例急性腰椎外伤骨折患者。应用IL-1α单克隆技术,采用SP免疫组化染色技术,对标本中IL-1α表达水平进行检测。结果IL-1α表达水平A组明显高于B组及C组(P<0.05)。结论IL-1α在退变腰椎间盘3个部位均有表达,但分别不一致;腰椎间盘突出症术后坐骨神经痛不能缓解,可能与残留椎间盘中IL-1α有关。

NALP3炎性体、骨形态发生蛋白在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及意义

目的探究退变腰椎间盘髓核组织中NALP3炎性体、骨形态发生蛋白(BMP)的表达及意义。方法在我院选取2017年6-2018年6月接受治疗的80例腰椎间盘突出症患者,患者手术切除标本中取出退变椎间盘髓核组织块,另外选取在我院行前路减压内固定切除的脊柱骨折患者椎间盘的正常椎间盘髓核组织块制作标本待用。对待测标本进行免疫组化染色,使用Western Blot检测NALP3、BMP-2表达。分析NALP3、BMP-2与腰椎间盘突出症患者腰椎间盘退变等级、腰部负荷程度的关系,并分析NALP3、BMP-2之间相关性。结果腰椎间盘组患者中NALP3表达显著高于正常组(P<0.05),BMP-2表达低于正常组(P<0.05);Ⅴ级患者NALP3水平高于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05),BMP-2水平低于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05);重程度患者NALP3水平高于很轻、轻、中程度(P<0.05),BMP-2水平低于很轻、轻、中程(P<0.05);NALP3、BMP-2之间进行Pearson相关性分析,NALP3、BMP-2之间呈负相关(r=-0.269,P=0.016)。结论退变腰椎间盘髓核组织中NALP3升高,BMP-2降低,且与患者退变等级、病情严重程度密切相关,为临床上腰椎间盘突出症的诊治提供理论参考。

Ad-hBMP-2转染体外培养人退变腰椎间盘细胞的研究

[目的]研究人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(Ad-hBMP-2)转染体外培养人退变腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞影响。[方法]成人退变腰椎间盘细胞体外培养,通过免疫组化和染色体分析鉴定椎间盘细胞。利用免疫荧光和蛋白印迹法检测不同转染剂量对细胞BMP-2表达的影响。[结果]体外培养成人退变腰椎间盘细胞第2代鉴定具有其结构功能。转染后通过免疫荧光和蛋白印迹法可见随转染剂量增加BMP-2表达量逐渐增加。[结论]Ad-hBMP-2可高效转染体外培养人退变椎间盘细胞,同时随转染剂量增加BMP-2表达量逐渐增加。

MMP⁃13、BMP⁃2及P16在退变腰椎间盘髓核中的表达及临床意义

目的分析基质金属蛋白酶⁃13(MMP⁃13)、骨形态发生蛋白⁃2(BMP⁃2)及P16在退变腰椎间盘髓核中的表达及临床意义。方法选取2017年8月至2020年8月于本院进行手术治疗的90例腰椎间盘突出症患者的髓核组织作为研究组,同时纳入同期于本院进行前路或后路腰椎骨折手术治疗的50例患者经病理及MRI证实为正常椎间盘组织作为对照组。比较两组MMP⁃13、BMP⁃2及P16表达水平差异及其平均灰度值。采用Pearson相关分析退变腰椎间盘髓核MMP⁃13、BMP⁃2及P16与椎间盘退变等级的相关性。结果研究组患者MMP⁃13、BMP⁃2及P16阳性表达率显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。研究组患者MMP⁃13、BMP⁃2及P16平均灰度值水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关系数分析显示:退变腰椎间盘髓核MMP⁃13、BMP⁃2及P16表达与椎间盘退变等级呈正相关关系(P<0.05)。结论MMP⁃13、BMP⁃2及P16水平在退变腰椎间盘髓核中呈异常表达状态,且与椎间盘退变等级显著相关,其表达情况可作为评估椎间盘退变程度的可靠依据。

