透明质酸介导运动因子受体基因在口腔鳞状细胞癌中的作用及其临床预后

目的:筛选与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)预后相关的基因,并探究其在OSCC发生、发展中的作用及机制。方法:筛选并纳入癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)数据集下的OSCC肿瘤样本(OSCC组)330例,正常样本(正常样本组)37例,通过生物信息学分析的方法筛选出两组之中差异表达的基因。进一步通过肿瘤T分级(T1+T2组为114例,T3+T4组为216例)、转移(阳性组为163例,阴性组为167例)及病理分级(G1+G2组为244例,G3+G4组为86例)分别对其进行分组,分别求得差异基因后取交集,筛选出与OSCC预后相关的差异表达基因。进一步选择差异倍数最大的差异基因[透明质酸介导运动因子受体(hyaluronan mediated motility receptor,HMMR)基因]进行下一步研究,探讨HMMR基因与临床分级(Stage Ⅰ+Ⅱ组为69例,Stage Ⅲ+Ⅳ组为261例)、T分级、转移及病理分级之间的关系,并根据HMMR基因表达的中位值分为高表达组和低表达组(高表达组为165例,低表达组为165例),采用Kaplan-Meier生存分析探讨HMMR表达的高低与预后相关因子之间的关系。收集2014年1月至2016年1月在湖南中医药大学第一附属医院接受手术治疗的50例OSCC患者的肿瘤组织标本及配对的正常口腔黏膜组织标本,采用realtime RT-PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学等技术对生物信息学的分析结果进行验证,采用Kaplan-Meier生存分析检测HMMR免疫组织化学染色阳性及阴性表达(阳性组为32例,阴性组为18例)与预后之间的关系,采用Cox回归分析模型探讨OSCC预后相关危险因子,再分别通过细胞增殖实验及细胞划痕实验评估下调HMMR表达后对OSCC细胞增殖及迁移能力的影响。结果:在OSCC组织中HMMR呈高表达,且HMMR高表达组的预后相关因子相对于低表达组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),HMMR高表达与T分级(RR=1.33,P<0.05)、淋巴结转移(RR=1.74,P<0.05)、临床分期(RR=1.49,P<0.05)显著相关,是OSCC预后的一个独立危险因子(RR=1.45,P<0.05)。与下调前相比,下调HMMR后可抑制OSCC细胞的增殖及迁移,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:HMMR作为OSCC的一个原癌基因,可促进OSCC的发生、发展,其可能可作为一个潜在的早期诊断标志物及靶向治疗的新靶标。

透明质酸介导的细胞游走受体与恶性肿瘤侵袭和转移的关系

透明质酸介导的细胞游走受体(RHAMM)是透明质酸的受体之一,与恶性肿瘤生成、浸润和转移有密切关系。其表达水平升高与肿瘤的侵袭参数呈正相关,是衡量肿瘤侵袭程度的重要标志。现通过对RHAMM与各种恶性肿瘤生成、浸润和转移的关系进行综述,以期为恶性肿瘤诊断和治疗提供一种新的途径和方向。

淋巴管内皮透明质酸受体-1和血管内皮生长因子-C在喉鳞癌组织中的表达

目的探讨喉鳞癌组织中淋巴管内皮透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)及血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)的表达及其与临床病理因素的关系。方法分别以酶标链霉亲和素-生物素法和Envision二步法检测40例喉鳞癌组织中LYVE-1,VEGF-C和核增殖抗原Ki67的表达,分析LYVE-1标记的淋巴管的密度、位置、增殖情况及VEGF-C表达与喉鳞癌颈淋巴结转移、T分期及肿瘤细胞分化程度等之间的关系。结果(1)颈淋巴结转移组、T3和T4组瘤巢内LYVE-1(+)管腔密度分别高于非转移组、T1和T2组(t=4.539,P=0.000;t=3.896,P=0.000)。(2)瘤巢内LYVE-1(+)管腔存在Ki67细胞核棕黄色着色,而瘤巢周围LYVE-1(+)管腔未见这一现象。(3)VEGF-C在颈淋巴结转移组与无转移组、T1和T2组与T3和T4组之间的表达差异有统计学意义(χ2=4.286,P=0.038;χ2=4.607,P=0.032);VEGF-C(+)组瘤巢内LYVE-1(+)管腔密度高于VEGF-C(-)组,差异有统计学意义(t=2.128,P=0.044)。结论喉鳞癌组织中LYVE-1标记的肿瘤淋巴管生成与肿瘤浸润、淋巴结转移、VEGF-C表达有关,淋巴管生成及VEGF-C表达在喉癌的发展过程中发挥重要的作用。

透明质酸介导的细胞游走受体在胆管癌侵袭和转移中的作用

目的:探讨透明质酸介导的细胞游走受体(Receptor for hyaluronan-mediated motility,RHAMM)在胆管癌侵袭和转移中的作用。方法:收集临床上行胆管癌手术的患者的组织标本及正常胆管组织标本,根据分化程度将胆管腺癌组织标本分为高、中、低分化3组;按TNM分期标准将所有组织标本分为对照组、胆管癌组以及胆管癌伴转移组。免疫组织化学(SP)法测定RHAMM平均光密度值。RT-PCR及Western blot法检测RHAMM mRNA和蛋白的表达水平。结果:免疫组织化学检测在不同分化程度的胆管腺癌中RHAMM均有不同程度的表达(P>0.05);RHAMM在胆管癌伴转移组阳性率最高,在对照组表达阳性率最低。RT-PCR和Western blot检测RHAMM mRNA和蛋白表达水平在对照组和胆管癌组差异无统计学意义(P>0.05)。在胆管癌伴转移组明显高于对照组和胆管癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RHAMM的表达程度与胆管腺癌的分化程度无关,但在胆管癌伴转移组中的高表达可能与胆管癌的侵袭相关,并最终促进了胆管癌的转移。

