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用逆转录多聚酶链式反应从凡纳对虾中检出传染性皮下组织和造血器官坏死病毒 被引量:13
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作者 刘荭 高隆英 +1 位作者 史秀杰 江育林 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期185-188,共4页
A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm ... A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm in body size) without clinical signs. With primers 77012R and 77353F, a fragment of 356bp of IHHNV was amplified in RT PCR. The amplified product was sequenced and showed more than 98% homologue with the sequences of other IHHNV strains in Gene Bank. 展开更多
关键词 传染性 皮下组织 造血器官 坏死病毒 凡纳对虾 逆转录多聚 链式反应 高密度养殖 核酸抽取 PCR产物
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逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测石斑鱼神经坏死病毒方法的建立和应用 被引量:2
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作者 龚艳清 陈信忠 《检验检疫科学》 2004年第B12期53-56,共4页
神经坏死病毒是导致石斑鱼等多种海水鱼类暴发性传染病的致病原。根据石斑鱼神经坏死病毒编码核衣壳蛋白的RNA2基因组序列设计的一对特异性引物,用来扩增其中的421bp病毒核酸片段。比较了酚-氯仿法、试剂盒法等3种RNA抽提的方法对神经... 神经坏死病毒是导致石斑鱼等多种海水鱼类暴发性传染病的致病原。根据石斑鱼神经坏死病毒编码核衣壳蛋白的RNA2基因组序列设计的一对特异性引物,用来扩增其中的421bp病毒核酸片段。比较了酚-氯仿法、试剂盒法等3种RNA抽提的方法对神经坏死病毒的核酸抽提效果,结果表明3种方法均适合于RT-PCR方法。实验证明在cDNA过程中,RNA酶抑制剂并非反应所必需。对RT-PCR过程进行了条件优化,建立了一步法的RT-PCR检测方法,在网箱养殖石斑鱼以及育苗场的病鱼检测实践中获得满意效果。 展开更多
关键词 逆转录聚合链式反应 石斑鱼 神经坏死病毒 鱼苗 RNA抑制剂 核酸 酚/氯仿
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胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义 被引量:2
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作者 仇铁峰 陈萍 +1 位作者 丁明 凌夏金 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2008年第5期422-425,共4页
目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔... 目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。 展开更多
关键词 胸腔积液 端粒逆转录 逆转录-多聚反应
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多聚酶链式反应检测生殖器疱疹病毒感染
4
作者 莫冰 黎帆 +1 位作者 余克花 黄孝天 《江西医学院学报》 CAS 1999年第2期93-94,共2页
生殖器疱疹(Genitalherpes,GH)是由单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus,HSV)感染所致的性传播疾病(sexualytransmis-siondisease,STD)。近年来,生殖器HS... 生殖器疱疹(Genitalherpes,GH)是由单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus,HSV)感染所致的性传播疾病(sexualytransmis-siondisease,STD)。近年来,生殖器HSV的感染人数不断增加,已成为公共卫... 展开更多
关键词 多聚链式反应 PCR 生殖器疱疹 疱疹病毒
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多聚酶链反应检测肺炎病人尿样及血清中军团菌DNA
5
作者 张维国 《传染病信息》 1996年第4期159-160,共2页
现行的军团菌检测直接荧光测定法(DFA)敏感性差,痰培养耗时长仅能做回顾性诊断。作者用多聚酶链式反应(PCR)法,设计了一对20-mer引物L5SL9(5′-ACTATAGCGATTTGGAA-3′)和L5SR93(5′-GCGATGACCTACTTTCACAT-3′)扩增55rRNA基因编码区104b... 现行的军团菌检测直接荧光测定法(DFA)敏感性差,痰培养耗时长仅能做回顾性诊断。作者用多聚酶链式反应(PCR)法,设计了一对20-mer引物L5SL9(5′-ACTATAGCGATTTGGAA-3′)和L5SR93(5′-GCGATGACCTACTTTCACAT-3′)扩增55rRNA基因编码区104bp片段。 展开更多
关键词 军团菌 多聚链式反应 快速检测 回顾性诊断 细菌性肺炎 荧光测定 痰培养 多聚反应 血清样品 基因编码区
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免疫酶斑点法检测HIV-1 DNA
6
作者 向左云 王双印 +3 位作者 倪燕萍 王维祥 孙阳 安克贵 《西南国防医药》 CAS 2001年第5期331-332,共2页
