快速筛选耐酸性α-淀粉酶生产菌株的平板透明圈法

以可溶性淀粉为底物配制固体培养基,然后低温处理(4℃)平板培养物,产淀粉酶的菌株其菌落周围的培养基由白色变成灰色且透明.该方法不具有破坏性,不需要预先接种菌落,能直接发现和分离分解利用淀粉的微生物.利用淀粉琼脂平板还能快速验证淀粉酶的耐酸性,根据在pH4.2和pH6.0的琼脂平板上透明圈的直径d与淀粉酶活力的对数lnA的关系,求出淀粉酶在pH4.2和pH6.0时的淀粉酶活力.pH4.2时比pH6.0时的比值大,说明该淀粉酶产生菌的耐酸性较强.

一株不产“透明圈”解磷菌的初筛及其溶磷能力的初步测定

该文以Ca3(PO4)2为唯一磷源,以固体平板上是否出现溶磷"透明圈"为指标来初筛解磷菌时,发现一株霉菌,平板上长势良好,未产生明显"透明圈";经液体摇瓶培养,发现其具有较强的解磷能力,上清液中有效磷在第6天达到极值10.66mg/L,p H值从起始7.21下降到4.52。以"透明圈"作为解磷菌的初筛标准,可能会丢失部分解磷菌。

透明圈法筛选柚苷酶高产菌株

在前人的研究基础之上,初步研究设计和实验了一种改良的柚苷酶平板透明圈筛选模型。在本实验室保藏的10株柚苷酶菌株中,3号黑曲霉产酶活最高,摇瓶产酶达251.93 U/mL,经平板分离纯化,得到3-54号菌株,摇瓶产酶达385.207 2 U/mL。

用平板透明圈法测定延胡索酸酶活力

将黄色短杆菌培养在含有延胡索酸的平板培养基上，该菌产生的延胡索酸酶能转化延胡索酸成Ｌ－苹果酸．用６Ｎ硫酸处理平板后，其菌落周围便会出现清晰的透明圈。

红托竹荪菌种快速分离培养基优化

通过对红托竹荪快速分离培养基优化,提高红托竹荪菌种分离与评价效率。采用响应面分析法,以菌种生长速度为响应值拟合二次多元回归方程,确定培养基配方;测定优化培养基与PDA对照培养基菌丝生长速度和菌丝直径,以菌丝形态、锁状联合和菌落形态等指标评价优化培养基;测定优化培养基与PDA培养基培养菌丝在木屑培养基中菌丝生长速度,验证应用效果。通过试验,筛选出快速分离培养基配方为葡萄糖20.71 g/L、全麦粉8.36 g/L、玉米粉8.07 g/L、琼脂粉18.00 g/L、木屑水1.06 L。快速分离培养基与PDA培养基对比,培养的菌落直径平均增加66.25%,快速分离培养基菌丝日平均生长速度增加33.33%,木屑培养基菌丝日平均生长速度增加44.22%。由于优化培养基中含有淀粉、纤维素等有效成分,其刺激了菌种分泌淀粉酶、纤维素酶等,维持了胞外酶系的完整性。还可根据菌丝培养基过程形成的透明圈大小判定菌种胞外酶产生能力,达到快速评价菌种质量,保障菌种质量的目的。

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件

以褐色高温单孢菌 (Thermomonosporafusca)为出发菌株 ,通过 6 0s和 80s的紫外线交替诱变孢子悬液 ,采用透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法 ,获得了一株高产纤维素酶的突变株PE_2 11.与原始菌株相比 ,该突变株的产酶活力提高了 1倍多 .文中还对PE_2 11的产酶条件进行了研究 .

降解类胡萝卜素产香细菌的筛选及鉴定

本实验从常年落花的土壤中分离到了6株能降解类胡萝卜素并且产生香味的菌株。形态学观察和16S rDNA序列分析表明,其中有3株与Bacillus subtills和Bacillus tequilensis聚在一起,2株与Bacillus methylotrophicus和Bacillus pum ilus相似性最高,1株菌与Bacillus licheniformis亲缘关系最近。通过透明圈观察和OD495 nm判定培养基中的类胡萝卜素明显被降解,并且通过气相色谱-质谱法初步分析了其降解产物,产物中主要为2-庚酮、棕榈酸、邻苯二甲酸酐等物质。

产纤维素酶真菌的筛选及其产酶条件的研究

从腐朽的玉米秸秆上及土壤中筛选出了1株维素酶高产菌株HY-07,并以玉米芯和麸皮为主要原料,通过单因子试验和正交试验对该菌的产酶条件进行了研究。其最佳产酶条件为250mL三角瓶装料量6g,玉米芯:麸皮为11:14,固液比1:0.8,吐温-80添加量为0.2%,K_2HPO_4含量0.05%,MgSO_4·7H_2O含量0.025%,(NH_4)_2SO_4含量1%,pH值自然,30℃恒温培养7d,其酶活力达到674.44U/g,比初始增加了50.8%。

NTG诱变筛选高产柚苷酶抗药性突变株

通过筛选柚苷酶产生菌3-54菌株孢子的敏感抗生素最低致死浓度,采用NTG对出发菌株孢子进行诱变处理,将诱变后的孢子涂在含纳他霉素致死浓度(2.0 U/mL)的平板筛选培养基上,获得了大量的抗药性致死突变株。再结合透明圈法,经过透明圈初筛和多次摇瓶复筛,从180个纳他霉素抗性基因突变株中筛选得到1株摇瓶发酵单位达770.06 U/mL的3-54-NTG-16号菌株,比出发菌株的产酶能力提高了近100%。