电针对退变腰椎间盘兔模型M-ENK、β-内啡肽、Netrin-1表达的影响及相关性研究

目的:观察电针对退变腰椎间盘模型兔脊髓背角中甲硫脑啡肽(M-ENK)、β-内啡肽及背根神经节中Netrin-1含量及相关性的影响,探讨电针改善盘源性腰痛的可能作用机制。方法:随机选取4只新西兰大白兔作为正常组,并随机选取12只实验兔予以轴向椎体加压诱导退变腰椎间盘模型,造模成功后随机分为模型组、电针组和假电针组,每组各4只,另随机选取4只不予轴向椎体加压处理作为假模型组。电针组取L_(4)、L_(5)双侧夹脊穴,连接电针仪治疗,疏密波,频率2/15 Hz,强度1~2 mA,20 min/次,1次/d,一疗程6次,共治疗4个疗程;假电针组针刺L_(4)、L_(5)夹脊穴夹持电针但不通电,其余操作同电针组。治疗结束后,Western blot法检测各组实验兔L_(2)脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽以及背根神经节中Netrin-1蛋白表达,直线相关分析法分析M-ENK、β-内啡肽的表达与Netrin-1之间的相关性。结果:与正常组比较,模型组退变腰椎间盘相应背根神经节中Netrin-1蛋白表达明显下降;脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与电针组比较,假电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白明显减少(P<0.05)。直线相关分析法Netrin-1蛋白含量与M-ENK、β-内啡肽之间均存在正相关性(R^(2)=0.66、R^(2)=0.51)。结论:电针可上调背根神经节中Netrin-1的表达,改善盘源性疼痛,其作用可能与上调脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽的表达有关。

人退变腰椎间盘组织中p53与IL-1β、IL-6表达

目的实验研究人退变腰椎间盘组织中p53与IL-1β、IL-6表达。方法选择30例本院所收治的腰椎间盘突出症患者2018年5月-2019年10月作为本研究的时间范围,另选取30名于我院体检的健康志愿者,全部患者均采集其血清,对血清实施western blot技术检测,对比2组p53、IL-1β、IL-6表达及阳性检出情况。结果实验组p53、IL-1β、IL-6表达高于参照组,实验组p53(80.00%)、IL-1β(86.67%)、IL-6(70.00%)阳性检出率高于参照组(10.00%、20.00%、16.67%),组间具有明显差异,P<0.05。结论腰椎间盘退变患者与健康志愿者相比,p53与IL-1β、IL-6表达水平明显升高,说明三者在人腰椎间盘组织退变过程中发挥作用。

夹脊电针对兔退变腰椎间盘组织中decorin蛋白表达的影响

目的:观察夹脊电针对兔退变腰椎间盘组织中核心蛋白聚糖(decorin)蛋白表达的影响,探讨夹脊电针防治腰椎间盘退变的作用机制。方法:将40只新西兰大白兔随机分成4组:正常组、模型组、假模型组和电针组,每组各10只。正常组:自然饲养,不予任何处理;模型组:在实验兔L4、L5椎体间横穿克氏针,并施以轴向加压造模器加压28d,不做治疗;假模型:同模型组,但不予椎体间加压,不做治疗;电针组:于造模成功后第1天开始进行电针治疗,疗程为28d。各组实验兔在术后第28d、第56d两个不同的时间点取出腰椎间盘组织,通过Western blot检测其中decorin蛋白表达的情况。结果:模型组术后第28天、第56天及电针组术后第28天核心蛋白聚糖含量与正常组及假模型组术后第28、56天相比明显下降(均P<0.05);模型组术后第56天较本组术后第28天核心蛋白聚糖含量进一步下降(P<0.05);电针组术后第56天核心蛋白聚糖含量与本组术后第28天时及模型组术后第56d天明显上升(均P<0.05)。结论:decorin参与了腰椎间盘退变的进程,随着腰椎间盘的退变的发生而表达下调;夹脊电针治疗可以使兔退变椎间盘组织中decorin的蛋白表达上调,通过纠正基质降解与合成代谢之间的失衡来达到延缓椎间盘退变的作用。

