TH基因逆转录病毒表达载体的构建及产病毒细胞系的建立

目的 构建含有鼠酪氨酸羟化酶 (TH)基因的重组逆转录病毒表达载体 p N2 ATH,建立 PA317产病毒细胞系。方法 将质粒 p GEM- 2上酶切下的 THc DNA片段与线性化的逆转录病毒表达载体 N2 A连接 ,克隆出重组逆转录病毒表达载体 p N2 ATH。把 p N2 ATH质粒转入 PA317包装细胞 ,通过 G4 18抗性筛选 ,NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,得到高滴度产毒 PA317/p N2 ATH细胞株 ,免疫组化测定细胞 TH表达。结果 重组质粒 p N2 ATH经酶切鉴定证明 THc DNA正向插入 N2 A表达载体中 ,PA317/p N2 ATH产毒细胞高效表达 TH。结论 成功地构建了重组逆转录病毒表达载体p N2 ATH,建立了 PA317/p N2

TH基因修饰的中脑星形胶质细胞的建立

目的 体外构建酪氨酸羟化酶 (TH)基因修饰的中脑星形胶质细胞 ,为进行帕金森病 (PD)的转基因细胞治疗奠定基础。方法 应用逆转录病毒表达载体将鼠 TH基因转入逆转录病毒包装细胞 PA317,通过 G4 18抗性筛选 ,获取高滴度产毒 PA317/ p N2 ATH细胞株 ,以其产生的病毒上清感染鼠中脑星形胶质细胞 ,继续培养 7～ 9d后 ,免疫组化检测细胞 TH表达。结果 获得了高滴度产毒 PA317/ p N2 ATH细胞 ,并且转染 p N2 ATH的中脑星形胶质细胞成功表达 TH。结论 转染 p N2 ATH的中脑星形胶质细胞可以有效表达 TH,为将其应用于