离子注入诱变米曲霉及酱油优良生产菌株的快速筛选

利用平板透明圈法,在pH为5.5的筛选培养基条件下,分别采用酪素、淀粉和羧甲基纤维素(CMC)平板,对用离子注入法诱变米曲霉3042后得到的诱变菌株进行快速筛选,然后进行复筛,测定其三角瓶曲酶活,确定优良生产菌株。同时进行了诱变菌株蛋白酶,纤维素酶,糖化酶酶学性质研究。

产几丁质酶木霉生防菌株的生化测定

以烟草赤星病的病原真菌链格孢(Alternariaalternata)为实验菌株,通过对峙平板拮抗实验和胶体几丁质平板透明圈实验测定木霉菌株(Trichodermaharziaum)THS-1对病原真菌的拮抗作用,结合DNS法进行定量检测木霉菌株发酵产生几丁质酶的活性。上述方法的结合可以筛选出产几丁质酶高效木霉生防菌株。

植酸酶菌种筛选方法的研究

通过微板培养法对植酸酶产生菌菌种筛选方法进行了研究 ,建立了一种快速、有效的高通量植酸酶菌种筛选方法。利用该方法结合菌种诱变技术已选育出植酸酶酶活高达 2 97u/mL的A .niger 4 96 - 1菌株。

分离筛选低温发酵功能菌及促进沼气产量的研究

在低温环境条件下，通过功能培养基上产生的透明圈，获得了13株功能菌株，其中A－7，A．18，A－19，A-20等4种菌株表现出产有机酸和分解纤维素的两种能力，A-24强菌分别具有分解纤维素和淀粉的两种能力。为了确定每个功能菌的可生长温度区域，在4℃～20℃不同温度条件下，分析了细胞生长趋势，菌株最适温度一般表现为15℃和20℃。将这些不同降解特性的功能菌株扩大培养之后，添加到低温模拟沼气发酵罐内，研究了多种复合菌组合在低温条件下的日产气量、累积产气量及甲烷含量的变化，经过30d的发酵试验，添加菌剂的总产气量比对照增加了28．0％。

高产中性纤维素酶菌株的诱变选育和筛选方法

设计了一种根据水解透明圈与菌落直径之比(D／d)以初步判断菌株产酶活力大小的方法,发现菌株的液体发酵酶活的对数(lgE)和菌落透明圈直径与菌落直径之比(D／d)基本上呈线性关系.采用紫外线和γ射线对中性纤维素酶产生菌木霉ZC(39 U／mL)进行了反复诱变和大量筛选,得到了一株高产中性纤维素高产突变菌株BE40-39(99 U／mL),并对出发株ZC和突变株BE40-39的性状进行了比较.

一株高产几丁质酶细菌对植物病原真菌的抑制作用研究

用平板稀释分离法和透明圈法筛选到一株高产几丁质酶的革兰氏阳性菌NKZ-E,其单位透明圈的大小为2.11。液体培养测定结果表明,该菌株的无菌培养滤液稀释50倍时,对玉米弯孢叶斑病菌具有较好的抑菌活性,其抑制率达69.86%;抑菌谱的测定结果也表明菌株NKZ-E对5种供试真菌也具有较好的抑菌活性,菌丝生长抑制率均高于50%。光镜观察发现,处理后的玉米弯孢叶斑病菌菌丝表现不同程度的畸形,细胞彭大呈球形,说明该细菌菌株产生的胞外几丁质酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关。

几种常见牙周致病菌对羧甲基壳聚糖的降解效应

背景:近年来,羧甲基壳聚糖的体内降解已成为牙周组织工程和材料学领域中的研究热点,但在涉及羧甲基壳聚糖酶解的文献中,尚未找到关于牙周致病菌能够产酶降解羧甲基壳聚糖的报道。目的:研究几种常见牙周致病菌对羧甲基壳聚糖的降解作用。方法:制备质量分数1%和2%的羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基。采用透明圈法,分别挑取牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌和黏性放线菌菌落划线接种于羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基中,置于厌氧培养袋中37℃恒温培养,观察结果,如果菌落周围出现明显的透明圈,即为阳性,说明细菌能够分解羧甲基壳聚糖,反之则为阴性,并测量菌落直径。结果与结论:牙龈卟啉单胞菌在1%羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基上生长良好,培养18d后菌落周围出现明显的透明圈;在2%羧甲基壳聚糖培养基上,牙龈卟啉单胞菌的生长受到抑制,未形成形态规则的菌落;伴放线放线杆菌和黏性放线菌在两种质量分数羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基中,菌落周围均未出现透明圈,培养2周后菌落干枯失去活性。提示牙龈卟啉单胞菌可降解较低质量分数的羧甲基壳聚糖,伴放线放线杆菌和黏性放线菌均不能降解羧甲基壳聚糖。

产酯化脂肪酶微生物的筛选研究

用罗丹明B透明圈法从广东、广西和海南采集的土样中筛选到658株透明圈比较明显的菌株,经发酵测定脂肪酶酶活,获得15株脂肪酶活力超过7U/mL的菌株,采用固定化脂肪酶粗酶制剂的方法进行酯化能力的测定,得到产生酯化脂肪酶能力较强的3个菌株GX-20、GX-35和GX-53,它们的酯化率分别为18.12%、20.65%和19.72%。其中的GX-35菌株经16SrDNA基因序列分析鉴定为Burkholderia cepacia。

淡紫拟青霉MD1几丁质酶活性测定

应用胶体几丁质平板透明圈法和DNS法测定了淡紫拟青霉MD1的几丁质酶活性,首次获得淡紫拟青霉在胶体几丁质平板上的透明圈,DNS法测定MD1几丁质酶活性结果表明,粗酶液无论是否有几丁质诱导,MD1菌株的几丁质酶活力均在第7 d最高,而且几丁质诱导的粗酶液酶活明显比同期未经几丁质诱导的粗酶液酶活高。