人退变腰椎间盘中细胞凋亡与Bax及半胱胺酸蛋白酶蛋白3基因的表达

目的检测人腰椎间盘组织中的细胞密度、细胞凋亡率以及Bax和半胱氨酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)的表达,为深入了解人腰椎间盘退变的机制提供实验依据,并为将来通过生物学方法延缓腰椎间盘退变提供新的思路。方法实验组30个椎间盘标本(L2～S1)来自27例行后路腰椎间盘切除椎间融合手术自愿捐赠的患者,男18例,女9例;年龄30～72岁,平均51.09岁。所有病变节段均经MRI证实,患者术前均未接受椎间盘造影、胶原酶髓核溶解或椎间盘激光汽化术。对照组20个标本(L2～S1)来自5例青年男性意外死亡者新鲜尸检腰椎间盘;年龄24～37岁,平均30.83岁。采用HE染色观察凋亡软骨细胞、凋亡小体和细胞密度,TUNEL染色法检测人腰椎间盘中的凋亡细胞率,用SP免疫组织化学法检测Bax及Caspase-3表达,图像分析Bax及Caspase-3的平均灰度值。结果HE染色示对照组、实验组软骨终板和髓核内的平均细胞密度分别为(17.16±1.22)、(12.41±0.95)个/HP,二者差异有统计学意义(P<0.01)。TUNEL染色观察示对照组的软骨终板与髓核内的平均凋亡细胞率为6.97%±0.92%,低于实验组的12.59%±0.95%(P<0.01)。SP免疫组织化学染色示对照组髓核内Bax、Caspase-3染色阳性细胞率分别为11.02%±1.18%和9.01%±1.00%,均低于实验组的19.29%±1.18%和15.07%±0.97%,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组腰椎间盘髓核内Bax、Caspase-3的平均灰度值分别为187.33±7.88和185.68±3.26,实验组分别为124.98±6.69和160.13±4.37,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。将全部腰椎间盘标本进行Pearson相关分析,对照组和实验组腰椎间盘凋亡细胞率与细胞密度间成负相关,相关系数r分别为-0.88和-0.93(P<0.01);两组髓核内Bax、Caspase-3阳性细胞率与凋亡细胞率之间成正相关,相关系数r分别为0.83和0.91(P<0.01)。结论细胞密度下降参与了人腰椎间盘的退变过程,Bax和Caspase-3的表达上调在人腰椎间盘髓核细胞的凋亡过程中有一定作用。

电针夹脊穴对兔退变腰椎间盘组织中二聚糖表达的影响

目的:通过研究电针夹脊穴对兔退变的腰椎间盘中二聚糖表达的影响,探讨其作用机制。方法:选用36只清洁级成年新西兰大白兔,建立椎体间压力诱导椎间盘退变的模型,随机分为4组:正常组、假手术组、模型组和治疗组,治疗组给予电针夹脊穴治疗。每组内又分为3个时间点:术前、术后28d、56d;取出椎间盘组织,应用免疫荧光技术检测各组不同时间点二聚糖蛋白的表达。结果:术后28d,模型组、治疗组二聚糖蛋白免疫荧光平均光密度均较假手术组显著下降(均P<0.01);术后56d,治疗组二聚糖蛋白免疫荧光平均光密度较术后28d时明显升高,且较模型组术后56d明显升高(均P<0.05)。结论:椎间盘退变的发生可使二聚糖阳性表达下调,电针夹脊穴可以通过增加二聚糖的阳性表达,纠正基质合成与分解代谢失衡,达到防治椎间盘退变的效果。

