HBsAg逆转录病毒表达质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的 构建乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)逆转录病毒表达质粒并探讨其在真核细胞中的表达 .方法 用限制性内切酶从重组质粒pBKS -S中切出HBsAg基因 ,并亚克隆到逆转录病毒表达质粒pLXSN ,构建成重组质粒pLXSN-S ;经限制性内切酶消化和DNA序列测定鉴定无误后 ,用阳离子脂质体转染法将重组质粒pLXSN -S分别转染HepG2、K5 6 2和EB病毒转化B淋巴母细胞 (EBVC) ;用ELISA法检测HBsAg在细胞培养上清中的表达 .结果 经酶切和DNA序列测定鉴定证实重组质粒构建正确 ;质粒pLXSN -S转染细胞培养上清均可检测到HBsAg .结论 逆转录病毒表达质粒pLXSN