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豌豆根瘤菌透性酶基因突变体的构建及其功能研究 被引量:1
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作者 周艳琳 曾小波 +2 位作者 田梦洋 殷杰 程国军 《湖北农业科学》 2015年第18期4613-4616,共4页
为研究豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum)3841透性酶基因rl1568的作用,通过同源重组构建了豌豆根瘤菌透性酶基因rl1568突变体。结果表明,rl1568基因突变不影响菌株在自生培养条件下生长,但该基因突变株对低浓度的氧化物十分敏感且生... 为研究豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum)3841透性酶基因rl1568的作用,通过同源重组构建了豌豆根瘤菌透性酶基因rl1568突变体。结果表明,rl1568基因突变不影响菌株在自生培养条件下生长,但该基因突变株对低浓度的氧化物十分敏感且生长较差。荧光定量RT-PCR结果表明,H2O2不能诱导rl1568基因表达。植物盆栽试验发现rl1568基因突变对根瘤菌共生固氮能力无影响。 展开更多
关键词 豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum) 透性酶 rl1568基因 抗氧化 共生固氮
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病原菌寡肽透性酶免疫原性的研究进展 被引量:3
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作者 何庆芳 王晴 《内蒙古中医药》 2011年第8期110-110,共1页
病原茵的寡肽透性酶(oligopeptide permease,简称opp)是一种免疫原,具有刺激免疫活性细胞产生免疫应答的能力。它通过介导免疫细胞凋亡,激起免疫细胞内细胞因子的大量释放,直接引导机体修复的进程和机体损伤处组织、细胞坏死碎片和病原... 病原茵的寡肽透性酶(oligopeptide permease,简称opp)是一种免疫原,具有刺激免疫活性细胞产生免疫应答的能力。它通过介导免疫细胞凋亡,激起免疫细胞内细胞因子的大量释放,直接引导机体修复的进程和机体损伤处组织、细胞坏死碎片和病原体等的清除。 展开更多
关键词 寡肽透性酶 免疫应答 细胞凋亡 细胞因子
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水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14启动子克隆及时空表达特性分析
3
作者 李泓雨 张林 +5 位作者 聂圣松 杨过 杭俊楠 黄玮婷 方中明 查仁明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2857-2867,共11页
【目的】克隆水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14的启动子序列并分析其时空表达特性,为解析氨基酸转运基因生物学功能及了解水稻对有机氮源的响应和氨基酸吸收利用提供理论依据。【方法】PCR扩增OsAAP14基因的启动子序列,并与p CAMBIA1391Z空... 【目的】克隆水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14的启动子序列并分析其时空表达特性,为解析氨基酸转运基因生物学功能及了解水稻对有机氮源的响应和氨基酸吸收利用提供理论依据。【方法】PCR扩增OsAAP14基因的启动子序列,并与p CAMBIA1391Z空载体质粒连接构建出启动子-GUS表达载体,并通过农杆菌介导侵染水稻中花11愈伤组织,获得OsAAP14基因的启动子-GUS转基因植株,通过对转基因植株不同组织部位进行GUS染色,并采用石蜡切片技术观察各组织细胞部位表达,经5种不同氨基酸处理后进行根部GUS染色,结合实时荧光定量PCR检测OsAAP14基因在GUS染色部位的相对表达量,最后综合分析该基因的时空表达特性。【结果】克隆获得OsAAP14基因启动子序列为1993 bp,与参考序列日本晴OsAAP14(LOC_Os04g56470)序列一致。该启动子序列含有MBS、P-box、ABRE、CGTCA-motif等激素或胁迫响应元件。从OsAAP14基因的启动子-GUS植株T0代中鉴定获得16个阳性转基因株系。T1代材料不同组织部位GUS染色及实时荧光定量PCR结果均显示,OsAAP14基因在水稻芽伸长的基部和叶片相对表达量较高,在根、叶鞘和穗也有一定表达,但在茎中的相对表达量最低。石蜡切片分析结果显示,OsAAP14基因在根部皮层薄壁细胞、叶片的叶肉细胞、穗的颖壳内部细胞有较高的表达。碱性氨基酸的组氨酸处理下根中的OsAAP14基因表达量随着处理时间的增加显著提高(P<0.05,下同),且赤霉素和脱落酸处理下,根中的OsAAP14基因相对表达量也显著提高。【结论】OsAAP14基因在水稻不同组织均有表达,正常情况(未处理)下在水稻基部和叶片中相对表达量较高,但外源氨基酸和激素处理时,在根中该基因被诱导表达上调,说明OsAAP14基因正常情况下可能主要参与调控水稻地上部分氨基酸的运输,但当外界氨基酸和激素含量增加时则参与调控水稻根部氨基酸的运输。 展开更多
关键词 水稻 氨基酸透性酶(AAP) 氨基酸转运 启动子 基因表达
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大豆氨基酸透性酶基因GmAAP2-like 1的克隆及功能初探 被引量:2
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作者 李美美 夏铜梅 +2 位作者 王丹 梅圆圆 王宁宁 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期85-91,共7页
