肿瘤多药耐药机制及逆转药物的研究进展

导致肿瘤多药耐药的机制很复杂,主要涉及有:ATP结合盒型转运蛋白超家族、DNA甲基化、细胞凋亡、拓扑异构酶Ⅱ、谷胱甘肽解毒系统及相关多药耐药信号通路等,这些机制单独或共同存在而导致耐药。逆转肿瘤多药耐药的方法主要有:化疗增敏剂、中药逆转剂和基因工程技术逆转耐药等。本文就肿瘤多药耐药机制的研究进展及逆转耐药的方法作一综述。

麻醉逆转药

目前的全麻操作完全可以做到诱导顺利满意,维持麻醉平稳,但是全麻后病人的恢复却不一定能控制。长期以来,人们企图在手术结束后迅速完全逆转麻醉药物的作用。这不但可以提高安全性,缩短在手术室停留的时间,而且也减轻恢复室的工作量。寻找安全而有效的麻醉拮抗药已有较长的历史,目前临床上仅有两种比较实用的特异性拮抗药,即纳洛酮和苯二氮(艹卓)(BZD)受体的较新拮抗药富马泽尼(Flumazenil;RO15—1788);其他都是非特异性的。兹将有关麻醉逆转药分别介绍如下。

华蟾素调控PI3K/AKT通路逆转卵巢癌A2780/DDP细胞顺铂耐药的作用机制

目的研究华蟾素(CBG)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用和机制。方法A2780细胞株及其顺铂耐药细胞株A2780/DDP是临床常见的卵巢癌细胞,故选择这两种细胞株作为研究对象。通过CCK-8法检测细胞活力,平板克隆和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞的增殖能力,赫斯特染色(Hoechst)法观察细胞凋亡情况,细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力,Western blot和定量逆转录PCR(RT-qPCR)法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路和上皮-间质转化(EMT)的相关蛋白和mRNA的表达差异。结果与A2780细胞相比,A2780/DDP细胞的耐药指数分别约为5.636、5.864、5.695,采用CBG(2、4、6 mg/ml)处理A2780/DDP耐药细胞后,逆转耐药指数分别为1.617、2.570、3.461。CBG呈浓度依赖性地上调细胞凋亡水平、抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。Western blot结果显示:与A2780细胞相比,对照组(A2780/DDP)细胞中P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT的蛋白水平相对比值以及N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、蜗牛蛋白(Snail)的蛋白表达更高,E钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达更低(t_(P-PI3K/PI3K)=8.115,t_(P-AKT/AKT)=17.62、t_(N-cadherin)=6.126、t_(Vimentin)=4.001、t_(Snail)=17.333、t_(E-cadherin)=4.620,P<0.01);随着CBG剂量升高,耐药细胞中的P-PI3K、P-AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达水平降低,而E-cadherin的蛋白表达量增加(F_(P-PI3K)=268.5、F P-AKT=190.5、F_(N-cadherin)=24.02、F_(Vimentin)=57.65、F_(Snail)=87.24、F_(E-cadherin)=135.8,P<0.05)。RT-qPCR结果显示:随着CBG浓度增加,PI3K、AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA表达水平随之降低,相反E-cadherin的mRNA表达水平逐渐升高(F PI3K=101.1、F_(AKT)=558.3、F_(N-cadherin)=86.97、F_(Vimentin)=105.9、F_(Snail)=85.71、F_(E-cadherin)=80.96,P<0.01)。结论CBG具有逆转卵巢癌A2780/DDP细胞株顺铂耐药的作用,其机制可能与CBG调控PI3K/AKT信号通路和抑制EMT发生有关。

浙贝母逆转恶性肿瘤耐药的研究进展

肿瘤治疗过程中,耐药的出现会大大降低治疗效果,有效逆转肿瘤细胞耐药是改善患者预后的关键。现代药理研究表明,浙贝母具有逆转肿瘤细胞耐药的作用,常用于白血病、乳腺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的研究中。浙贝母中的化学成分可通过抑制P-糖蛋白(P-gp)的表达、减少药物外排、增加胞内药物浓度等机制,在多种肿瘤细胞中实现其逆转耐药的作用;亦可通过阻滞细胞周期诱导肿瘤细胞凋亡,进而增加肿瘤细胞内抗癌药物浓度,逆转肿瘤细胞耐药。现通过对近年来浙贝母化学成分及其逆转肿瘤细胞耐药的相关研究进行综述,以期促进浙贝母的深入研究,为后续应用于临床提供可靠的依据。

