胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。

迎红杜鹃ISSR-PCR反应体系建立

利用正交设计L16(45)方法对迎红杜鹃(Rhododendron mucronulatum Turcz.)ISSR-PCR(Inter-simple sequence repeat-Polymerase chain reaction products)反应体系的5因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、DNA模板、dNTP、引物)在4个水平上进行了优化试验。结果表明,ISSR-PCR反应体系各因素在设定的不同水平对PCR反应结果都有影响,其中引物浓度的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立的迎红杜鹃ISSR-PCR反应最佳体系(25μL)为2.0μL10×Buffer、0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)、2μLDNA模板(20ng/μL),2.5μL dNTPs(2.5mmol/L)、2μL引物(10μmol/L)。

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析

为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 MRP1 和 MRP2 的 m RNA的表达 ,并以 β- actin m RNA为内对照半定量进行相关分析。结果显示 :γ-GCSh、γ- GCSl、MRP1 和 MRP2 m RNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达 ;γ- GCSh和 MRP1 在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例 ,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性 (r=0 .786 ,P<0 .0 1)。提示 :正常细胞的恶性化可上调 γ- GCS和 MRPs的表达 ;膀胱癌临床化疗耐药的形成与 γ- GCSh和 MRP1 的过表达密切相关 。

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂(试剂1、2)检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂1、2均阳性的血清标本28份、仅试剂1阳性的15份和仅试剂2阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT-PCR荧光定量检测。结果试剂1、2抗-HCV均阳性28份标本的RT-PCR结果均阳性,仅试剂1抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂2抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂1或2抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT-PCR检测阳性率为15.63%。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。

长短日照下绍鸭性成熟时间,下丘脑GnRH-I、POMC和NPY mRNA表达的差异

利用长日照和短日照环境调控绍鸭的性成熟时间,并采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法, 检测两种日照组(n=6)鸭性成熟过程中下丘脑促性腺激素释放激素-Ⅰ(GnRH-Ⅰ)、阿片促黑激素皮质素 原(POMC)和神经肽Y(NPY)mRNA表达的发育性变化及日龄间差异。结果表明,长日照组性成熟时间较短 日照组提前30d。RT-PCR结果显示,两组鸭下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA的发育性表达模式相似,从出雏至性成熟 过程中,其表达水平呈逐渐增加趋势;长日照组下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA表达丰度均高于同日龄短日照组,并于 120日龄时其差异达显著水平。两组POMC mRNA的表达丰度呈现先增加后降低趋势,于性成熟前后显著下降; 日照长度对其基因表达具有显著影响。两组NPY mRNA表达水平分别于60和90日龄时显著升高,于性成熟时 显著下降,但光照对其基因表达无显著影响。下丘脑GnRH-Ⅰ基因表达的显著上调可能是禽类性成熟启动的关 键因素,也是长日照条件下绍鸭性早熟的主要原因;GnRH-Ⅰ表达的上调与下丘脑POMC和NPY mRNA表达变 化有关。

HIF-1α和HIF-2α在肾透明细胞癌中的表达及意义

背景与目的:低氧诱导因子是广泛存在于多种细胞的转录因子,在低氧时肿瘤细胞相关基因的表达发挥着重要的调控作用。本研究探讨了低氧诱导因子HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA在肾透明细胞癌中的转录及其临床意义。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测56例肾透明细胞癌组织、对照组43例远离肿瘤的癌周肾脏组织及9例良性疾病肾脏组织中HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的阳性率。结果:HIF-1α mRNA在肾透明细胞癌组织中的阳性率为87.5%,较对照组织13.5%高,差异具有显著性(P<0.001);HIF-2α mRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为94.6%,较对照组织7.7%高,差异有显著性(P<0.001)。结论:HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的转录可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。

原发性高血压患者α-ADDUCIN和GNB3联合分析

目的观察齐齐哈尔地区原发性高血压(EH)病患者α-ADDUCING460W和GNB3C825T多态性及其在原发性高血压发病中的相互作用。方法EH患者331例,对照组293例。取外周血提取基因组DNA,用PCR-RLFP对α-ADDUCIN和GNB3进行基因分型。结果(1)血压正常组和高血压组α-ADDUCING460W各种基因型分别为GG0.177/0.160、GW 0.580/0.481、WW 0.242/0.359(P<0.01),W等位基因频率为0.532/0.600(P<0.05);(2)血压正常组和高血压组GNB3C825T各种基因型分别为CC 0.177/0.353、CT 0.468/0.541、TT 0.355/0.106(P<0.001),T等位基因频率为0.589/0.376(P<0.001);(3)高血压组WW+CC和WW+CT联合基因型频率显著高于血压正常组(P分别为<0.001和<0.01),而高血压组GG+TT、GW+TT及WW+TT联合基因型频率显著低于血压正常组(P分别为<0.01、<0.001及<0.001)。结论α-ADDUCING460W和GNB3C825T多态性与齐齐哈尔地区人群的高血压相关,且两基因还可能存在相互作用。

