退火温度T_m对小麦SSR扩增结果的影响探究

以西科麦4号、N 48和铭贤169为材料,探究退火温度Tm对小麦SSR扩增结果的影响。在最佳PCR扩增体系下,55对小麦SSR的Xgwm引物中,除去18对无扩增产物的引物外,余下可以分为Tm对扩增结果无影响和Tm对扩增结果有不同影响2大类。结果表明,退火温度Tm对扩增结果有影响且每对引物都有其扩增的合适扩增温度。

乙型肝炎病毒全长基因组的扩增

目的:探讨扩增乙肝病毒全长基因组合适的PCR反应条件。方法:设计针对负链5′末端引物,PCR一步法扩增乙肝病毒全长基因。改变PCR反应条件,决定最佳退火温度和最佳引物浓度,并观察不同乙肝病毒DNA模板量对PCR扩增效率的影响。结果:最佳退火温度为68℃,最佳引物浓度为0.5μmol/L,模板量在150拷贝以上能扩增出乙肝病毒全长基因,但模板量达到105拷贝抑制扩增效率。结论:退火温度为68℃、引物浓度为0.5μmol/L、乙肝病毒DNA模板量在150～105拷贝为乙肝病毒全长基因扩增的合适PCR反应条件。