FasL-844T/C基因多态性与退变腰椎间盘髓核FasL表达的关系

目的研究FasL-844T/C基因多态性、腰椎MRI和退变的腰椎间盘髓核组织中FasL表达之间的关系。方法采集105例腰椎间盘突出症患者静脉血和髓核组织;利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析对FasL-844T/C基因多态性进行了检测;采用S-P法染色检测FasL在髓核组织中的表达。结果 MRI研究发现,与CC基因型携带者相比,携带TT基因型的个体腰椎间盘退变的积分显著增高(P=0.003);与CC基因型携带者相比,TT基因型携带者髓核细胞表达FasL的积分有统计学差异(P=0.048),但CT基因型携带者与CC基因型携带者之间髓核细胞表达FasL的积分无统计学差异(P=0.264);腰椎间盘退变积分和椎间盘髓核组织FasL表达无相关性。结论 FasL-844T/C基因多态性与腰椎间盘突出症患者的椎间盘髓核组织FasL表达存在相关性;腰椎间盘退变积分和椎间盘髓核组织FasL表达无相关性。

人退变腰椎间盘中HIF-1α和COX-2的表达相关性及其意义

目的研究在人类退变的腰椎间盘中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2 COX-2)的表达相关性以及两者在腰椎间盘退变过程中的意义。方法取40例手术摘除的退变腰椎间盘组织与6例正常椎间盘组织,通过免疫组化染色方法,测定各组中HIF-1a和COX-2的表达量,统计学分别描述退变椎间盘中COX-2因子与HIF-1α因子之间的关系。结果HIF-1α因子、COX-2因子在正常椎间盘中表达很少或几乎不表达,退变椎间盘内阳性表达分别为45%,42.5%。HIF-1α因子和COX-2因子在退变的髓核内表达程度正相关(P<0.01,r=0.406)。结论人类退变腰椎间盘中HIF-1α因子、COX-2因子表达存在相关性,且在腰椎间盘退变过程中发挥重要作用。

白介素-1β转换酶对退变腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节

目的观察白介素-1β转换酶(ICE)在退变腰椎间盘组织中的表达,探讨与细胞凋亡的关系。方法应用免疫组化及流式细胞术测定50例退变腰椎间盘组织和10例正常腰椎间盘组织ICE的表达及细胞凋亡率。结果腰椎间盘组织中ICE的表达部位在软骨细胞的胞浆,退变腰椎间盘组织表达阳性率为90%,高于正常腰椎间盘组织的30%,P<0.01;阳性细胞含量为(78±13)%,高于正常腰椎间盘组织的(25±10)%,P<0.01;相对蛋白含量(FI值)为1.63±0.18,高于正常腰椎间盘组织的0.56±0.09,P<0.01;退变及正常腰椎间盘组织细胞凋亡率为(71±10)%,(20±10)%;ICE表达的FI值与腰椎间盘组织细胞凋亡率呈正相关(r=0.527,P<0.05)。结论ICE参与了腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,并在腰椎间盘退行性变发生和发展中有一定作用。

枸杞多糖对实验性退变腰椎间盘中基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对大鼠退变腰椎间盘中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响。方法将雄性SD大鼠42只,分为假手术组、模型组、LBP药物组,每组14只。采用手术方法制作大鼠腰椎间盘退变模型,LBP药物组在造模后4周,每天上午8时灌胃给药,80 mg/kg,容量为1 ml/kg,连续4周。假手术组及模型组分别灌胃给予等容量生理盐水,连续4周。在造模后8周3组所有大鼠再次麻醉,取出椎间盘组织,HE染色观察椎间盘的形态学变化,免疫组织化学法检测腰椎间盘中MMP-3表达的变化。结果形态学观察结果显示,假手术组髓核细胞数目较多,形态多样性;模型组髓核细胞稀少,细胞基质见大量的空泡;LBP药物组髓核细胞有不同程度的变性、坏死,但较模型组退变程度轻。免疫组织化学结果显示,模型组腰椎间盘组织中MMP-3阳性染色强度高于假手术组(P<0.05);LBP药物组腰椎间盘组织中MMP-3阳性表达较模型组低(P<0.05),而与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LBP抑制大鼠退变腰椎间盘组织中MMP-3的表达,可能对细胞外基质中蛋白多糖有间接降解的作用,从而延缓或抑制实验性椎间盘的退行性改变。

