选择性增菌液对单核细胞增生李斯特氏菌的影响

将单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)不同温度下培养在非选择性培养基TSBYE和选择性培养基UVM-LEB、DFB和FB中,从菌体的生长曲线、最高生长温度和最大生长量反映出选择性增菌液对单核细胞增生李斯特氏菌的生长有较明显的抑制作用,其中FB的抑制程度较大,UVM-LEB和DFB的抑制程度较小且相当;37℃下在UVM-LEB、DFB和FB中培养24h能检出的最低菌体浓度分别为5.2个/ml 、52个/ml和5200个/ml,而培养48h相应的值为0.52个/ml、 0.052个/ml和0.52个/ml;比较而言,DFB和FB更优于UVM-LEB。

食品中热损伤沙门氏菌选择性增菌及实时荧光聚合酶链式反应检测

为了能够高效检测食品中的亚致死损伤沙门氏菌,首先采用热激胁迫的方法得到亚致死损伤沙门氏菌细胞,进而基于选择性增菌培养液SEL建立一种实时荧光聚合酶链式反应检测技术。结果表明:在SEL中经过20h增菌培养后,无论是否经过修复培养,1～2CFU/5mL SEL的亚致死损伤细胞都能得到完全修复并增菌至109CFU/mL水平;依此建立的实时荧光聚合酶链式反应检测技术的纯菌扩增效率为95.41%,检测限为4CFU/反应体系,在人工污染碎食品样品中的检测限为3CFU/10g碎牛肉,而且与传统培养检测方法的结果相吻合。本方法在24h内即可完成食品中热损伤沙门氏菌的修复、选择性增菌以及实时荧光聚合酶链式反应检测,可应用于食品中沙门氏菌污染状况调查及高效检测。

选择性增菌液对单核增生性李斯特氏菌检出效果的比较

为了了解食品中单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的污染状况,比较不同选择性增菌方法对单核增生李斯特氏菌的检出效果,并进一步比较不同增菌方法在不同类食品中检出单核增生李斯特氏菌的差异性,进而确定特定食品最合适的增菌方法,随机采集本市生鲜肉、水产品、果蔬及冷冻食品4类135份食品。采用国标LB二次增菌法、EB法、最新改良FDA法及Fraser肉汤增菌法进行增菌,采用PALCAM选择性平板进行分离,先用行标多重PCR法进行初步验证后再进行国标生化鉴定。4种方法共检出单核增生李斯特氏菌23株,其中LB二次增菌法检出5株、Fraser肉汤增菌法检出6株、EB法检出5株、最新改良FDA法检出7株。结论是4种方法总的检出率没有较大的差异性,但对于不同类食品的检出率有所不同。

单增李斯特菌选择性增菌培养分离的初步探讨

目的:寻找一种良好的增菌培养分离法,提高食品中单增李斯特菌(Lm)的检出率。方法:对Fraser肉汤增菌法进行改良,在自行配制的第一液Half-Fraser肉汤中添加氯霉素,观察其对Lm及蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的影响,确定加入氯霉素的最佳适宜量。160份样品同时采用改良Fraser肉汤法、FDA法、国标法增菌培养后,用传统生化鉴定Lm,比较检出率。结果:在Half-Fraser肉汤中添加3.0μg/ml氯霉素不会对样品中的Lm产生明显的影响,但可有效抑制B.cereus的生长。3种增菌培养法以Fraser肉汤增菌法总检出率最高,尤其对速冻食品的检出率达100%,FDA法对灭菌食品的检出率达100%。结论:Half-Fraser肉汤氯霉素的最佳添加量为3.0μg/ml。不同样品类型要用不同的增菌法,必要时用2种以上方法相结合,提高食品中Lm的检出率。

选择性增菌在产TEM型ESBL菌株痰标本检测中的应用

目的:探索选择性增菌在痰标本TEM型ESBL菌株痰标本检测中应用的可行性。方法:从郑州大学第一附属医院30份不重复的痰标本中分离出TEM型ESBLs菌株,采用LB液体培养基进行增菌培养,应用氨苄青霉素(终质量浓度为100mg/L)进行选择抑菌,采用酶抑制剂增强试验及PCR技术进行ESBLs确证。结果:酶抑制剂增强试验中头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸抑菌环直径差大于5mm;PCR扩增产物在约900bp处有明显条带。结论:选择性增菌方法简单、快速,准确,可用于痰标本中TEM型ESBL菌株的检测。