非小细胞肺癌E-钙粘蛋白基因异常的研究

目的 观察非小细胞肺癌组织中E 钙粘蛋白 (E cadherin)的基因异常。方法 采用PCR SSCP及序列分析 ,研究了 2 4例非小细胞患者肺癌组织中E cadherin基因外显子 6、7、8、9的基因突变。结果 2 4例非小细胞肺癌中发现 2例存在E cadherinexon9的基因插入、缺失及突变。结论 E cadherin在非小细胞肺癌中存在基因异常改变 ,尤其集中在E cadherin的细胞外区域 ,主要表现为插入及缺失 。

大鼠急性肺栓塞后hnRNP-E1的表达及胶原代谢的变化

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1,hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21d开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常大鼠为对照组,采取半定量RT-PCR的方法研究hnRNP-E1在mRNA水平表达的变化;采用Western blot方法进一步验证hnRNP-E1在蛋白水平表达的变化。采用Northern blot法分析大鼠肺组织中Collagen α1(Ⅰ)(COL1A1)和Collagen α1(Ⅲ)(COL3A1)在肺栓塞后mRNA水平的表达变化;采用羟脯氨酸(HYP)和Masson染色观察急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积状况。结果在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,hnRNP-E1的mRNA水平和蛋白水平的表达均有显著升高。大鼠急性肺栓塞后肺组织中COL1A1的mRNA表达水平有明显升高,但是COL3A1的mRNA表达水平无显著变化。HYP分析和Masson染色均显示急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积明显增加。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-E1的表达升高,可能促进了COL1A1的蛋白表达和胶原在肺部的沉积。

CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C多态性与慢性HBV感染发病易感性的关系研究

目的探讨MHCⅡ类反式激活因子(CⅡTA)启动子Ⅳ区G-944C基因多态性与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染发病易感性的关系。方法在1203例慢性HBV感染无症携带与慢性肝患者中,应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)对CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C位点进行基因分型研究。结果CC基因型频率在2组人群中分别为25·7%和19·7%,彼此间相差显著(χ2=5.560,P=0·018),而GC基因型频率分别为43.6%和49.9%,彼此间相差显著(χ2=4·774,P=0·029);在G基因显性模式下(C基因隐性模式),即GG+GC基因型频率在无症状携带和发病组人群中分别为74.3%和80.3%,两者间相差显著(χ2=5.560,P=0·018);在慢性肝炎、慢性重型肝炎和肝炎肝硬变3组人群中,C等位基因频率分别为44.1%、45.8%和45.0%,彼此间相差不显著(P>0.05)。结论CⅡTA基因启动子Ⅳ中的G-944C位点多态性与慢性HBV感染者发病易感性存在一定的关系,而与疾病的严重程度无明显关系;基因型为CC纯合子的慢性HBV感染者不容易发展成慢性肝病。

雌激素受体拮抗剂他莫昔芬和4-羟基他莫昔芬治疗非小细胞肺癌的实验研究

[目的 ]探讨雌激素受体拮抗剂在非小细胞肺癌治疗中的作用。 [方法 ]用逆转录多聚酶链式反应 (RT-PCR)测定肺腺癌细胞株 SPC- A- 1的雌激素受体 m RNA(ER- m RNA)表达 ,分别在去激素培养条件下观察不同浓度的他莫昔芬 (Tam)、4-羟基他莫昔芬 (OHTam)和雌二醇 (E2 )对其生长速度、细胞周期时相、ER- m RNA水平和细胞形态学的影响。 [结果 ] SPC- A- 1肺腺癌细胞株有 ER- m RNA表达 ,低浓度 E2 (1 0 -8mol/ L)可促进其生长 ,Tam(1 0 -6mol/ L )和 OHTam(1 0 -6mol/ L)可抑制 E2 (1 0 -8mol/ L )的生长刺激作用。去激素环境下细胞生长明显减慢 ,在无激素环境中亦能抑制细胞生长 ,抑制发生在 G0 / G1 期 ,并有细胞内质网扩张等结构改变 ,ER- m RNA表达水平下降。 [结论 ]肺腺癌 SPC- A- 1细胞株的生长具有雌激素依赖性 ,应用 ER拮抗剂 Tam和 OHTam能抑制其生长。肺癌细胞中