氯喹逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药作用

目的探究氯喹对人鼻咽耐药细胞的逆转耐药作用及其机制。方法 MTT检测不同浓度的顺铂(2,4,8,16,32μmol·L-1)以及不同浓度的氯喹(5,10,20,40,80μmol·L-1)处理HNE1细胞,HNE1/DDP细胞48 h对细胞增殖的影响;q-PCR方法检测5,10μmol·L-1氯喹处理HNE1/DDP后的多药耐药基因MDR1 m RNA的表达;PI单染方法检测氯喹(10,20μmol·L-1)处理HNE1/DDP后细胞凋亡率;采用Western blot方法检测氯喹处理HNE1/DDP后的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果 MTT结果显示,不同浓度的氯喹(5,10,20,40,80μmol·L-1)对细胞具有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性;q-PCR结果表明,氯喹作用细胞后能明显降低MDR1 m RNA水平;PI结果显示,氯喹作用细胞后,细胞的凋亡率明显增加;通过western blot实验表明,氯喹能明显降低MDR1和P-gp蛋白水平。结论氯喹能逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药,其机制可能与下调MDR1m RNA表达及抑制P-gp的功能与表达有关。

中药活性成分体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究

目的:从中药活性成分中筛选肿瘤耐药逆转剂,并对其逆转作用进行研究。方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果:钩藤总碱5μg/ml、药根碱2μg/ml、靛玉红1.25μg/ml对长春新碱在KB_(v200)细胞的逆转倍数分别为16.8、5.1和4倍;姜黄素1.56～12.5μg/ml与长春新碱合用对KB和KB_(v200)细胞均具增敏作用。结论:钩藤总碱、药根碱、靛玉红均可逆转kB_(v200)细胞对长春新碱的耐药性,而姜黄素与长春新碱合用对KB和KB_(v200)细胞均具增敏作用。

常用抗肿瘤药物对KBV200耐药细胞株增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转研究

目的探讨5种常用抗肿瘤药长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转作用。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,采用MTT法观察5种抗肿瘤药物对其增殖抑制作用;并采用MTT法观察苦参碱对KBV200耐药细胞株的耐药逆转作用。结果长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用差,而阿霉素和顺铂对KBV200耐药细胞株的抑制作用好;当苦参碱浓度大于200μg/m l时对KBV200耐药细胞株具有直接抑制作用;苦参碱逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素耐药的作用较强,逆转KBV200耐药细胞株对平阳霉素、顺铂、环磷酰胺的耐药作用较弱。结论KBV200耐药细胞株对长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺3种药物有不同程度耐药;苦参碱能逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素的耐药。

羽苔素E体外抗真菌活性及逆转氟康唑耐药的初步研究

目的评价白色念珠菌对羽苔素E的体外敏感性,并观察羽苔素E和氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。方法采用微量稀释法,测定15株白念敏感株和4株白念耐药株对羽苔素E的敏感性,以最低抑菌浓度(MIC)表示。同时观察羽苔素E与氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。结果羽苔素E对敏感株的MIC值为16 mg.L-1,对耐药株的MIC值与敏感株基本一致。羽苔素E与氟康唑合用,对敏感株和耐药株分别表现出相加和协同的抗真菌活性,并明显减少氟康唑的用量。结论羽苔素E具有中等的抗真菌活性,与氟康唑合用对耐药菌株表现出协同的抗真菌作用,提示羽苔素E有较好的抗真菌作用并有逆转氟康唑耐药的潜力。

“拮新康”的逆转耐药与抗肿瘤作用的研究

本文采用中药制剂“拮新康”对２８例白血病、２例多发性骨髓瘤患者的肿瘤细胞进行体外药敏实验，结果显示：长春新硷知拮新康组较长春新硷单药组细胞毒性明显增强（Ｐ＜０．０１），其中１０例为难治与复发白血病，对长春新硷己耐药，但加拮新康后细胞毒作用仍增强（Ｐ＜０．０１）。以上研究表明拮新康能逆转长春新硷的耐药，增强长春新硷的抗肿瘤细胞作用，同时拮新康本身也有一定的抗肿瘤作用。