多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)在艾滋病毒感染的诊断、检测中起着重要的作用[1].为了确认PCR扩增的片段,常采用放射性标记的核酸探针对扩增产物进行Sorthern杂交.近年来采用生物素、地高辛等非放射性标记物的技术得到... 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)在艾滋病毒感染的诊断、检测中起着重要的作用[1].为了确认PCR扩增的片段,常采用放射性标记的核酸探针对扩增产物进行Sorthern杂交.近年来采用生物素、地高辛等非放射性标记物的技术得到了广泛应用[2].本文介绍了用生物素标记HIV-1 DNA的扩增产物,然后用免疫酶斑点法(immuno enzyme dot assay, IEDA)直接检测扩增产物的方法. 展开更多
关键词 免疫斑点 多聚链式反应 艾滋病毒
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建立酶切图谱法从日本历年本土基因型麻疹病毒株中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒
7
作者 周剑惠 常新 +5 位作者 陈超 许强 刘影 李大强 张书娟 中山哲夫 《中国实验诊断学》 2004年第6期582-584,共3页
目的本文主要研究建立一种酶切图谱法从日本历年本土C1、D3、D5基因型麻疹病毒中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒,即逆转录多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性分析方法(RTPCRRFLP)。方法对C1、D3、D5及H1基因型麻疹病毒H基因全长的... 目的本文主要研究建立一种酶切图谱法从日本历年本土C1、D3、D5基因型麻疹病毒中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒,即逆转录多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性分析方法(RTPCRRFLP)。方法对C1、D3、D5及H1基因型麻疹病毒H基因全长的序列进行分析,寻找能够从日本本土株中鉴别出输入株H1基因型麻疹病毒的限制性内切酶酶切位点,建立RTPCRRFLP方法。同时,我们又应用多株已经过序列分析确定为C1、D3、D5、H1基因型的麻疹病毒用该RTPCRRFLP方法进行验证。结果应用该RTPCRRFLP方法所得结果与序列分析方法结果一致。结论该RTPCRRFLP方法是一种简单、快速又实用的从日本本土株中筛查H1基因型输入株的方法。 展开更多
关键词 麻疹病毒 逆转录多聚链式反应(RT-PCR) 限制性长度片断长度多态性分析(RFLP) 电泳 序列分析
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PCR法联合被动凝集法在肺炎支原体感染检验中的临床应用
8
作者 苏辉 《中文科技期刊数据库(引文版)医药卫生》 2023年第6期84-87,共4页
以肺炎支原体(MP)感染患者为研究对象,分析多聚酶链式反应(PCR)法联合被动凝集法临床应用效果。方法 回顾性分析我院收治的MP患者,基于特定时间段内(2020年1月-2022年12月)对其进行选取(150例),分别采用PCR、被动凝集法检测,分析其检测... 以肺炎支原体(MP)感染患者为研究对象,分析多聚酶链式反应(PCR)法联合被动凝集法临床应用效果。方法 回顾性分析我院收治的MP患者,基于特定时间段内(2020年1月-2022年12月)对其进行选取(150例),分别采用PCR、被动凝集法检测,分析其检测结果。结果 被动凝集法+PCR组阳性率为97.33%,显著高于单一使用被动凝集法检测阳性率88.67%或PCR检查阳性率80.00%(P<0.05);被动凝集法+PCR组敏感性98.67%、特异性96.00%,高于被动凝集法单一检测的80.67%、92.00%及PCR单一检测的78.00%、90.00%,但差异并不显著(P>0.05)。结论 无论是PCR或被动凝集法均具有各自优缺点,临床需依据具体诊断需求、患者特点选择合适的检测方法,联合PCR、被动凝集法检测更有利于提高其阳性检出率,方便指导临床早期合理应用抗生素,避免误用、滥用。 展开更多
关键词 肺炎支原体(MP)感染 多聚链式反应(PCR) 被动凝集 阳性率
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RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸方法的建立 被引量:12
9
作者 姚李四 陈颖 +4 位作者 徐宝梁 陈红运 林祥梅 王晶 马晓光 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第5期19-20,共2页
本研究结果显示,在我国实际应用中,先用基于扩增核蛋白基因的普通PCR进行筛选,再用巢式PCR进行排除和鉴定,是为快速、准确、经济的方法。
关键词 小反刍兽疲病毒 核酸 逆转录 多聚链式反应
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益气化瘀补肾方及拆方影响椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶mRNA表达的研究 被引量:21
10
作者 施杞 王拥军 +4 位作者 李晨光 周泉 胡志俊 刘梅 周重建 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期142-146,共5页
