选择性自噬接头蛋白p62与Keap1-Nrf2信号通路在神经退行性疾病中的研究进展

在自噬小体形成的过程中,选择性自噬接头蛋白p62作为连接自噬相关蛋白、LC3、聚泛素化蛋白之间的桥梁,通过泛素信号途径将受损的蛋白质、线粒体及入侵的细菌转运到自噬小体中并降解。p62作为一种自噬衔接蛋白将自噬和Keap1-Nrf2通路相关联。p62可竞争性结合Keap1,通过自噬途径将其清除,促使Nrf2解离入核,Nrf2结合到下游抗氧化元件p62启动子区又可促进p62的生成,形成正性反馈环路。神经退行性疾病病因复杂、发病机制尚不清楚,自噬失调以p62调控的非经典途径激活Keap1-Nrf2信号通路成为该领域研究热点。

清热活血方对CIA大鼠自噬相关蛋白p62表达的影响

目的 研究清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠滑膜组织、外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)自噬相关蛋白p62的影响,进一步探讨清热活血方防治类风湿关节炎的相关机制。方法 40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、清热活血方组、依那西普组,用免疫源性牛Ⅱ型胶原造模,造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃,连续治疗28 d后观察大鼠关节肿胀程度,检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)水平、滑膜及PBMC中p62蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现关节红肿,血清TNF-α、IL-1β水平上升(P<0.01),关节滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平上升(P<0.01),p62蛋白相对含量降低(P<0.01)。与模型组比较,清热活血方组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.01),滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平均降低(P<0.01),p62蛋白相对含量升高(P<0.01)。结论 清热活血方可通过下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β水平抑制大鼠滑膜组织及PBMC中p62蛋白的转录,减少p62蛋白的消耗,抑制自噬水平而起到抗炎作用。

STAT3、自噬相关蛋白p62与子宫内膜癌手术治疗预后的关系

目的:观察STAT3、自噬相关蛋白p62与子宫内膜癌(EC)患者手术治疗预后的关系。方法:选择188例EC患者,术后随访2年,比较预后良好与预后不良患者STAT3、自噬相关蛋白p62表达,分析STAT3、自噬相关蛋白p62与EC患者手术治疗预后的关系。结果:188例EC患者随访2年,病死率11.17%。预后不良组STAT3阳性、自噬相关蛋白p62阳性占比高于预后良好组(P<0.05);经Cox回归分析结果显示,STAT3阳性、自噬相关蛋白p62阳性是EC患者手术治疗预后不良的影响因素(P<0.05)。结论:STAT3、自噬相关蛋白p62表达与EC患者预后有关。

p62敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用

目的探讨p62敲除对细胞自噬及泛素化蛋白募集的影响。方法将野生型(Wild Type,WT)和p62基因敲除(p62 knockout,p62-KO)的大鼠肾上皮细胞(NRK)分别分为野生型阴性对照组(WT CT组)和野生型饥饿4 h组(WT Sta4 h组)、p62基因敲除阴性对照组(p62-KO CT组)和p62基因敲除饥饿4 h组(p62-KO Sta4 h组)。WT CT组和p62-KO CT组中加入普通培养基,对细胞进行空白对照处理;WT Sta4 h组和p62-KO Sta4 h组中加入饥饿培养基,对细胞进行饥饿4 h处理。免疫印迹法鉴定和检测p62基因的敲除及自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、泛素化修饰蛋白(Ub)的表达;电子显微镜观察自噬体形成;激光共聚焦显微镜法观察LC3蛋白阳性点状结构的数量。结果鉴定p62基因成功被敲除。饥饿处理4 h后,WT和p62-KO细胞中均能观察到自噬结构(包括自噬体和自噬溶酶体)。与WT CT组比较,WT Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01);与p62-KO CT组比较,p62-KO Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01)。结论p62参与细胞自噬并募集泛素化修饰蛋白,最终影响选择性自噬体底物的凝聚和降解。