氨基酸透性酶(amino acid permeases)在植物不同器官的氨基酸转运过程中发挥着重要作用,但迄今为止,大豆中氨基酸透性酶相关的研究甚少。本文利用大豆初生叶水培系统对大豆(Glycine max)品种‘Williams 82’进行缺氮处理后,发现与足氮... 氨基酸透性酶(amino acid permeases)在植物不同器官的氨基酸转运过程中发挥着重要作用,但迄今为止,大豆中氨基酸透性酶相关的研究甚少。本文利用大豆初生叶水培系统对大豆(Glycine max)品种‘Williams 82’进行缺氮处理后,发现与足氮对照相比,大豆初生叶中Gm AAP2-like 1基因的表达明显上调。对大豆不同器官中Gm AAP2-like 1的转录水平进行RTPCR检测,结果显示该基因在花、叶和茎中的表达量较高而在根和种子中表达量很低。构建Gm AAP2-like 1(无内含子)过表达植物表达载体,在转化农杆菌时发现,该载体转化农杆菌GV3101致死;改进载体构建策略,采用融合PCR方法,在Gm AAP2-like 1的第一个外显子后插入一段内含子序列,改进的载体可以成功转化农杆菌。应用农杆菌介导的花苞浸泡法转化拟南芥,对所获得的转基因拟南芥抗性苗进行基因组PCR和RT-PCR鉴定,共检测到8个Gm AAP2-like 1不同程度表达的转基因拟南芥株系,且其中的内含子都得到了正确的剪切。氨基酸有毒类似物(MSX)处理实验表明:转基因拟南芥对MSX处理比野生型更为敏感,暗示Gm AAP2-like 1具有运输谷氨酸等酸性氨基酸的功能。 展开更多
关键词 大豆 氨基酸透性酶 缺氮 融合PCR 氨基酸运输
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透性化细胞海藻糖合酶特性的研究 被引量:7
5
作者 薛璐 马莺 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期26-29,共4页
海藻糖是一种新型食品添加剂,目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。研究表明,该细胞酶的反应最适温度为35℃,最适pH7.4,Mg2+及K... 海藻糖是一种新型食品添加剂,目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。研究表明,该细胞酶的反应最适温度为35℃,最适pH7.4,Mg2+及K+对该细胞酶有明显激活作用,Zn2+,Mn2+及Cu2+则可强烈地抑制酶活力。该酶对底物特异性极强,能特异性地将麦芽糖转化为海藻糖。 展开更多
关键词 海藻糖 化细胞海藻糖合 学特
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脱乙酰几丁质的制备及其对细胞透性和脱乙酰几丁酶活性的影响 被引量:8
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作者 巫钢 张志良 +3 位作者 张利华 王喜生 黄信敏 朱俭才 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第2期102-107,共6页
虾壳经盐酸和氢氧化钠处理,高锰酸钾漂白,制得几丁质,几丁质经50%NaOH处理,获得脱乙酰几丁质,制得的脱乙酰几丁质能溶于3%醋酸中。植物离体叶片经不同浓度脱乙酰几丁质处理,用电导法和染料结合法,分别测定细胞中电解质... 虾壳经盐酸和氢氧化钠处理,高锰酸钾漂白,制得几丁质,几丁质经50%NaOH处理,获得脱乙酰几丁质,制得的脱乙酰几丁质能溶于3%醋酸中。植物离体叶片经不同浓度脱乙酰几丁质处理,用电导法和染料结合法,分别测定细胞中电解质和蛋白质的外渗量,用分光光度法测定脱乙酰几丁酶的活性。结果表明,脱乙酰几丁质能使多种植物电解质的外渗量增加,脱乙酰几丁质的浓度愈大,处理的时间愈长,则外渗量增加愈显著。易染赤霉病的小麦品种比抗赤霉病的小麦品种,叶片电解质的外渗量增加。外渗量的增加与脱乙酰几丁质的浓度及处理的时间有关。叶片中蛋白质的外渗与电解质的外渗情况相似,易染病的品种比抗病的品种,蛋白质的外渗量增加70%-80%。脱乙酰几丁质处理,使抗病品种叶片中脱乙酰几丁酶的活性增加40%-60%。在同样条件下,不抗病品种酶的活性变化不大。文中对所得结果与植物抗病性之间的关系进行了讨论。 展开更多
关键词 脱乙酰几丁质 活乙酰几丁
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LIPI-4 EⅡA基因对单核细胞增生性李斯特菌重要毒力基因转录调控作用的研究 被引量:4
7
作者 刘彩霞 高盛杰 +8 位作者 寇丽君 马勋 王静 孔翠莲 史唯地 吕双飞 任慧杰 康立超 殷月兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1269-1276,共8页
为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)的膜透性酶ⅡA(EⅡA)基因在LM中的毒力作用,本研究利用同源重组技术构建了具有遗传稳定性的LM928菌株EⅡA基因缺失株(LM928ΔEⅡA)和回补株(CLM928ΔEⅡA),通过对缺失株、回补株和亲本... 为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)的膜透性酶ⅡA(EⅡA)基因在LM中的毒力作用,本研究利用同源重组技术构建了具有遗传稳定性的LM928菌株EⅡA基因缺失株(LM928ΔEⅡA)和回补株(CLM928ΔEⅡA),通过对缺失株、回补株和亲本株生长特性测定分析EⅡA基因对LM体外生长能力的影响。提取各菌株RNA,反转录为c DNA后通过real-time PCR检测各菌株在体外培养条件下LM重要毒力基因的转录水平,分析EⅡA基因缺失对LM毒力基因转录水平的影响。结果显示,缺失EⅡA基因后不影响细菌在体外的生长能力,但细菌plcB和inlA基因的转录水平显著下调(P<0.05),hly、prfA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl基因的转录水平极显著下调(P<0.01),plcA基因的转录水平极显著上调(P<0.01),而actA基因的转录水平无明显变化(P>0.05)。将LM928、LM928ΔEⅡA和CLM928ΔEⅡA菌株分别感染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)后,采用CCK8法检测EⅡA基因对HCMEC/D3活性的影响,同时通过胞内增殖试验检测EⅡA基因对LM胞内增殖的影响,进一步采用real-time PCR方法检测EⅡA对细胞毒力基因转录水平的影响,结果显示,与LM928组相比,LM928ΔEⅡA组HCMEC/D3细胞活性无明显改变;LM928ΔEⅡA感染HCMEC/D3后6 h~12 h,胞内LM928ΔEⅡA载菌量极显著高于胞内LM928载菌量(P<0.01),在感染HCMEC/D3后2 h~12 h,胞内LM928ΔEⅡA载菌量也极显著高于胞内CLM928ΔEⅡA的载菌量(P<0.01)。相对于亲本株,LM928ΔEⅡA感染的细胞中毒力基因prf A、plc A、plc B、inl A、inl B、inl C和mpl转录水平均极显著上调(P<0.01),actA基因的转录水平显著上调(P<0.05),hly基因的转录水平极显著下调(P<0.01)。本研究结果首次证实LIPI-4中EⅡA基因对LM体外生长无影响,但其对体内、外LM毒力因子的转录均具有显著的调控作用,提示LM LIPI-4可能通过EⅡA参与调控细菌毒力,该结果为进一步研究LIPI-4在LM致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 毒力岛4 透性酶ⅡA 缺失株 毒力基因