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯(-βelemene)对多药耐药细胞株K562/阿霉素(ADM)的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS(10.0 production pacility)软件包对实验结果进行统计学处理。结果1.非细胞毒性浓度的-βelemene(4.0 mg/L)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),逆转倍数为2.18倍;2.P-gp在耐药细胞株K562/ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3.非细胞毒性浓度的-βelemene(4.0 mg/L)能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论-βelemene能够明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。

中药七叶灵颗粒逆转肺腺癌细胞耐药机制研究

目的:研究七叶灵颗粒的抗肿瘤作用与逆转肺癌细胞耐药的相关机制。方法:利用Lewis肺腺癌细胞(3LL)和Lewis肺癌耐药细胞(3LL-MDR-1)构建裸小鼠皮下移植瘤模型,按随机数字表法分为模型组、七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组,并按给药时间分为A组(14 d)和B组(28 d)。观察抑瘤率,Real-time Quantitative PCR检测肿瘤细胞中耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP的mRNA表达,Western-blot检测瘤细胞中耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP的蛋白表达。结果:3LL和3LL-MDR-1模型中七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组平均瘤重均低于各模型组。在3LL模型中,七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1、MRP、LRP基因mRNA表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其蛋白表达水平与模型组比较也出现下调。在3LL-MDR-1模型中,A组:七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的MRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);化疗组的MRP基因mRNA表达高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的LRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。B组:七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P值分别为P<0.01和P<0.001);化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MRP基因mRNA表达水平低于模型组,其差异有统计学意义(P值分别为P<0.05和P<0.001);化疗组的MRP基因mRNA表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的LRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组蛋白表达水平的变化与mRNA表达水平变化基本吻合。结论:七叶灵颗粒具有抑制肿瘤生长,并通过下调耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP对化疗药物起到增敏作用。

野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制

背景与目的:细胞凋亡的发生机制在肿瘤多药耐药中起重要作用,野生型p53基因是细胞凋亡的激活剂,与肿瘤多药耐药密切相关。本研究旨在探讨野生型p53基因能否实现对肝癌细胞多药耐药的逆转以及逆转的相关机制。方法:构建野生型P53蛋白表达序列的真核表达载体pCR3.1-p53,用脂质体转染技术建立人肝癌细胞Bel-7402的p53转染细胞株,对转染细胞株进行MTT实验,观察p53基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和对肝癌细胞对长春新碱(vincristine,VCR)药物敏感性的影响,姬姆萨染色法观察细胞形态,免疫组织化学SP法检测细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,逆转录PCR法检测细胞内mdr1、MRP、GSTπ、TopoⅡmRNA的表达。结果:转染p53的Bel-p53细胞生长明显慢于未转染的Bel-7402细胞。转染野生型p53的Bel-p53细胞在VCR浓度为0.01μg/ml,0.1μg/ml,1.0μg/ml,10μg/ml,25μg/ml时,其药物敏感性增加;VCR作用最佳浓度为1.0μg/ml。形态学检查转染细胞,在VCR作用下细胞数明显减少,细胞散在不成片、细胞高度水肿、胞体不规则突起,可见核固缩、核裂解、核溶解。p53基因对Bel-7402细胞的mdr1/P-gp的表达有明显的抑制作用,对TopoⅡα基因的表达有上调作用,对GSTπ、MRP基因表达没有影响。结论:p53基因对肝癌细胞多药耐药有逆转作用,其逆转机制可能与降低mdr1/P-gp的表达、上调TopoⅡα的表达,从而增加细胞内VCR药物浓度和VCR药效有关。

人参皂甙单体Rb1对多药耐药细胞系K562/HHT的耐药逆转作用

目的：探讨中药钙离子通道拮抗剂人参皂甙单体Ｒｂ１，对白血病多药耐药细胞系（Ｋ－５６２／ＨＨＴ）的耐药逆转作用。方法：药物敏感试验采用四唑氮盐（ＭＴＴ）比色试验法。结果：Ｒｂ１在０～８０ μｍ ｏｌ／Ｌ浓度范围内对Ｋ５６２／ＨＨＴ未见明显毒性作用；２０ μｍ ｏｌ／Ｌ、４０ μｍ ｏｌ／ＬＲｂ１ 耐药逆转倍数分别为４．４、７．９ 倍。结论：Ｒｂ１ 可以逆转Ｋ５６２／ＨＨＴ的多药耐药性。