目的探讨益气化瘀补肾方及拆方影响退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs/TI MP mRNA的表达。方法采用RT-PCR法检测胶原和MMPs/TI MP mRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出... 目的探讨益气化瘀补肾方及拆方影响退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs/TI MP mRNA的表达。方法采用RT-PCR法检测胶原和MMPs/TI MP mRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出光密度。结果与假手术组比较,模型组Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13mRNA表达明显升高(P<0.01);TI MP-1mRNA表达无明显统计学差异(P>0.05)。益气化瘀补肾方及其拆方可明显降低Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13mRNA的过度表达(P<0.01或P<0.05)。结论退变椎间盘的Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原mRNA表达增高,MMP-13mRNA的高表达和TI MP-1mRNA的低表达,MMPs/TI MP的比例失调,反映了退变椎间盘ECM合成和降解的失调。益气化瘀补肾方及拆方可能通过影响颈椎间盘组织胶原及相关代谢酶mRNA表达而延缓椎间盘的退变。 展开更多
关键词 益气化瘀补肾方 细胞外基质 胶原 基质金属蛋白 基质金属蛋白组织抑制剂 逆转录多聚链式反应
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螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响 被引量:7
11
作者 赵杰 肖云晓 +1 位作者 蒋浩 庞辉 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1471-1473,共3页
目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的... 目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。 展开更多
关键词 螺旋藻激 组织型纤溶原激活物 纤溶原激活物抑制物 逆转录多聚链式反应
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去氢骆驼蓬碱治疗细粒棘球蚴病的作用机制研究
12
作者 林玉霞 巩月红 +2 位作者 赵一聪 潘美驰 王建华 《中国药业》 CAS 2024年第11期42-48,共7页
目的 应用网络药理学方法预测去氢骆驼蓬碱(HM)治疗细粒棘球蚴病的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库(TCMSP)、瑞士靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)、药物银行数据库(Drugbank)获取HM相关基因,在基因卡数据库(GeneCards)、D... 目的 应用网络药理学方法预测去氢骆驼蓬碱(HM)治疗细粒棘球蚴病的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库(TCMSP)、瑞士靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)、药物银行数据库(Drugbank)获取HM相关基因,在基因卡数据库(GeneCards)、DISGENET数据库、DrugBank数据库获取细粒棘球蚴病的作用靶点,将HM的预测靶点和细粒棘球蚴病相关基因相互映射,得到HM作用细粒棘球蚴病的靶点基因,导入String数据库进行网络拓扑属性分析,筛选重要靶点蛋白,构建蛋白质-蛋白质互作(PPI)和成分-疾病-靶点网络。采用DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能分析和Kyoto京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选与DNA损伤相关的基因靶点。采用Autodock Vina软件及Pymol软件对相关靶点进行分子对接验证和展示。将活力不低于98%的细粒棘球蚴随机分为空白对照组、1%DMSO组、25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)法、免疫印迹(Western blot)法体外验证HM干预细粒棘球蚴肿瘤蛋白P53(TP53)、拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)、染色体组蛋白H2A的变异体(H2AX)、共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)mRNA和蛋白表达水平。结果 共获得HM靶点105个,细粒棘球蚴病相关基因88个,二者共有靶点为2个。HM干预细粒棘球蚴病的作用靶点主要有促分裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、MAPK1、TP53、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSPAA1)、MAPK14、Jun,机制可能涉及MAPK信号通路、受体酪氨酸激酶(ERBB)信号通路、DNA损伤与DNA修复通路、细胞凋亡等过程。体外验证结果显示,与空白对照组相比,25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组的TP53,TopoⅠmRNA和蛋白表达均呈下调趋势(P <0.05),H2AX,ATM mRNA和蛋白表达均呈上调趋势(P <0.05)。结论 HM可通过多种生物学过程和相关信号途径治疗细粒棘球蚴病,HM参与细粒棘球蚴病DNA损伤与DNA修复信号通路的调控作用,TP53,TopoⅠ,H2AX,ATM均可能是其作用靶点。该研究为进一步阐明HM治疗细粒棘球蚴病的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 去氢骆驼蓬碱 细粒棘球蚴病 DNA损伤与DNA修复 实时荧光定量逆转录聚合链式反应 网络药理学 作用机制
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外周血中基质金属蛋白酶1、9对小儿川崎病冠状动脉损伤的早期诊断意义 被引量:7
13
作者 白凤芝 杨绍娟 +1 位作者 吴晓冬 李洪军 《中国实验诊断学》 2008年第4期490-492,共3页