选择性增菌在检测痰标本中SHV型ESBLs菌株的应用

目的探索选择性增菌在检测痰标本中SHV型ESBLs菌株应用的可行性。方法采用含有100μg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基进行选择性增菌,采用双纸片协同法及PCR技术进行ESBLs检测。结果两种方法检测结果均为阳性。结论选择性增菌简单、快速,准确,可用于痰标本中SHV型ESBLs的检测。

基于酸处理的产志贺毒素大肠埃希菌选择性增菌方法研究

目的开发一套基于酸处理的产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing coli,STEC)选择性增菌方法,提高食品中STEC菌株的检出率。方法选择12株不同血清型STEC菌株及13株常见干扰菌,评价其对不同酸处理条件(pH=2.0、2.5、3.0)的耐受性;考察筛选的酸处理条件对营养胁迫和冷冻胁迫状态STEC菌株生长活性的影响;比较研究酸水解酪蛋白、酵母提取物和丙酮酸钠等成分对胁迫状态STEC菌株的促生长作用,优化酸处理后中和/促生长培养基配方;比较增菌前与增菌后2种酸处理方式对STEC菌株分离效果的影响;最后通过人工污染样品,评价本研究建立的STEC酸处理选择性增菌方法的检测效果。结果本研究建立了一种不依赖于抑菌成分的STEC选择性增菌方法,样品在增菌前经酸处理培养基室温处理2 h,降低背景杂菌干扰,再通过中和/促生长培养基[胰蛋白胨大豆肉汤培养基(tryptone soybean broth,TSB)-1.5%Tris-0.1%丙酮酸钠]进行目标菌的增菌培养;人工污染试验结果表明,本方法与我国现行GB4789.36—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》标准方法相比,能够有效减少背景杂菌的干扰、获得更高的STEC分离效率。结论本研究建立的基于酸处理的STEC选择性增菌方法能够有效提高食品中STEC菌株的检测效率和检测准确性。

单增李斯特菌选择性增菌培养和分离方法的比较研究

首先对改良的FDA法、NGFIS法、SN法和国标法4种李斯特菌选择性增菌和分离方法进行比较 ,结果表明 :对于人工污染的样品 (生猪肉、虾、牛奶 ) ,各种增菌方法的检测灵敏度都较高 ,均能检出样品中 <10CFU/g的单增李斯特菌 ;但对于不同自然样品 (生猪肉、调理食品、虾和牛奶 )的李斯特菌检出 ,则以改良的FDA法最佳。本项目设计了英诺克李斯特菌和单增李斯特菌的竞争性试验 ,明确当样品中含有英诺克李斯特菌时 ,增菌时间应缩短。

一种选择性富集沙门菌培养基的研究

通过对多种抑制剂和促进剂的筛选,设计制备了一种新的沙门菌选择性增菌培养基—SEBS培养基,采用螺旋平板计数法、平板计数法和全自动微生物分析系统评价了制备的培养基对沙门菌的选择性增菌效果。

不同增菌液和培养基对沙门菌分离效果的比较研究

通过对各种增菌液和培养基的比较以及组合筛选,选择一种较为有效和简便的分离沙门菌的方法。采用6种常用的选择性培养基对9种血清型的沙门菌以及常见的共生肠道菌大肠杆菌和阴沟肠杆菌分别进行培养,根据生长特点对选择性培养基进行初步筛选,然后对3种常用选择性增菌液进行筛选,将筛选出的增菌液与培养基进行不同组合,检测各血清型沙门菌与大肠杆菌、阴沟肠杆菌的混合物在不同组合中的增菌和分离效果,并对其进行评价。研究结果表明,最佳分离培养方案为样品经SC和TTB增菌后再用显色培养基或者XLT4培养基进行选择性培养。本研究结果优化了沙门菌的常规分离培养方法,可用于不同样品中沙门菌的分离培养,提高沙门菌分离率。

沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌共增菌培养基的研制

为研制出一种能够同时选择性富集沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的培养基,对多种抑制剂和促进剂进行筛选。实验优化出的最佳培养基配方为:胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、磷酸二氢钾2.5g、葡萄糖2.5g、氯化钠35g、氯化锂0.5g、牛胆盐0.1g、甘露醇2g、亚碲酸钾0.3mg,蒸馏水1000mL。沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌等目标细菌在此共增菌培养基中均能快速生长,以103CFU/mL为初始菌浓,18h后菌浓能达到107CFU/mL,而非目标菌在此肉汤中的生长受到抑制。结果表明,此培养基可以用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的选择性共增菌。

乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法

本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。

苯酚降解菌的分离鉴定及降解特性的初步研究

为了筛选高效降解苯酚的微生物,为工业化生物处理受苯酚类污染的工业废水及污染物提供理论指导,采集长期受苯酚污染的污泥,通过选择性增菌、驯化、平板分离、摇瓶复筛等方法从中分离高效降解苯酚菌株。获得一株可耐受高浓度苯酚(2.0g/L)且具有高效降解苯酚能力的假单胞菌(PD3),该菌降解苯酚的最适条件为pH值7.0、温度30℃、苯酚浓度小于0.5g/L。通过调节工业废水及污物中苯酚浓度(小于0.5g/L),可利用分离的假单胞菌(PD3)在上述最适条件下对苯酚进行降解处理。

PNT—PCR检测食品中沙门氏菌方法的建立及应用

本文将自行研制的一种沙门氏菌强选择性增菌液PNT与PCR技术相结合,建立了快速、特异、敏感地检测食品中沙门氏菌的PNT—PCR技术。通过对食品样品、污水样品的检测,结果表明该检测系统可检出食品中10cfu的沙门氏菌。应用本检测系统检测各类食品及污水样品612份,PNT—PCR法检出沙门氏菌198份,而常规方法检出104份,本法在特异性、敏感性及实际样品检出率方面均显示了很强的优越性。

选择性富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的共增菌培养基SVV

本研究通过单因素试验和响应面分析试验建立了能够选择性富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的共增菌培养基SVV,采用平板计数法及三重荧光PCR技术验证了SVV的增菌效果。结果表明：SVV能同时富集以不同浓度比例混合的3种目标菌,37oC振荡培养18h后,菌体浓度达到10^5-10^8CFU/mL;SVV强烈抑制大部分的非目标菌;用荧光PCR方法检测经过37oC振荡培养18h的10份人工接种样品和608份实际样品,结果表明目标菌在SVV中增殖18h后菌量达到检测限以上,SVV联合荧光PCR检测方法的检出率为4.06%,比传统检测方法（3.78%）高,无假阴性和假阳性。SVV可望应用于水产品中沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌检测前的增菌处理,可简化检测过程,有效克服漏检,提高检出率。

检测食品中沙门氏菌的快速方法

目前检测食品中沙门氏菌的标准培养方法是费时的,至少需要3—4天才能获得推测性结果,还需要2—3天以生化试验确诊。因此在食品制造及完成细菌学测试之间有明显延误。甚至一些情况下筛选沙门氏菌只不过是回顾性的。澳大利亚N.H.M.R.C食品微生物学委员会其任务是提出微生物学标准,既考虑对公共卫生的威胁。

天然污染兽医样品中沙门氏菌鉴定的快速培养法的评价

著者以传统方法和他们创造的快速培养法比较如下。1 传统方法 毙体组织先行选择性增菌。1份样品:10份亚硒酸盐胱氨酸肉汤,在37℃孵育48h后,以10μl铂环划线于2只煌绿琼脂平板上,在37℃孵育24h,挑不发酵乳糖的菌落经用血清学及生化试验证实的。2 环境来源

沙门氏菌快速检测方法的新进展

沙门氏菌一直被认为是导致暴发性食物中毒的主要致病菌之一,占细菌性食物中毒总数的60％左右,因此,世界各国都将其作为食品卫生检验的一个重要对象,各国的研究者先后从不同的角度对食品中沙门氏菌的检验方法进行了改进。八十年代初期快速方法,多以选择性增菌培养物为试验材料,到了八十年代末。

改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的应用效果

评估GB 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物检验β型溶血性链球菌检验》中改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的质量。选取国内三家(标记为A、B、C)和国外一家(标记为D)培养基生产商的胰蛋白胨大豆肉汤培养基(商品化脱水合成培养基)和相应添加剂,使用目标菌(乙型溶血性链球菌FSCC225016)和非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC25922),依据GB4789.28-2013《食品安全国家标准食品微生物检验培养基和试剂的质量要求》中选择性增菌培养基的定性测试方法进行质量评估。同时不加添加剂进行试验。国内A、B和C三家改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值均为0,非目标菌浊度值为0;未加试剂的培养基目标菌浊度值均为0,非目标菌浊度值为0。国外D改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值为2,非目标菌浊度值为0;未加试剂的培养基目标菌浊度值为2,非目标菌浊度值为1。国内A、B、C三家的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量评估证明是胰蛋白胨大豆肉汤培养基(不加添加剂)基础成分的问题;国产胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量有待提高。