卵巢照射及卵巢切除对大鼠骨组织COLI与TGF-β_1 mRNA表达的影响

探讨卵巢辐射损伤与卵巢切除对大鼠骨组织转移生长因子β1(TGF-β1)与主要的基质蛋白I型胶原(COLI)基因表达的影响。50Gγ剂量γ射线局部照射大鼠卵巢和双侧卵巢切除后应用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测大鼠骨组织中TGF-β1与COLI的mRNA表达水平。结果表明,骨组织COLI的mRNA表达水平上升,而TGF-β1mRNA表达减少,卵巢辐射损伤大鼠与卵巢切除大鼠两者结果相似。

新西兰兔视神经损伤减压术后视网膜及视神经GAP-43 mRNA的表达及意义

目的:通过观察视神经损伤后,不同时段手术减压对视神经及视网膜GAP-43mRNA表达的影响,探讨视神经损伤后减压的手术时机及作用机理。方法:定量致伤条件下建立新西兰兔双侧视神经部分损伤的动物模型。根据预定减压时间的不同,将20只新西兰兔随机分为正常对照组、损伤后1d减压组(1dpi组)、损伤后7d减压组(7dpi组)和损伤后14d减压组(14dpi组)4组。以右眼为减压眼,左眼不减压作为损伤对照。利用RT-PCR法检测各组损伤后4周时视神经及视网膜组织中GAP-43mRNA的表达水平。结果:视神经开始损伤后4周时,1dpi组减压眼视网膜组织中GAP-43mRNA的表达高于未减压眼,7dpi组、14dpi组减压眼与未减压眼表达差异无统计学意义。结论:视神经损伤后早期减压可使视网膜GAP-43mRNA表达升高,可能对促进视神经轴突的修复起一定的作用。

p53抑癌基因第七外显子突变在涎腺多形性涎瘤分化中的PCR-SSCP对比分析

目的 :分析、探讨p5 3第七外显子突变与涎腺多形性腺瘤分化程度的关系。方法 :对两组各 8例肿瘤组织进行PCR -SSCP。结果 :两组阳性率分别为 1 2 .5 %和 5 0 %。结论 :p5 3第 7外显子突变率在两组中无明显差异 (χ2检验 ,P >0 .0 5 ) ,p5 3抑癌基因第七外显子突变与多形性腺瘤的分化程度可能有关 。

^(12)C^(6+)重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ion research facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6+),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应-银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)银染端粒重复序列扩增法检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化。结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2和3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失。肝癌细胞SMMC-7721在1～3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1～3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p<0.05)。分析得知,重离子辐射可以诱导人肝细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性。端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱。本实验使重离子在辐照治疗中的优势得以体现。

miR-144-3p分子在胶质瘤中的表达

目的本文研究了小分子核糖核酸-144-3p(miR-144-3p)分子与胶质瘤发生发展的相关性。方法本实验所需胶质瘤组织均来自于西京医院神经外科胶质瘤患者,共50例;利用人源神经元细胞系HCN-2(human cortical neuron-2,HCN-2)、U251胶质瘤细胞系、U87MG胶质瘤细胞系等。通过细胞培养及miRNA转染,细胞及组织RNA提取,反转录多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),实时定量PCR对miR-144-3p分子在胶质瘤中的表达进行检测。结果 miR-144-3p分子在人和小鼠染色质定位高度保守;miR-144-3p分子在胶质瘤患者不同组织中的表达差异;miR-144-3p分子在不同病理学分级胶质瘤中的表达差异;miR-144-3p分子在不同人源胶质瘤细胞系中的表达差异,其表达量与患者预后相关性。结论 miR-144-3p分子在哺乳动物中高度保守,与患者的预后有关。

急性肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-10表达及糖皮质激素对其影响

目的 :探讨急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织白细胞介素 - 10 (IL - 10 )mRNA表达及糖皮质激素对其的影响。方法 :SD大鼠随机分为正常对照 (C)组、油酸致伤 (O)组、地塞米松治疗 (D)组 ,观察地塞米松对大鼠油酸型ALI动物模型的血氧分压、平均肺动脉压、总肺水量、IL - 10mRNA的RT -PCR产物及肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)含量的影响。结果 :地塞米松能提高ALI时肺组织IL - 10mRNA水平和降低TNF -α含量 ,并提高机体动脉血氧分压、减轻肺水肿、降低肺动脉压。ALI时IL - 10mRNA水平和TNF -α含量变化具有显著性相关 (r =- 0 734,P =0 0 0 12 ) ,结论 :ALI时机体IL -10mRNA水平增加 ,地塞米松能促进这种作用 。