pSim6质粒与新型反选择kil系统联用在重组工程的应用

基因工程中,无痕修饰是一种很受欢迎的基因组操作技术。反选择系统的严谨性决定了无痕修饰的效率。近期有文献报道了一种新型的反选择系统kil,该系统与质粒pSim6联用后反选择严谨性较pKD46质粒更高,预示着kil与pSim6质粒联用可以更高效地选择出重组子。据此,对大肠杆菌菌株W3110、MG1655和DH10B中的4个不同的非必需基因位点(lacI、dbpa、ack和glk)进行了分析,将不同长度的外源基因片段对预先插入这些位点的tet/kil进行基因替换。结果表明kil与pSim6质粒联用较其与pKD46质粒联用,重组效率均有显著提高,并且随着外源片段的增长,效果更明显。外源片段为1 000 bp时,kil与pSim6质粒联用是其与pKD46联用的1.2–2倍;外源片段为2 000 bp时,则是pKD46的2.2–5倍。综上,kil与pSim6联用具有更高的重组效率,更有利于大肠杆菌基因组的无痕修饰操作,这为大肠杆菌重组工程提供了更多的选择。