非小细胞肺癌患者组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3、P62的表达水平及临床意义

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达水平及临床意义。方法 回顾性选取2022年4月至2023年4月在山东第一医科大学附属人民医院手术的98例NSCLC患者,术中留取病理标本。对照标本选择距离癌组织边缘5 cm内的癌旁组织。采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测各组织中Beclin1、LC3、P62的表达情况。结果 免疫组织化学结果显示,癌组织中Beclin1和LC3阳性表达率显著低于癌旁组织,P62阳性表达率显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,癌组织中Beclin1和LC3表达量显著低于癌旁组织,P62表达量显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Beclin1、LC3、P62阳性表达在性别、年龄和病理类型中的差异无统计学意义(P>0.05);有吸烟史、分化程度越低和TMN分期越高的患者,其Beclin1、LC3阳性表达率越低,P62阳性表达率越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达下调,P62表达上调,自噬作用在NSCLC发生、发展过程中可能发挥作用,Beclin1、LC3、P62可能为NSCLC的早期诊疗提供新的治疗靶点。

核转录因子红系2相关因子2和p62在宫颈鳞状细胞癌和上皮内病变中的表达及诊断价值

目的 探讨核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)与选择性自噬接头蛋白p62/Sequestosome1 (SQSTM1)在诊断宫颈癌和上皮内病变中的价值,并且分析二者在不同宫颈病变中的相关性。方法 收集2008年1月至2021年12月南通市肿瘤医院120例宫颈鳞状细胞癌(SCC)、102例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和101例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)病人及49例宫颈良性/反应性鳞状上皮病人的石蜡标本,免疫组织化学方法检测其中Nrf2和p62的表达,并分析二者在不同宫颈病变中的相关性及评估二者在诊断中的价值。结果 Nrf2和p62在LSIL、HSIL和SCC中表达明显高于良性/反应性宫颈鳞状上皮(均P<0.05),Nrf2和p62在HSIL和SCC中表达明显高于LSIL(均P<0.05),p62在SCC中表达明显高于HSIL(P<0.05),而Nrf2在HSIL中表达稍低于SCC(P<0.05)。Nrf2和p62在良性/反应性宫颈鳞状上皮、LSIL、HSIL和SCC中均具有正相关性,相关系数分别为0.63、0.58、0.69和0.38(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,除Nrf2在诊断HSIL与SCC中差异无统计学意义外,Nrf2、p62以及联合Nrf2和p62在诊断良性/反应性鳞状上皮与LSIL、良性/反应性鳞状上皮与HSIL、良性/反应性鳞状上皮与SCC、LSIL与HSIL、LSIL与SCC、HSIL与SCC各个组别中均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 Nrf2和p62在良性/反应性鳞状上皮中不表达或低表达,LSIL中表达有所增高,HSIL和SCC中表达最高,二者在不同宫颈病变中均具有正相关性,而且单独使用Nrf2或p62就能够有效诊断不同的宫颈病变,二者联用诊断效果更佳。

自噬受体蛋白p62的表达及功能研究

目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。

止颤汤参与帕金森病大鼠自噬途径中P62调节α-突触核蛋白的研究

目的观察止颤汤调节帕金森病(PD)大鼠自噬途径中P62与α-突触核蛋白(α-Syn)表达的研究。方法采用lactacystin注射于大鼠脑部黑质造成PD模型,实验设立对照组、PD模型组、中药组,并采用Western blot及PCR法观察3组大鼠P62与α-Syn的表达情况。结果免疫印迹显示,P62及α-Syn在对照组、模型组、中药组的含量为(0.27±0.03,0.23±0.03;0.73±0.07,0.51±0.02;0.38±0.16,0.37±0.03),模型组较对照组明显升高(P<0.01),中药组与对照组相比基本接近(P>0.05)。与模型组相比有统计学意义(P<0.01);PCR结果提示,P62及α-Syn在3组的含量为(0.45±0.05,0.17±0.07;8.93±1.68,10.81±1.9;2.66±0.96,1.65±0.76),模型组的含量较对照组明显上升(P<0.01),中药组与模型组相比数值下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论止颤汤可以调节自噬途径中的P62蛋白,降低α-Syn的表达,可能是止颤汤治疗帕金森病的机制。