目的研究川崎病(Kawasaki disease,KD)冠状动脉损伤(Coronry lesion,CAL)患儿外周血中基质金属蛋白酶1(Matrix metalloproteinase-1,MMP-1)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的动态变化在川崎病的早期预测和诊断中的临床意义。方法KD合并CAL患... 目的研究川崎病(Kawasaki disease,KD)冠状动脉损伤(Coronry lesion,CAL)患儿外周血中基质金属蛋白酶1(Matrix metalloproteinase-1,MMP-1)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的动态变化在川崎病的早期预测和诊断中的临床意义。方法KD合并CAL患儿35例,急性期、恢复期各抽一次外周静脉血,抗凝,对照组为18例健康体检儿童。ELISA双抗体法测定血清中MMP-1、MMP-9的蛋白水平,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外周血白细胞MMP-1、MMP-9 mRNA的表达。结果急性期血清中MMP-1、MMP-9的蛋白含量及血白细胞MMP-1、MMP-9 mRNA水平均明显高于恢复期及正常对照组(P<0.01)。结论MMP-1、MMP-9过表达是川崎病冠状动脉损伤的重要因素,监测MMP-1、MMP-9动态变化对预测及早期诊断具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 金属蛋白1、9 川崎病冠状动脉损伤 ELISA双抗体 逆转录聚合链式反应
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γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析 被引量:1
14
作者 曾晓勇 杨为民 +3 位作者 叶章群 刘继红 张旭 周惜才 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期649-652,共4页
为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 ... 为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 MRP1 和 MRP2 的 m RNA的表达 ,并以 β- actin m RNA为内对照半定量进行相关分析。结果显示 :γ-GCSh、γ- GCSl、MRP1 和 MRP2 m RNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达 ;γ- GCSh和 MRP1 在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例 ,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性 (r=0 .786 ,P<0 .0 1)。提示 :正常细胞的恶性化可上调 γ- GCS和 MRPs的表达 ;膀胱癌临床化疗耐药的形成与 γ- GCSh和 MRP1 的过表达密切相关 。 展开更多
关键词 相关性 膀胱肿瘤 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成 多药耐药相关蛋白 基因表达 逆转录多聚链式反应
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5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡 被引量:2
15
作者 丁晓凌 周国雄 黄介飞 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第35期3685-3689,共5页
目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和West... 目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量,采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-α诱导细胞的细胞凋亡.结果:三种胰腺癌细胞株均表达5-LOX mRNA和蛋白,细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌.5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升.TNF-α(20μg/L)处理野生型SW1990细胞,12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%,但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱,分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%.在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10 nmol/L)能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32%vs 18.5%±5.69%,P<0.01).用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株,能恢复其对凋亡诱导的敏感性.结论:胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4,高表达5-LOX能抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡. 展开更多
关键词 胰腺癌 5-脂氧合 肿瘤坏死因子-Α 凋亡 免疫印迹 逆转录聚合链式反应
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脑C型利钠利尿肽的mRNA转录及其血浆表达水平在大鼠创伤性脑水肿中的改变 被引量:3
16
作者 柯昌庶 潘伟生 +2 位作者 吴浩强 彭颂先 龚杰 《脑与神经疾病杂志》 2003年第4期212-215,共4页