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LIPI-4 EⅡC调控单增李斯特菌关键毒力因子转录的研究 被引量:1
8
作者 刘彩霞 史唯地 +8 位作者 寇丽君 马勋 王静 高盛杰 吕双飞 陈旭珂 曾东东 孔翠莲 任慧杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1340-1351,共12页
【目的】探究单增李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶ⅡC(EⅡC)对LM关键毒力基因表达的影响。【方法】构建分离株LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC,测定各菌株的生长曲线和对不同糖的发酵情况,测定侵染人脑... 【目的】探究单增李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶ⅡC(EⅡC)对LM关键毒力基因表达的影响。【方法】构建分离株LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC,测定各菌株的生长曲线和对不同糖的发酵情况,测定侵染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)后的黏附、侵袭和胞内增殖能力,利用实时荧光定量PCR方法检测在脑心浸液(BHI)培养条件下和侵染HCMEC/D3后各菌株毒力基因的转录水平。【结果】成功构建LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC。EⅡC基因的缺失不影响LM928的生长和对葡萄糖、纤维二糖、果糖、鼠李糖、七叶苷和水杨苷的发酵。EⅡC基因缺失后,LM928对HCMEC/D3的侵袭率极显著下降(P<0.01),黏附能力无显著变化(P>0.05)。LM928ΔEⅡC胞内增殖菌量在2~4 h时显著低于LM928和CLM928ΔEⅡC(P<0.05),但在8~12 h时均显著高于LM928和CLM928ΔEⅡC(P<0.05)。在BHI培养条件下,LM928ΔEⅡC毒力基因hly、prfA、actA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl转录水平极显著下调(P<0.01),毒力基因plcA转录水平极显著上调(P<0.01);在侵染HCMEC/D3后,LM928ΔEⅡC毒力基因hly、prfA、inlB、inlC和mpl转录水平相对于LM928和CLM928ΔEⅡC显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01),毒力基因plcA和inlA相比于CLM928ΔEⅡC极显著下调(P<0.01),毒力基因actA和plcB转录水平无显著差异(P>0.05)。【结论】LIPI-4中EⅡC不参与LM928的生长及其对部分糖的发酵,能调控LM中重要的侵袭相关基因和毒力相关基因。本试验结果为进一步探究EⅡC在LM和LIPI-4中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力岛4 透性酶ⅡC 毒力基因
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氮代谢调控相关蛋白质泛素化修饰筛选 被引量:3
9
作者 吕永坤 周景文 刘龙 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期576-582,共7页
通过对氮代谢相关透性酶及调控因子泛素化修饰的筛选,为通过改造蛋白质泛素化修饰来解除氮代谢阻遏效应提供参考。对此前建立的一种蛋白质泛素化快速检测方法进行了改造和发展,进一步增强了阳性子的荧光信号,并使得该方法可以用于定量分... 通过对氮代谢相关透性酶及调控因子泛素化修饰的筛选,为通过改造蛋白质泛素化修饰来解除氮代谢阻遏效应提供参考。对此前建立的一种蛋白质泛素化快速检测方法进行了改造和发展,进一步增强了阳性子的荧光信号,并使得该方法可以用于定量分析,从而使泛素化检测的结果更为可靠。对氮代谢物阻遏效应密切相关的10个蛋白质的检测结果表明,其中5个受到泛素化修饰,4个不能受到泛素化修饰,1个不能确定是否受到泛素化修饰。除建立了一种可靠的蛋白质泛素化检测方法,也为通过蛋白质泛素化调控途径解除氮代谢物阻遏效应提供了思路。 展开更多
关键词 酿酒酵母 透性酶 调控因子 泛素化 检测
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拟南芥AAP6基因的克隆与转化马铃薯的研究 被引量:1
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作者 李倩 王罡 +9 位作者 张松皓 杨丹 王昱蓉 季静 安婷 李辰 马志刚 史怀宇 关春峰 刘玉 《天津大学学报(自然科学与工程技术版)》 EI CSCD 北大核心 2018年第9期941-948,共8页
氨基酸透性酶(AAP)是植物中的氨基酸转运蛋白,在氨基酸转运过程中发挥着重要作用.以野生拟南芥(生态型col-0)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆得到拟南芥中的氨基酸透性酶基因(At AAP6).该基因全长1,446,bp,构建At AAP6基因的植物表达... 氨基酸透性酶(AAP)是植物中的氨基酸转运蛋白,在氨基酸转运过程中发挥着重要作用.以野生拟南芥(生态型col-0)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆得到拟南芥中的氨基酸透性酶基因(At AAP6).该基因全长1,446,bp,构建At AAP6基因的植物表达载体pCAMBIA2300-At AAP6,并利用农杆菌介导的遗传转化方法在马铃薯品种"早大白"中异源过表达At AAP6基因.经过抗性筛选与植株再生,成功得到马铃薯转基因植株,并诱导得到转基因马铃薯微型薯.RT-PCR结果表明,At AAP6基因在转基因马铃薯中都能正常地转录表达.这一研究为进一步开展At AAP6基因功能验证,提高马铃薯块茎中的氨基酸以及贮藏蛋白的含量提供了研究基础. 展开更多
关键词 氨基酸透性酶 马铃薯 AtAAP6基因 表达载体 遗传转化
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酵母的BAP2基因-控制高级醇的产 被引量:5