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的:研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度(1～100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞48h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05～100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC50),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果:随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G0/G1期而实现的。

4′-甲醚-黄芩素对绒癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用研究

为探讨马鞭草中4′-甲醚-黄芩素对人绒癌JAR/VP16耐药细胞株的多药耐药逆转作用及可能的逆转机制,采用四甲基偶氮唑盐比色、透射电镜观察、逆转录多聚酶链反应、流式细胞术、基因芯片以及实时定量PCR等方法,检测到4'-甲醚-黄芩素对化疗药物具有协同增效作用,显著逆转耐药细胞对鬼臼乙叉甙(VP16)、甲氨蝶呤(MTX)及更生霉素(KSM)的耐药性,该药物作用后,耐药细胞超微结构呈现凋亡样改变,细胞凋亡率增高并出现明显凋亡峰.此外,耐药细胞中MDR1、MRP1、MRP2、MRP6、AHR、COMT、FGF2等耐药相关基因以及Bcl-2、BFL1、NAIP、p63等凋亡抑制基因表达降低,而Apaf-1、ASC、ATM、Bad、Bak、Bax、BimL等凋亡促进基因表达升高.上述实验结果表明:4′-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌耐药细胞具有显著的耐药逆转作用,这种逆转作用可能是通过降低耐药基因表达、促进细胞凋亡实现的.

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（506 400 mg·L^-1）和CsA（0.5256 mg·L^-1）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP＋ADM＋K562/MDR）、G2组（CsA＋ADM＋K562/MDR）、G3组（TMP＋CsA＋ADM＋K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。

中药复方逆转肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤的多药耐药(MDR)是化疗失败的主要原因,寻找选择性的MDR逆转剂已成为肿瘤研究领域的热点。合理使用中药联合化疗药物能够逆转肿瘤多药耐药,可起到一定的减毒增效作用。因此,中药低毒、高效的独特优势特点越来越受到国内外学者的广泛关注,复方注射液、复方药物血清、复方口服液、水煎浓缩液、粉剂等新剂型的开发亦使中药的疗效和应用范围得以扩大,在逆转肿瘤多药耐药方面取得了可喜的进展。

中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况及展望

综述近年中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况。目前中药逆转乳腺癌多药耐药研究较多的中药单体及提取物有姜黄、人参、苦参等,中药复方有复方紫龙金、逆转胶囊、疏肝益肾方等;复方研究少、体内研究少、机制探讨不够深入是目前中药逆转乳腺癌多药耐药面临的主要问题。

乌头碱逆转KB_(V200)细胞多药耐药性体外研究

目的 :在既往实验研究基础上 ,进一步考察乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应。方法 :采用MTT比色法 ,分别测定VCR、乌头碱对KBV2 0 0 细胞毒效应 ,计算IC50 。并以抑制率低于 30 %的不同浓度乌头碱与VCR伍用 ,求IC50 值 ,计算逆转倍数。结果 :12 5 μg ml与 6 2 5 μg ml浓度的乌头碱与VCR伍用时 ,IC50 分别为 0 2 715 μg ml与 0 9185 μg ml ,逆转倍数分别为 8 9倍与 2 6 4倍。结论 :乌头碱具有逆转肿瘤细胞多药耐药作用 ,值得进行深入研究。

西黄丸逆转大肠癌细胞株多药耐药的体外研究

目的：研究西黄丸对结肠癌耐药细胞株HCT-116/L及HCT-8/V的体外逆转作用。方法：血清药理方法制备西黄丸含药血清。用细胞毒性试验CCK8法、Western Blotting,RT-PCR方法研究西黄丸含药血清对大肠癌耐药细胞株的逆转作用及可能的分子机制。结果：西黄丸含药血清联合不同浓度长春新碱（VCR）与奥沙利铂（L-OHP）处理48 h后,对HCT-8/V细胞和HCT-116/L细胞的逆转倍数分别为2.58和2.36;西黄丸含药血清处理HCT-8/V细胞和HCT-116/L细胞48 h后,PKCα、Nrf2、MRP1、MRP2、GSTp1基因及蛋白,除HCT8/V细胞株中MRP2基因（6倍7 d组）上调外,表达均下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：西黄丸含药血清可体外逆转结肠癌耐药细胞株HCT-8/V和HCT-116/L的耐药性,可能与下调耐药基因mRNA和蛋白的表达水平有关。