鸡胚接种鸡白介素18重组质粒对IBDVDNA疫苗免疫增强作用的研究

用鸡白细胞介素18(ChIL-18)重组质粒(pCI-ChIL-18)接种18胚龄SPF鸡胚,利用适时荧光定量PCR方法对试验鸡不同时间点的动态变化进行检测。检测结果表明,胚胎接种pCI-ChIL-18使ChIL-18在鸡血液中早期持续高浓度存在,能促进鸡脾脏和法氏囊中ChIL-18基因的大量表达。用pCI-ChIL-18与传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白DNA疫苗分别免疫18胚龄SPF鸡胚,设1日龄雏鸡肌肉免疫对照组和空白对照组,2周龄时二免,6周龄时用IBDV标准强毒株BC6/85攻击。结果表明,胚胎免疫pCI-ChIL-18能显著促进试验鸡T、B淋巴细胞的早期增殖反应,增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的早期抗体水平及其对强毒攻击的保护力。并进一步证明胚胎免疫pCI-ChIL-18对IBDV多聚蛋白DNA疫苗的早期免疫效果具有显著的增强作用(P<0.05)。

乙型肝炎不同感染阶段HBV-DNA载量与病程的关系

目的 探讨乙型肝炎患者不同感染阶段HBV DNA的载量及与病程的关系。方法 用时间分辨荧光免疫分析系统和适时荧光定量PCR(FQ PCR)方法同时检测 2 99例不同感染阶段的乙型肝炎患者血清中HBeAg及HBV DNA的含量。 结果 不同病程阶段HBV DNA载量和HBeAg的含量是不同的 ,二者呈显著正相关 ,急性乙型肝炎的HBV DNA的载量与慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化比较有统计学意义 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。在乙型肝炎血清免疫标志物的不同模式中 ,HBeAg阳性 /ALT异常组中HBV DNA的载量最高 ,HBeAg消失的乙型肝炎患者血清中HBV DNA的载量显著降低 ,但未发现HBeAg消失时HBV DNA载量的阈值 ;HBeAg阳性组、HBeAg阳性 /HBeAb阳性组、HBeAb阳性组的HBV DNA载量均有明显差异 ,且与HBeAg的含量呈显著正相关。结论 HBV DNA的载量和HBeAg的含量不仅是乙型肝炎病毒复制的直观依据 ,也是激发机体免疫反应而引起肝脏损伤的重要原因之一 ,而且对乙型肝炎的早期诊断、传染性的判断及抗病毒治疗方案的制定、药物的筛选及药物的疗效考核等均具有重要的价值。

锌指蛋白A20基因沉默载体制备及初步应用

目的设计并制备有效干扰细胞内锌指蛋白A20（简称A20）表达的基因沉默载体，初步用于观察A20基因沉默对细胞炎症应答的影响。方法人工设计并合成A20特异性RNA干扰寡核苷酸片段（ASRF），构建A20基因沉默载体pSUPER～EGFP—A20 siRNA。采用基因转染技术使人单核细胞株THP1感染pSUPER—EGFP—A20 siRNA，用适时荧光定量PCR技术鉴定转染细胞A20基因的沉默率；用ELISA测定细胞核内NF—κB活性及培养上清液中的TNF—α水平。结果在设计的2条ASRF中，以M59465—385R／F对细胞A20表达的抑制效果最佳，基因沉默率达83．86％。初步应用表明，A20基因沉默后THP1内NF—κB活性水平增加了78．13％，释放的TNF—α增加了49．30％。结论成功得到了高效A20基因沉默载体，初步应用研究提示A20表达的意义在于下调细胞炎症应答程度。