表皮生长因子受体、自噬相关蛋白5、p62蛋白在甲状腺乳头状癌合并颈部淋巴结转移中的表达及临床意义

目的分析表皮生长因子受体(EGFR)、自噬相关蛋白5(ATG5)、p62在甲状腺乳头状癌(PTC)合并颈部淋巴结转移患者中的表达及意义。方法取80例PTC患者的PTC组织及相应的癌旁正常组织,同时取其中合并颈部淋巴结转移的45例患者的转移淋巴结组织标本。免疫组化法检测PTC组织、转移淋巴结组织和癌旁正常组织中EGFR、ATG5、p62蛋白的表达情况,及其与PTC患者临床特征及生存情况的关系。结果PTC组织和转移淋巴结组织中EGFR、p62蛋白的阳性表达率均高于癌旁正常组织,ATG5蛋白的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同TNM分期和淋巴结转移情况PTC患者PTC组织中ATG5蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况PTC患者PTC组织中p62蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,PTC组织和转移淋巴结组织中,ATG5的表达与p62呈负相关(P﹤0.01)。对80例PTC患者进行为期3年的随访,病死22例,3年生存率为72.50%(58/80)。p62阳性表达PTC患者的3年生存率为65.52%,低于阴性表达患者的90.91%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Cox风险比例回归模型结果显示,TNM分期、淋巴结转移、EGFR阳性表达、p62阳性表达为PTC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05),ATG5阳性表达为PTC患者预后的独立保护因素(P﹤0.05)。结论PTC组织及淋巴结转移组织中EGFR、p62的阳性表达率较高,ATG5的阳性表达率较低,此外,ATG5及p62与PTC生物学行为有关,可能成为PTC诊断的潜在指标。

Sequestosome 1/p62蛋白在癫痫中的作用研究进展

癫痫(epilepsy)是儿童常见的慢性脑疾病,反复的癫痫发作可引起不可逆的脑损伤,给患儿及其家庭带来沉重的负担。临床实践中约有三分之一病例为药物难治性癫痫患者,饱受反复惊厥发作的痛苦,亟需寻找新的治疗干预措施。研究发现,作为自噬关键分子的Sequestosome 1/p62可能通过其多功能结构域参与调节多种信号通路,包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路及炎症信号通路。进一步探索p62蛋白在癫痫中的作用及潜在机制具有重要意义。本文就p62蛋白结构及功能进行探讨,并对其在癫痫中的可能作用、相关机制及潜在治疗意义进行综述。

LC-3、Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、自噬调控因子Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析93例NSCLC患者资料,比较癌组织和癌旁组织LC-3、Beclin-1和P62表达情况;比较LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者临床病理特征差异。结果 癌组织LC-3、Beclin-1阳性率低于癌旁组织,P62表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者肺癌病理类型、TNM分期以及分化程度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LC-3、Beclin-1和P62表达情况与NSCLC患者病理类型、TNM分期以及分化程度有密切联系。LC-3、Beclin-1表达降低及P62表达升高与肺癌的发生发展相关,可作为NSCLC患者早期评估的辅助指标。