11
作者 袁静 《啤酒科技》 2002年第5期55-57,60,共4页
本文研究了发酵过程中高级醇的产生与基本氨基酸代谢的关系.在发酵液中加入一定量的缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸,结果酵母对这三种氨基酸的同化作用增强,相应高级醇的产量也增加了,表明啤酒的高级醇含量与相应氨基酸的同化作用有关.于是,... 本文研究了发酵过程中高级醇的产生与基本氨基酸代谢的关系.在发酵液中加入一定量的缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸,结果酵母对这三种氨基酸的同化作用增强,相应高级醇的产量也增加了,表明啤酒的高级醇含量与相应氨基酸的同化作用有关.于是,我们尝试从啤酒酵母基本氨基酸透性酶的BAP2基因表达着手,研究了它在发酵过程中对基本氨基酸同化的影响和对高级醇产生的影响.BAP2基因的表达能促进缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的同化率,从而导致啤酒中异戊醇(由亮氨酸合成)含量增加,但由缬氨酸合成的异丁醇和由异亮氨酸合成的戊醇并没有增加.而且结果还显示每种高级醇的合成机理是相互联系的. 展开更多
关键词 基本氨基酸 基因技术 透性酶
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LIPI-4EII对单核细胞增生性李斯特菌关键毒力因子转录调控的影响
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作者 史唯地 马勋 +8 位作者 刘彩霞 寇丽君 吕双飞 任慧杰 曾东东 王静 孔翠莲 高盛杰 钱瑞宣 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期191-202,共12页
为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用,本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(help))和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(native)),测定各菌株... 为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用,本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(help))和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(native)),测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况;RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平。结果显示:(1)EII基因缺失株LM928ΔEII构建成功,重组回补质粒pIMK2-EII和pIMK2-EII-P_(native)及回补株CLM928ΔEII-P_(help)和CLM928ΔEII-P_(native)构建成功。(2)在体外培养下,EII对LM的生长曲线没有影响。但在侵染HCMEC/D3后,LM928ΔEII在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P<0.05),2和4 h的胞内细菌量极显著高于LM928(P<0.01),CLM928ΔEII-P_(native)在2、4和6 h恢复至野生株水平(P>0.05),而CLM928ΔEII-P_(help)在2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P<0.01)。(3)体外培养条件下,相比于野生株,LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01);CLM928ΔEII-P_(help)中66.7%(6/9)的基因转录水平上升1~4倍,CLM928ΔEII-P_(native)中88.9%(8/9)的基因转录水平倍数变化在1倍以内。在HCMEC/D3细胞内,相比于野生株,LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01);CLM928ΔEII-P_(help)中33.3%(3/9)的基因转录水平上调1~3倍,CLM928ΔEII-P_(native)中基因转录水平倍数变化在1倍以内。综上,LIPI-4 EII对LM关键毒力因子的转录具有负调控作用。本研究为系统探究LIPI-4参与LM致病性机制奠定基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 LIPI-4 透性酶(EII) 缺失株 毒力基因
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Effect of Soil Drought Stress on Leaf Water Status, Membrane Permeability and Enzymatic Antioxidant System of Maize 被引量:84
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作者 BAI Li-Ping SUI Fang-Gong +3 位作者 GE Ti-Da SUN Zhao-Hui LU Yin-Yan ZHOU Guang-Sheng 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2006年第3期326-332,共7页