目的:观察创伤性脑水肿对脑组织中C型利钠利尿肽(CNP)mRNA转录水平的影响及与其血浆中CNP水平的相关性。方法:35只S-D大鼠随机分入对照组、创伤组。采用冲击加速机制复制重度脑创伤。创伤后1天组的脑CNP mRNA转录水平采用逆转录-多聚酶... 目的:观察创伤性脑水肿对脑组织中C型利钠利尿肽(CNP)mRNA转录水平的影响及与其血浆中CNP水平的相关性。方法:35只S-D大鼠随机分入对照组、创伤组。采用冲击加速机制复制重度脑创伤。创伤后1天组的脑CNP mRNA转录水平采用逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)行半定量测定。并同时采用酶免疫分析法(EIA),观测伤后多时点的体内血浆CNP水平。结果:创伤后1天脑水肿期内,挫伤皮质,同侧丘脑,对侧皮质,对侧丘脑和延髓等部位,与对照组相比,其CNP mRNA转录水平无显著改变(P>0.05)。然而,创伤后1天与3天组血浆的CNP水平均较对照组有明显升高(P<0.05)。结论:尽管CNP一直被认为是一种神经肽,但可能并未参与创伤性脑水肿的病理过程。而全身循环中升高的血浆CNP水平可能为机体对重度脑创伤的反应之一,其作用主要通过循环系统发挥。 展开更多
关键词 脑C型利钠利尿肽 MRNA转录 血浆 大鼠 逆转录-多聚反应 重度脑创伤 创伤性脑水肿
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鸡大肝大脾病毒RT-PCR检测方法的建立及其检测 被引量:4
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作者 马玉玲 杨德吉 陆承平 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期197-199,共3页
Based on the reported Big liver and spleen disease virus (BLSV) gene sequence, a pair of primers was designed and a 375bp product was amplified from the total RNA extracted from homogenates of BLSV-infected livers. ... Based on the reported Big liver and spleen disease virus (BLSV) gene sequence, a pair of primers was designed and a 375bp product was amplified from the total RNA extracted from homogenates of BLSV-infected livers. Twenty liver samples were randomly collected from two commercial broiler breeder flocks in Nanjing.One of ten liver samples was positive reaction in RT-PCR in one flock but not in another. The RT-PCR detection for cDNA from BLSV was specific with the sensitivity of 4.16×10-3μg/μL. Phylogentic tree analysis suggested that the 338bp sequence of the isolated strain (BLSV-NJ2002) shared 97.3% and 83.6% nt hemologue indentities with that of Australia strain and avian HEV respectively. 展开更多
关键词 鸡大肝大脾病毒(BLSV) 逆转录多聚链式反应(RT—PCR) 检测
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辛伐他汀逆转左室肥厚的作用与抑癌基因PTEN表达的关系 被引量:8
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作者 陈永清 赵连友 +4 位作者 郑强荪 李言川 尚福军 李爱国 王斌 《高血压杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期353-357,共5页
目的观察辛伐他汀逆转自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚(LVH)的作用及其与抑癌基因第10号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)表达的关系。方法16只雄性8周龄SHR测量体重和收缩压后,随机分为SHR治疗组和SHR对照组,分别给予辛伐他汀和安慰... 目的观察辛伐他汀逆转自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚(LVH)的作用及其与抑癌基因第10号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)表达的关系。方法16只雄性8周龄SHR测量体重和收缩压后,随机分为SHR治疗组和SHR对照组,分别给予辛伐他汀和安慰剂灌胃治疗,性别、年龄、数量匹配的Wistar大鼠给予安慰剂治疗作为正常对照组,疗程10周,观察辛伐他汀对大鼠收缩压和左心室重量/体重比值(LVW/BW)的影响,采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测辛伐他汀对心肌组织PTEN表达的影响。结果(1)治疗前两组SHR收缩压无显著差异(P>0.05),均高于Wistar正常对照组大鼠(P<0.01);给予辛伐他汀后,SHR治疗组收缩压(217.3±8.5)mmHg较SHR对照组(220.8±9.9)mmHg略有降低,但无统计学意义(P>0.05),且两组SHR收缩压仍高于Wistar正常对照组大鼠(126.0±5.8)mmHg,差异非常显著(P<0.01)。(2)SHR对照组大鼠的LVM/BW(4.10±0.13)mg/g明显高于Wistar正常对照组(3.04±0.12)mg/g,并有统计学意义(P<0.01),而SHR辛伐他汀治疗组的LVM/BW(3.73±0.08)mg/g较SHR对照组明显下降(P<0.01)。(3)SHR对照组大鼠心肌组织PTEN的mRNA表达水平(0.36±0.04)低于Wistar正常对照组(0.87±0.05),差异非常显著(P<0.01),SHR治疗组大鼠的PTENmRNA表达水平(0.60±0.05)较SHR对照组显著升高,并有统计学意义(P<0.01)。(4)Wistar正常对照组、SHR对照组和SHR治疗组大鼠心肌组织PTEN蛋白表达水平分别为50.53±2.92、24.65±3.89和40.32±4.04,其中SHR对照组明显低于Wistar正常对照组(P<0.01),SHR治疗组则较SHR对照组显著升高(P<0.01)。结论辛伐他汀能够逆转SHR的LVH,其机制可能与PTEN表达水平增加有关。 展开更多