EGFR和自噬相关蛋白Atg5、p62在宫颈癌中的表达及意义研究

目的分析表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和自噬相关蛋白Atg5、p62在宫颈癌患者中的表达,探讨其与临床病理及预后因素的关系。方法收集2014年6月至2018年2月收治的80例经病理学证实为宫颈癌患者的组织标本及其癌旁正常组织标本,同时收集上述患者伴有盆腔淋巴结转移组织标本45例。比较宫颈癌组织、转移淋巴结组织和正常组织中EGFR、Atg5、p62表达情况和以上指标与宫颈癌患者临床病理特征及生存情况的关系。结果EGFR、p62在宫颈癌组织转移淋巴结组织中表达率均明显高于癌旁正常组织(P<0.05),Atg5在宫颈癌组织中和转移淋巴结组织中表达率分别为21.25%、33.33%,明显低于正常组织(P<0.05)。EGFR表达阳性率与宫颈癌临床病理参数均无相关性(P>0.05)。Atg5、p62在不同年龄及肿瘤直径中的表达差异无统计学意义(P>0.05),p62表达随肿瘤分化程度升高而降低,不同分化程度间差异有统计学意义(P<0.05),Atg5在不同肿瘤分化程度间差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴结转移患者中的Atg5表达分别低于Ⅰ+Ⅱ期组和无淋巴转移组(P<0.05),而p62的表达与之相反。Spearman相关分析显示,宫颈癌组织中Atg5和p62的表达呈明显负相关(r=-0.656,P<0.01),EGFR与Atg5和p62无相关性(P>0.05);在转移淋巴结组织中,Atg5和p62的表达呈负相关(r=-0.562,P<0.01),EGFR与Atg5和p62无明显相关性(P>0.05)。80例患者随访3年死亡22例,3年生存率为72.50%(58/80),宫颈癌组织中EGFR及p62高表达者3年生存率分别低于EGFR及p62低表达者,而Atg5高表达者3年生存率高于低表达者(P<0.05)。Cox比例风险模型分析显示:TNM分期、淋巴结转移、EGFR、p62为宫颈癌预后的独立危险因素,Atg5为保护因素。结论EGFR、p62在宫颈癌组织及淋巴结转移组织中呈高表达,而Atg5呈低表达,三者可作为宫颈癌患者预后独立预测因素,此外,Atg5及p62与宫颈癌生物学行为有关,可能成为宫颈癌诊断的潜在指标。

胰腺癌患者自噬标记蛋白Beclin-1和P62的表达及其相关性

目的分析不同来源胰腺组织中自噬标记蛋白Beclin-1和P62含量的差异及其相关性。方法选取60例胰腺癌临床确诊患者、60例胰腺炎确诊患者和60例健康居民作为研究对象,应用免疫组织化学法检测胰腺组织中自噬相关蛋白Beclin-1和P62的含量差异,并分析不同病情的胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异,同时对2种标记物进行相关性分析。结果 4组不同来源胰腺组织中Beclin-1蛋白(F=1013. 51,P=0. 00),P62(F=355. 72,P=0. 00)含量的差异具有统计学意义;且两两比较发现,Beclin-1蛋白和P62含量的差异均显著(均有P <0. 05)。不同病情(肿瘤大小、分化程度、病变部位、TNM分期、周围组织侵犯情况)胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异也显著(P均<0. 05);胰腺癌患者病理组织进行免疫组化分析,阳性物质中Beclin-1的平均积分光密度(252130. 47±20147. 33),P62表达强度评分(5. 13±1. 46),两者呈显著相关(Pearson=0. 87,P=0. 00)。结论 Beclin-1和P62与胰腺癌的发生发展密切相关,且Beclin-1和P62呈显著相关性,不同病情胰腺癌患者亦存在差异性表达。

不明原因羊水过少孕妇胎盘组织中自噬体及自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和P62的表达情况

目的分析不明原因羊水过少孕妇的胎盘组织中自噬体、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和P62的表达情况,探讨不明原因羊水过少与自噬反应的关系。方法收集足月妊娠的30例不明原因羊水过少产妇(观察组)和30例羊水量正常产妇(对照组)的胎盘组织。使用透射电子显微镜观察胎盘组织内自噬体表达情况,免疫印迹试验和免疫组化法分别检测胎盘组织LC3-Ⅱ、P62蛋白的表达水平,苏木精-伊红染色观察胎盘组织的病理变化。结果透射电镜下发现观察组的胎盘组织内部出现双层膜结构的自噬体。免疫印迹试验和免疫组化实验结果均显示,与对照组比较,观察组的LC3-Ⅱ蛋白表达量升高,P62蛋白表达量降低(均P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,对照组胎盘组织内部细胞排列整齐,观察组的胎盘组织内出现大量血管损伤。结论不明原因羊水过少孕妇的胎盘组织中自噬体和自噬反应表达增加。推测胎盘组织中自噬反应过度致使细胞发生自噬性死亡,血管组织发生破损,可能为不明原因羊水过少的发生机制。