A simulation experiment on the responses of maize (Zea mays L.) from the third leaf stage to maturity for different soil water levels (well-watered, moderately stressed, and severely stressed) was conducted by control... A simulation experiment on the responses of maize (Zea mays L.) from the third leaf stage to maturity for different soil water levels (well-watered, moderately stressed, and severely stressed) was conducted by controlling irrigation and using a mobile rain shelter in a neutral loam, meadow soil to determine the effects on leaf water status, membrane permeability and enzymatic antioxidant system for different growth stages. The results indicated that drought stress relied on drought intensity and duration, with more severe drought stress creating more serious effects on maize. Compared with well-watered conditions, during the silking and blister stages moderate stress did not significantly change the relative water content (RWC) and did change significantly the relative conductivity (RC) (P < 0.05) of the leaves; however, severe stress did significantly decrease (P < 0.01) the leaf RWC and increase (P < 0.01) membrane permeability (leaf relative conductivity). Furthermore, under severe drought stress antioxidant enzyme activities declined significantly (P < 0.01) in later stages, namely for superoxide dismutase (SOD) the tasseling and blister stages, for peroxidase (POD) the milk stage, and for catalase (CAT) during the tasseling, blister, and milk stages. Meanwhile, membrane lipid peroxidation (measured as malondialdehyde content) significantly increased (P < 0.01) in all stages. 展开更多
关键词 drought stress enzymatic antioxidant system leaf water status MAIZE membrane permeability
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Physiological Response of Paspalum notatum’s Leaf and Root under Persistent Drought Stress 被引量:2
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作者 ZHANG Yu-jun ZHAO Li-li +2 位作者 WANG Pu-chang ZHANG Xiong DING Lei-lei 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2019年第2期11-17,共7页
To investigate the correlation and difference between Paspalum notatum’s leaf and root under drought adversity,this study tested the physiological responses of wild Paspalum notatum’s leaf and root under 0(CK),1,3,5... To investigate the correlation and difference between Paspalum notatum’s leaf and root under drought adversity,this study tested the physiological responses of wild Paspalum notatum’s leaf and root under 0(CK),1,3,5,7,14,21,and 28 d drought stress treatment.These physiological responses include osmotic regulating substance,antioxidant enzyme activity,malonaldehyde content,cell membrane permeability,and chlorophyll content.According to the results,the soluble protein content,proline concentration,malonaldehyde content,cell membrane permeability and CAT activity in Paspalum notatum’s leaf and root tended to increase with the prolongation of drought stress;the soluble sugar content and SOD activity first increased and then decreased;POD dropped gradually;the contents of chlorophyll a,b and total chlorophyll first declined,then mounted,and lastly dropped again.During the early stage of drought stress,SOD and CAT acted as the main antioxidant enzymes in Paspalum notatum’s leaf and root.However,with the aggravation of drought stress the predominant antioxidant enzymes became SOD in the root system whereas CAT and POD in the leaf.It implicates drought has a strong influence on root’s CAT and leaf’s SOD and POD.Leaf is the major organ regulating the osmosis and photosynthesis of Paspalum notatum.The findings can provide a useful theoretical basis for improving Paspalum notatum’s drought tolerance. 展开更多
