乙型肝炎病毒逆向点杂交基因分型法建立及应用

目的 利用逆向点杂交技术建立乙型肝炎病毒(HBV)基因分型新方法,通过对HBV DNA阳性血清抽样标本进行基因分型,了解佛山地区HBV基因型分布状态。 方法 以HBV基因组的X区序列为主设计分型引物与探针,将活性氨基标记的探针依次固定在尼龙膜上,制成检测膜条。用标记生物素的引物进行HBV DNA扩增,将扩增产物与检测膜条杂交,以POD与TMB显色,判断基因分型结果,通过与基因测序结果比较确定新方法的有效性。从佛山地区HBV DNA阳性患者血清中随机抽取300份,用新建方法进行HBV基因分型检测。 结果 新建HBV逆向点杂交基因分型方法可对拷贝数在103～109/ml之间的300份HBV DNA阳性抽检血清进行基因分型,发现B型147例,占49.0％;C型136例,占45.3％;D型1例,占0.3％;B、C混合型12例,占4.0％;C、D混合型4例,占1.3％;未发现A、E和F型。新方法基因分型结果与测序结果一致。 结论 利用逆向点杂交技术可以准确有效和简便经济的进行HBV基因分型,适用于临床检测与流行病学研究;在佛山地区,人群中感染的HBV以B、C型为主。