喉癌组织中自噬相关蛋白p62的表达及意义

目的:探讨自噬相关蛋白p62在喉癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2010年1月~2015年4月于福建省肿瘤医院行喉癌根治性切除术的115例患者为研究对象,采用免疫组化检测喉癌组织及癌旁正常组织石蜡标本p62蛋白表达水平,并分析与临床病理特征及预后的关系。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测25例冷冻保存的新鲜喉癌组织标本中p62mRNA及蛋白的表达水平。结果:石蜡标本中,p62在喉癌石蜡组织中表达阳性率为56.5%,高于癌旁正常组织的23.5%。p62与喉癌的浸润深度、淋巴结转移、病理分期有关,p62阳性患者的5年生存率低于p62阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。在新鲜喉癌组织中,p62mRNA及蛋白表达水平比相应的癌旁正常组织增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:喉癌组织中p62的表达水平增高,与喉癌的发生、发展有关,阳性表达预示患者预后欠佳。

血清自噬相关蛋白P62在急性胰腺炎患者中的表达及与预后的关系研究

目的:探究血清自噬蛋白P62在急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者中的表达及与预后的关系。方法:选择2018年1月-2021年1月于佳木斯市中心医院接受治疗的60例AP患者为研究对象,将其分为轻度AP组(n=32)和重度AP组(n=28),对比两组患者入院时C反应蛋白(CRP)、P62和APACHE-Ⅱ评分差异。将60例患者按照临床结局分组,存活且无器官衰竭等严重并发症患者设为预后良好组(n=41),死亡或出现器官衰竭患者设为预后不良组(n=19),对比两组入院时CRP、P62和APACHE-Ⅱ评分差异,Pearson相关性分析探究P62与APACHE-Ⅱ评分相关性,绘制P62对AP不良结局的ROC曲线图。结果:轻度AP组CRP、P62以及APACHE-Ⅱ评分均明显低于重度AP组,预后不良组CRP、P62以及APACHE-Ⅱ评分均明显高于预后良好组(P<0.05);Pearson相关性分析显示P62水平与CRP、APACHE-Ⅱ评分均呈现明显的正相关性(r=0.933 1、0.950 0,P<0.000 1);ROC曲线绘制显示P62对AP不良结局评估AUC为0.957 0[95%CI(0.893 9,1.000 0),P<0.000 1]。结论:血清自噬相关蛋白P62与AP患者的病情及预后存在密切关联,可以考虑将P62作为评估AP患者病情及预后的实验室指标应用于临床推广。

细胞自噬的调节机制与选择性降解(英文)

细胞自噬是一个多步骤的降解过程.当细胞自噬发生时,具有双层膜结构的自噬小体先把待降解的细胞内容物包裹起来,然后与溶酶体融合将内容物降解.细胞自噬起初仅被认为是对营养缺乏的适应性机制,是一个非选择性降解过程.近些年来不断深入的研究表明,细胞自噬同时还参与了抵抗炎症、肿瘤、神经退行性变及心脏病等重要生理过程.随着细胞自噬受体蛋白p62的发现,人们进一步认识到细胞自噬还是一个具有高度选择性的降解过程.本文综述了细胞自噬的调节机制及其对一些蛋白聚合体的选择性降解.