关键词 Paspalum notatum Drought stress Osmotic regulation Antioxidant enzyme activity
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Permeabilization of Escherichia coli with ampicillin for a whole cell biocatalyst with enhanced glutamate decarboxylase activity 被引量:2
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作者 Weirui Zhao Sheng Hu +5 位作者 Jun Huang Piyu Ke Shanjing Yao Yinlin Lei Lehe Mei Jinbo Wang 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2016年第7期909-913,共5页
The activity of whole-cell biocatalysts is strongly compromised by the cell envelope, which is a permeability harrier against the diffusion of substrates and products. Although common chemical or physical permeahiliza... The activity of whole-cell biocatalysts is strongly compromised by the cell envelope, which is a permeability harrier against the diffusion of substrates and products. Although common chemical or physical permeahilization methods used in cultured cells enhance cell permeability, these methods inevitably add several extra processing steps after cell cultivation, as well as impede large scale processing. To increase membrane permeability and cell- bound glutamate decarboxylase (GAD) activity of recombinant Escherichia coil (BL21 (DE3)-pET28a-gadB) cells without the need for an additional permeabilization step, we investigated the permeabilizing effects of adding cell wall synthesis inhibitors or suffactants to the culture media. Ampidllin was the most effective at improving cell-bound GAD activity of the BL21 (DE3)-pET28a-gadB, although it decreased the cell biomass yield. The best permeabilization effect was observed using an ampicillin concentration of 5 pg. ml-1. Using this concentration, the cell hiomass did decrease by 40.58%, but the cell-bound GAD activity of BL21 (DE3)-pET28a-gadB and total cell-bound GAD activity per milliliter of culture was enhanced by 6.24- and 3.64-fold, respectively. Treatment ofBL21 (DE3)-pET28a-gadB cells with 5 tag.ml 1 ampicillin resulted in structural changes to the cell envelope, but did not substantially affect GAD expression. By entrapping the ampicillin-treated cells in an open pore gelation matrix, which is a polymer derived from polyvinyl alcohol (PVA), alginate, and boric acid, the transfor- mation rate of γ-aminobutyric acid (GABA) at the 10th cycle produced by immobilized and permeabilized cells remained 46% of the first cycle. GAD activity of the immobilized, permeabilized cells remained over 90% after 30 days of storage at 4 ℃. 展开更多
关键词 γ-Aminobutyric acidAmpicillinEscherichio. coilGlutamate decarboxylasePermeabilization
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Outer membrane VDAC1 controls permeability transition of the inner mitochondrial membrane in cellulo during stress-induced apoptosis 被引量:6
