苹果退绿叶斑病毒组织印迹的免疫法检测与定位

用组织培养技术将富士苹果茎尖外植体建立在ＭＳ培养基中，形成试管苗。取４—６周龄的茎与愈伤组织，徒手切取约１ｍｍ厚的横切面，印迹在硝化纤维膜上。印迹组织经封闭后，与ＣＬＳＶ碱性磷酸酶标抗体反应。对反应结果进行显色。感染ＣＬＳＶ的印迹组织呈紫色反应，正常组织无显色反应。结果表明，该方法十分容易检测印迹组织中的ＣＬＳＶ。带毒愈伤组织较茎的显色反应敏感，显色反应时间仅为茎的一半（１５ｍｉｎ）。ＣＬＳＶ在愈伤组织中有两种分布情况：一是所有组织均有显色反应；二是呈不均匀分布。ＣＬＳＶ在茎组织中有三种分布情况：第一，除髓部外，表皮、皮层及维管系统中均有分布；第二，不均匀分布，ＣＬＳＶ集中分布于表度组织中，在皮层及韧皮部仅有少量分布；第三，“嵌合”分布，即同一种组织中部分组织带毒，部分为正常组织。