电针对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织自噬相关蛋白表达的影响

目的观察电针对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠肝脏组织自噬相关蛋白表达的影响,探讨电针治疗IR的潜在机制。方法将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组8只。电针干预选取中脘、关元、足三里及丰隆穴,每周干预3次,共8周。检测各组大鼠的餐后血糖(postprandial blood glucose,PBG)、腹腔糖耐量实验(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)血糖、葡萄糖输注率(glucose infusion rate,GIR)。采用高压尾静脉注射GFP-LC3质粒,观察肝细胞GFP-LC3荧光斑,Western Blot法检测大鼠肝脏组织中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3B-Ⅱ)、p62(sequestosome 1,p62)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-AKT,p-AKT)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、磷酸化胰岛素受体底物-1(phosphorylated-IRS-1,p-IRS-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组PBG显著上升(P<0.01),GIR显著降低(P<0.01),IPGTT血糖水平明显上升(P<0.05),肝脏组织p62蛋白表达显著上升(P<0.01),LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.01),IRS-1、p-AKT、p-IRS-1蛋白表达显著降低(P<0.01),GFP-LC3绿色荧光蛋白荧光密度显著降低(P<0.01);与模型组相比,电针组PBG显著降低(P<0.05),GIR显著上升(P<0.01),IPGTT血糖水平明显降低(P<0.05),肝脏组织p62蛋白表达显著降低(P<0.01),LC3B-Ⅱ蛋白表达显著上升(P<0.01),p-IRS-1蛋白表达显著上升(P<0.05),GFP-LC3绿色荧光蛋白荧光密度显著上升(P<0.01)。结论电针可以通过激活肝脏自噬提高全身与肝脏胰岛素敏感性,改善IR。

多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3Ⅱ及p62表达的影响

利用Western杂交检测自噬标记物LC3Ⅱ和p62的表达是评价细胞自噬活性的常用方法。为了比较作用于不同靶点的细胞自噬调节剂对LC3Ⅱ和p62表达的影响,分别利用以mTOR依赖或非依赖方式活化细胞自噬的雷帕霉素或海藻糖、抑制自噬起始的3-甲基腺嘌呤、抑制自噬小体与溶酶体融合的巴弗洛霉素A1以及抑制溶酶体酶活性的E64d和pepstatin A处理HEK293细胞,通过Western杂交检测LC3Ⅱ和p62的表达。结果显示,雷帕霉素增强LC3I向LC3Ⅱ转化,促进p62降解,而海藻糖仅引起LC3Ⅱ表达的上调;阻断细胞自噬过程各个阶段均导致LC3Ⅱ和p62堆积,并呈现出剂量和时间依赖性。这些结果提示尽管LC3Ⅱ和p62均为自噬标记物,但不同的调节剂对其表达的调控存在差异。

多功能蛋白P62在tau转基因小鼠脑中的表达

目的:探讨含P301L转基因小鼠脑中与自噬相关的多功能蛋白p62(p62/SQSTM1/sequestosome 1,p62)的表达情况。方法:取3月龄和9月龄雄性人tau基因P301L突变转基因小鼠及同窝雄性野生型小鼠脑组织,采用Western blotting方法检测各组小鼠脑匀浆中tau蛋白磷酸化水平和p62表达水平,并通过免疫组化的方法检测小鼠脑片海马区域磷酸化tau蛋白和p62的表达情况。结果:Western blotting结果显示,P301L转基因小鼠和野生型小鼠脑内tau蛋白磷酸化和p62蛋白水平均随着年龄的增长而增加;P301L转基因小鼠脑内tau蛋白磷酸化水平高于同龄野生型小鼠,而p62水平低于野生型小鼠。免疫组化染色结果显示,P301L转基因小鼠海马tau蛋白磷酸化水平增高,且阳性神经元的数量随年龄的增长而增加;P301L转基因小鼠海马p62表达较同龄野生型小鼠显著减少。结论:P301L转基因小鼠脑内p62表达量减少,尤其表现在海马区,提示tau蛋白过度磷酸化导致自噬水平异常增高。