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作者 Flora Tomasello Angela Messina +8 位作者 Lydia Lartigue Laura Schembri Chantal Medina Simona Reina Didier Thoraval Marc Crouzet Frangois Ichas Vito De Pinto Francesca De Giorgi 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第12期1363-1376,共14页
Voltage-dependent anion channel (VDAC)I is the main channel of the mitochondrial outer membrane (MOM) and it has been proposed to be part of the permeability transition pore (PTP), a putative multiprotein comple... Voltage-dependent anion channel (VDAC)I is the main channel of the mitochondrial outer membrane (MOM) and it has been proposed to be part of the permeability transition pore (PTP), a putative multiprotein complex candidate agent of the mitochondrial permeability transition (MPT). Working at the single live cell level, we found that overexpression of VDAC1 triggers MPT at the mitochondrial inner membrane (MIM). Conversely, silencing VDAC1 ex- pression results in the inhibition of MPT caused by selenite-induced oxidative stress. This MOM-MIM crosstalk was modulated by Cyclosporin A and mitochondrial Cyclophilin D, but not by Bcl-2 and BcI-XL, indicative of PTP operation. VDAC1-dependent MPT engages a positive feedback loop involving reactive oxygen species and p38-MAPK, and secondarily triggers a canonical apoptotic response including Bax activation, cytochrome e release and caspase 3 activation. Our data thus support a model of the PTP complex involving VDAC1 at the MOM, and indicate that VDACl-dependent MPT is an upstream mechanism playing a causal role in oxidative stress-induced apoptosis. 展开更多
关键词 APOPTOSIS MITOCHONDRIA VDAC MPT PTP oxidative stress SELENITE
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VASOACTIVE INTESTINAL POLYPEPTIDE PREVENTS INJURY OF PULMONARY VASCULAR PERMEABILITY DUE TO XANTHINE WITH XANTHINE OXIDASE
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作者 林耀广 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1995年第3期141-145,共5页
Hyperpermeability is a crux of pathogenesis of sudden lung edema in many pulmonary disorders. especially in acute lung injury and adult respiratory distress syndrome(ARDS). Using our modified method for assessment of ... Hyperpermeability is a crux of pathogenesis of sudden lung edema in many pulmonary disorders. especially in acute lung injury and adult respiratory distress syndrome(ARDS). Using our modified method for assessment of pulmonary vascular permeability. we observed the effects of xanthine with xanthine oxidase(X-XO) perfused in rat pulmonary artery and the protection of vasoactive intestinal polypeptide(VIP) against the injury of pulmonary vascular permeabilrty. After addition of xanthine oxidase in the perfusate reservoir containing xanthine ̄(125) I-albumin leak index ( ̄(125)IALI)was remarkably increased while peak airway pressure(Paw) was not significantly increased, and perfusion