关键词 PTEN表达 辛伐他汀 抑癌基因 逆转左室肥厚 自发性高血压大鼠(SHR) 逆转录聚合链式反应 正常对照组 Wistar大鼠 mRNA表达 蛋白免疫印迹 心肌组织 蛋白表达水平 治疗组 染色体缺失 左心室肥厚 收缩压 安慰剂治疗 左心室重量
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辛伐他汀对大鼠心肌细胞肥大及蛋白激酶B表达的影响 被引量:5
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作者 陈永清 赵连友 +6 位作者 郑强荪 李言川 尚福军 李爱国 王斌 于心亚 陈军红 《高血压杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期363-367,共5页
目的观察辛伐他汀对血清诱导培养大鼠心肌细胞肥大的影响,探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)途径在辛伐他汀调控心肌细胞肥大中的信号转导作用。方法以培养的新生SpragueDawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,应用图像分析系统测... 目的观察辛伐他汀对血清诱导培养大鼠心肌细胞肥大的影响,探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)途径在辛伐他汀调控心肌细胞肥大中的信号转导作用。方法以培养的新生SpragueDawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RTPCR和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测PKB的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)15%血清组干预24h后心肌细胞表面积(1611.16±160.75)μm2显著高于无血清对照组(538.04±118.60)μm2,并有统计学意义(P<0.01);给予辛伐他汀和血清共同干预后,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞表面积呈递减趋势,其中10-5mol/L和10-6mol/L组分别为(799.84±167.70)μm2和(1076.88±199.28)μm2,均显著低于血清组(P<0.01)。(2)在15%血清刺激后,心肌细胞[3H]亮氨酸掺入率为(2360±106)计数/min·孔,明显高于无血清对照组(1305±92)计数/min·孔,并有统计学意义(P<0.01);10-5和10-6mol/L辛伐他汀组[3H]亮氨酸掺入率分别为(1707±101)计数/min·孔和(1962±125)计数/min·孔,均较血清组明显降低(P<0.01)。(3)随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞ANP的mRNA表达水平逐渐降低,其中10-5和10-6mol/L辛伐他汀组分别为0.29±0.03和0.40±0.03,与单纯血清干预组(0.60±0.03)比较明显降低,差异非常显著(P<0.01)。(4)心肌细胞PKB的mRNA和蛋白表达水平均随辛伐他汀浓度的增加而呈递减趋势,其中10-5、10-6mol/L辛伐他汀组PKBmRNA表达水平为0.28±0.02和0.36±0.03,明显低于血清干预组(0.51±0.03),并有统计学意义(P<0.01)。上述两组PKB蛋白表达水平分别为42.41±2.83和45.68±3.43,也较血清组(60.80±3.49)显著降低(P<0.01)。结论辛伐他汀能够抑制血清诱导的心肌细胞肥大,PKB表达水平下调可能是其分子生物学机制之一。 展开更多
关键词 心肌细胞肥大 辛伐他汀 蛋白激B 大鼠 逆转录聚合链式反应 mRNA表达 mol/L 蛋白表达水平 细胞表面积 蛋白免疫印迹 分子生物学机制 信号转导作用 蛋白合成速率 磷脂酰肌醇 RTPCR PKB min 亮氨酸 统计学 诱导培养
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先心病相关微缺失的快速筛查和诊断方法 被引量:1
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作者 陈瑛 丁洁 +4 位作者 段程颖 孟庆霞 许咏乐 王玮 李红 《中国妇幼健康研究》 2008年第6期566-568,F0003,共4页
目的建立简便易行的用于筛查先心病病因的诊断技术平台。方法在单核苷酸多态数据库中选择先心病相关的22q11染色体区段内和锌指蛋白4基因编码区内的单核苷酸多态位点,采用多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性法对单核苷酸多态标记在11... 目的建立简便易行的用于筛查先心病病因的诊断技术平台。方法在单核苷酸多态数据库中选择先心病相关的22q11染色体区段内和锌指蛋白4基因编码区内的单核苷酸多态位点,采用多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性法对单核苷酸多态标记在116个正常人群中基因型的杂合度进行测定,检测14例心脏畸形胎儿家系等位基因的基因型,并利用连锁分析间接诊断微缺失的发生情况。结果22q11染色体区段上的单核苷酸多态rs4819523基因型杂合度为0.431,锌指蛋白4基因单核苷酸多态基因型杂合度为0.569。筛查到1例锌指蛋白4单等位基因缺失的畸形胎儿。结论多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性法应用于22q11染色体微缺失和锌指蛋白4基因缺失的检测方便快捷,适用于先天性心脏畸形病因的初步筛查和遗传诊断。 展开更多
关键词 先心痛 微缺失 锌指蛋白4 单核苷酸多态 多聚链式反应-限制性片段长度多态性
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