淫羊藿苷对家兔退变腰椎间盘组织中Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对家兔退变腰椎间盘组织中Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的影响,探讨淫羊藿苷防治腰椎间盘退变的作用机制。方法:用随机数字表法将30只家兔分为实验组、模型组和空白组,每组10只。实验组和模型组采用髓核穿刺抽吸法复制腰椎间盘退变模型。术后4周,实验组按3 mg/(kg·d)的剂量灌胃淫羊藿苷,模型组和空白组用等量生理盐水灌胃,连续4周。术后4周和术后8周,各组分别取5只用空气栓塞法处死后切取椎间盘组织。HE染色观察其组织病理学变化,免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原的表达水平,间苯三酚分光光度法检测蛋白多糖的含量。结果:术后4周,空白组髓核组织内基质成分高,密度均匀,染色深,其间有大量髓核细胞,核深染,胞浆淡染;实验组和模型组髓核内基质及髓核细胞部分消失,被深染的纤维组织和梭形的成纤维细胞取代。术后8周,空白组髓核成分同术后4周比无明显变化;而模型组髓核的基质及髓核细胞大部分消失,染色变浅,大量成纤维细胞和纤维组织形成;实验组髓核基质成分较高,髓核细胞减少。术后4周,与空白组比较,模型组Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达水平降低(P<0.05)。术后8周,与空白组比较,模型组Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达水平升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可通过上调Ⅱ型胶原的表达、增加蛋白多糖的含量来延缓腰椎间盘退变。

退变腰椎间盘组织中MMP-3、IL-1、TNF-α的表达变化及意义

目的观察退变的腰椎间盘组织中基质金属蛋白酶3(MMP-3)、白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化,并探讨其意义。方法行手术治疗的腰椎间盘突出症患者40例,术中取退变的椎间盘组织(研究组)。另取20例行手术治疗的脊椎骨折患者的正常椎间盘组织作对照。采用ELISA法分别测定两组椎间盘组织中的MMP-3、IL-1及TNF-α。结果研究组椎间盘组织中MMP-3、IL-1及TNF-α表达水平分别为(20.45±3.48)、(13.68±3.23)、(11.54±3.11)pg/mL,对照组分别为(5.11±0.71)、(2.66±1.16)、(3.54±1.38)pg/mL,两组相比,P均<0.05。结论退变腰椎间盘组织中MMP-3、IL-1及TNF-α的表达水平高于正常,三者可能在腰椎间盘组织退变过程中起着重要作用。

TGF-β_1基因转染修饰人退变腰椎间盘髓核细胞的临床研究

目的:研究分析转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染修饰人退变腰椎间盘髓核细胞。方法:选取珠海市人民医院2012年10月至2014年10月收治的60例腰椎间盘退变患者,将其随机分为观察组和对照组,每组30例,观察组使用含有TGF-β1基因的腺病毒载体转染修饰细胞,对照组用EGFP基因(增荧光绿色蛋白基因)转染细胞。观察比较两组相应的编码蛋白表达情况。结果:观察组患者细胞中出现了生长因子TGF-β1,转染率约为30%,对照组没有出现生长因子,但是外源基因均转染成功,有绿色荧光表达,且持续了一个月。结论:使用腺病毒载体能将TGF-β1基因转染患者退变的腰椎间盘髓核细胞,使之产生生长因子TGF-β1,这为腰椎间盘退变的基因治疗提供了基础。