pressure of pulmonary artery(Ppa)and lung wet/dry weight ratio(W/D) were only slightly increased. Xanthine plus xanthine oxidase also increased thromboxane B_2(TX B_2) and 6-keto-prostaglandin F_(1α)(6-keto -PGF_(1α)) in the perfusate. Treatment with VIP obviously reduced or totally prevented all signs of injury. Simultaneously, VIP also diminished or abolished the associated generation of arachidonate products. The results indicated that VIP has potent protective activity against injury of pulmonary vascular permeability and may be a physiological modulator of inflammatory damage to vascular endothelium associated with toxic oxygen metacolites. 展开更多
关键词 pulmonary vascular permeability albumin leak index vasoactive intestinal polypeptide
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拟南芥AAP1基因的克隆及植物表达载体的构建 被引量:7
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作者 崔喜艳 佟珊珊 +3 位作者 范贝 王阔 胡广宇 刘相国 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期564-569,共6页
拟南芥氨基酸透性酶1(AAP1,也叫NAT1)是植物中第一个被分离的氨基酸转运蛋白,在拟南芥主根、侧根、根毛及根表皮细胞中均有增加氨基酸含量的作用。本研究利用RT-PCR的方法,从拟南芥中克隆了该基因,测序结果与GenBank(NM-104616.4)中已... 拟南芥氨基酸透性酶1(AAP1,也叫NAT1)是植物中第一个被分离的氨基酸转运蛋白,在拟南芥主根、侧根、根毛及根表皮细胞中均有增加氨基酸含量的作用。本研究利用RT-PCR的方法,从拟南芥中克隆了该基因,测序结果与GenBank(NM-104616.4)中已发表的拟南芥AAP1(AtAAP1)基因的同源性高达99.93%;并将AtAAP1基因与pCAMBIA3300构建p3300-AAP1植物表达载体,为过表达AtAAP1基因,提高作物氨基酸含量,从而改善作物氮素利用效率提供参考。 展开更多
关键词 拟南芥 氨基酸透性酶1(AAP1) 克隆 植物表达载体
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酿酒酵母转运蛋白Agp1p泛素化对氮源利用的影响
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作者 李应宇 吕永坤 +2 位作者 周景文 堵国成 陈坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期570-578,共9页
【目的】研究酿酒酵母细胞膜关键氮源转运蛋白Agp1p的泛素化对其氮源利用的影响。【方法】构建一个基于双分子荧光互补技术的泛素化检测载体,检测Agp1p是否受到泛素化。采取定点突变的方法对Agp1p中可能的泛素化位点进行突变,研究其泛... 【目的】研究酿酒酵母细胞膜关键氮源转运蛋白Agp1p的泛素化对其氮源利用的影响。【方法】构建一个基于双分子荧光互补技术的泛素化检测载体,检测Agp1p是否受到泛素化。采取定点突变的方法对Agp1p中可能的泛素化位点进行突变,研究其泛素化的关键作用位点及其对酿酒酵母氮源利用的影响。【结果】在谷氨酰胺、精氨酸、脯氨酸及铵盐为唯一氮源的培养基中,转运蛋白Agp1p均受到泛素化调控。定点突变实验结果显示,与出发菌株相比,潜在泛素化位点突变后,菌体荧光强度均有一定程度减弱。其中四重突变体Agp1pK11,14,98,112R荧光强度最弱,表明泛素化过程被显著抑制。系列突变菌株在9种氨基酸为复合氮源以及尿素为单一氮源的发酵实验表明,四重突变体菌体氮源利用率提高效果显著。【结论】转运蛋白Agp1p的泛素化受到不同氮源的影响,泛素化位点突变可以显著影响其泛素化过程,从而改变细胞对氮源的利用过程。 展开更多
关键词 酿酒酵母 泛素化 透性酶 双分子荧光互补技术 运转蛋白Agp1p
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大白菜PUP基因家族的生物信息学分析
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作者 王安 庞文玉 +1 位作者 秦宁 刘振宁 《北方园艺》 CAS 北大核心 2018年第19期8-16,共9页
为深入研究大白菜PUP基因家族的功能,采用生物信息学方法对大白菜基因组中PUP基因家族成员进行了鉴定,并对其基因组信息、蛋白生理生化特征、基因结构、保守结构域、系统进化树和表达模式等方面进行了研究。结果表明:在大白菜基因组中... 为深入研究大白菜PUP基因家族的功能,采用生物信息学方法对大白菜基因组中PUP基因家族成员进行了鉴定,并对其基因组信息、蛋白生理生化特征、基因结构、保守结构域、系统进化树和表达模式等方面进行了研究。结果表明:在大白菜基因组中共鉴定出了24个PUP基因,可以聚类到3个分支,Clade I、Clade II和Clade III;PUP基因在大白菜10条染色体上不均匀分布,而且存在明显的串联重复现象并在染色体上呈现5个串联重复基因簇,说明串联复制是PUP基因家族基因扩增的主要方式;对BrPUP蛋白氨基酸序列多重比对和蛋白跨膜域的分析表明BrPUP蛋白一般存在10个跨膜域,为典型的跨膜蛋白;通过MEME软件对BrPUP蛋白motif的预测还发现了10个比较保守的motif;最后利用Unigene数据库中的EST表达数据对BrPUPs的表达模式进行了初步研究。上述研究结果为大白菜PUP基因功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大白菜 嘌呤透性酶 基因家族 生物信息学
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