嗜热栖热菌热稳漆酶在大肠杆菌中的高效表达

通过对漆酶成熟肽编码序列的N端(G1n^2-Val^(84))及中部一富含GC碱基区域(Gly^(278)-Pro^(303)进行密码子优化,成功实现嗜热细菌嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27胞内产极耐热漆酶在大肠杆菌宿主内的超量表达,热激诱导表达后细胞提取液中漆酶活性从(20.7±1.5)U/L升高到(1790.2±81.6)U/L,重组蛋白表达水平提高了86倍。利用全蛋白的极端耐热性,采用两步纯化方法(85℃热预处理和疏水柱层析),获得电泳纯的重组酶蛋白,比酶活为14 U/mg,最终收率为62%。这是首次报道采用pHsh热激表达系统实现该极耐热性细菌漆酶在大肠杆菌宿主体内的高效表达。