荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的研究

目的 通过检测大肠癌病人外周血清中癌胚抗原（CEA）,外周血及淋巴结中癌胚抗原信使核糖核酸（CEA mRNA）的相对表达量,建立外周血中定量检测CEA mRNA的方法,并探讨CEA mRNA检测在结直肠癌诊断中的临床意义.方法 采用逆转录-荧光定量PCR技术检测大肠癌病人外周血及淋巴结中CEA mRNA的相对表达量,并用电化学发光法检测外周血中的CEA.结果 50例大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率为84%,与正常对照组（20人无1例阳性）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;CEA 阳性率为22%与CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义（P＜0.01）.淋巴结CEA mRNA表达阳性率32.3%,与外周血中CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 建立了SYBRGREEN 荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的方法,大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率较高,且显著高于外周血中CEA含量以及淋巴结中CEA mRNA表达阳性率,可用于大肠癌患者的术前诊断.

基于RT-qPCR技术的microRNA表达水平检测方法

微RNA(microRNA,miRNA)是一类细胞内源性的小分子非编码RNA,在多种生理和病理过程中发挥基因调控作用。MiRNA的表达水平定量分析是其功能研究中的重要过程,但miRNA的成熟体序列较短,因而其逆转录-定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)需采取与长链基因不同的特殊策略。现有miRNA的RT-qPCR方法可分为4种类型,包括茎环引物法、加尾法、直接逆转录法和其他方法。在PCR过程中对荧光信号的监测主要有探针法和染料法两种方式。本文对miRNA的RT-qPCR各种方法及其主要原理进行综述。

寡核苷酸药物及生物标志物的生物分析研究进展

寡核苷酸已成为多种疾病诊断和治疗的候选药物。寡核苷酸药物及其代谢物、生物标志物的定性定量分析是药物开发和评估所必需的,良好的分析方法有利于控制药品质量及准确定量药品浓度。本文主要探讨了逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、液相色谱-荧光(LC-FL)、液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)、液相色谱-高分辨质谱联用(LC-HRMS)在寡核苷酸药物和生物标志物的应用及各自的优缺点,旨在概述目前现有寡核苷酸药物和生物标志物的生物分析方法,以期为从事寡核苷酸诊断和治疗药物的研发、分析人员及企业提供参考,以期提高此类新药或仿制药一致性评价分析的水平。

大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究

目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d、4d、8d、16d、24d),分别在各时间点取大鼠胫骨前肌及脑组织约50mg,提取各组织总RNA,利用RT-q PCR技术检测9种管家基因的m RNA相对表达量。运用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件对基因稳定性进行评价,利用spss软件对内参标准化的m RNA指标进行回归分析。结果脑组织及骨骼肌中均为HPRT稳定性最高,适合用于本研究的内参基因。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种指标的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系。骨骼肌中m RNA指标相对表达量与PMI之间没有显著的相关性。结论脑组织及骨骼肌是较适宜推断晚期死亡时间的检材。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种m RNA的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系,有望成为推断PMI的辅助指标。