淋巴管透明质酸受体1和血管内皮生长因子C在宫颈鳞癌组织中的表达及其意义

目的探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)、淋巴管密度(lLVD)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在宫颈鳞癌组织中的表达及其在宫颈鳞癌发生发展、侵袭及淋巴转移中的作用。方法采用免疫组织化学技术检测LYVE-1、VEGF-C在15例正常宫颈鳞状上皮、15例CIN III及76例宫颈鳞癌中的表达,通过LYVE-1的表达计数LVD,统计分析LVD、VEGF-C的表达水平与临床病理参数间的关系及其相关性。结果①从正常宫颈上皮、CIN III到宫颈鳞癌,LVD逐渐增高(P<0.05)。LVD与宫颈鳞癌的临床分期、淋巴转移、病理分级和肿瘤大小有关,差异有统计学意义(P<0.05)。②从正常宫颈上皮、CIN III到宫颈鳞癌,VEGF-C阳性率逐渐增高(P<0.05)。VEGF-C的表达与宫颈鳞癌的临床分期、淋巴结转移、病理分级和肿瘤大小有关,差异有统计学意义(P<0.05)。③Spearman相关分析发现,VEGF-C的表达与LVD之间呈正相关(r=0.719,P<0.05)。结论淋巴管生成在宫颈鳞癌淋巴转移过程中发挥了重要作用。LYVE-1、LVD及VEGF-C与宫颈鳞癌的进展及淋巴转移相关,LYVE-1的表达水平及VEGF-C表达水平可作为判断病情进展和肿瘤转移的指标之一。

裸鼠肺腺癌移植瘤组织中缺氧诱导因子-1α蛋白、血清蛋白和淋巴管内皮细胞透明质酸受体1蛋白表达及意义

目的:回顾性研究肺腺癌移植瘤裸鼠模型组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血清蛋白[Albumin、免疫球蛋白M(IgM)]和淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)蛋白表达及意义。方法:在裸鼠背部皮下注射肺腺癌A549细胞,建立移植瘤模型。利用活体冷冻技术(IVCT)制备标本,采用HE染色及免疫组织化学(IHC)染色分析HIF-1α、Albumin、IgM和LYVE-1蛋白的表达。结果:在A549移植瘤细胞中HIF-1α蛋白表达呈阴性。肺腺癌侵袭组织中Albumin和IgM蛋白呈阳性的功能血管密度高于非侵袭组织[(14.80±1.03)个/高倍视野(HPF)与(3.50±0.53)个/HPF,P<0.01]。肺腺癌侵袭组织中LYVE-1蛋白呈阳性的淋巴管密度高于非侵袭组织[(25.90±4.43)个/HPF与(3.60±0.52)个/HPF,P<0.01]。结论:HIF-1α蛋白表达与肺腺癌侵袭和功能性血管、淋巴管密度无关,但是功能性血管和淋巴管密度与肺腺癌的侵袭、发展密切相关。

大鼠脊髓全横断后脑源性神经营养因子及其高亲和力受体在运动皮质表达的变化

目的 研究大鼠脊髓全横断后脑源性神经营养因子 (BDNF)及其高亲和力受体 (TrkB)在运动皮质表达的变化 ,为进一步探索脊髓损伤后再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。 方法 雄性SD大鼠 4 2只随机分为 3组 :1 脊髓横断组 :动物脊髓在胸 9节段完全横断 ,按存活时间不同分为术后 3、7、14、2 1及 2 8d组 ;2 假手术组 (只行椎板切除术 ) ;3 正常对照组。动物到达存活时间点后 ,应用免疫组织化学ABC方法和图像分析技术检测TrkB及BDNF在运动皮质的表达和分布。 结果 对照组和实验组运动皮质TrkB和BDNF阳性细胞主要分布在第 5层 ,第 3、4、6层也有少量阳性细胞。脊髓全横断后TrkB和BDNF的表达逐渐增高 ,于术后 2 1d达高峰 ,2 8d回到正常水平 ,且TrkB表达上调早于BDNF。 结论 脊髓全横断后运动皮质对BDNF的需求增加 ,内源性BDNF的增加可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生 ;在损伤早期给予外源性BDNF可能更有利于受损的皮质脊髓束神经元。

透明质酸与甲状腺相关眼病研究进展

甲状腺相关眼病（TAO）是成人常见的眼眶疾病,眶周脂肪结缔组织中糖胺聚糖沉积是其主要的病理特征之一.透明质酸是糖胺聚糖的主要成分,具有高亲水性和黏弹性的特性,可大量吸水膨胀,其在眼眶组织聚集导致眶周结缔组织及眼外肌水肿和纤维化,进而出现TAO特征性的临床表现.眼眶成纤维细胞是透明质酸的主要来源,患者体内自身抗体和多种细胞因子可与成纤维细胞上促甲状腺激素受体（TSHR）及胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）等结合,在透明质酸合成酶的作用下促进眼眶成纤维细胞合成透明质酸,导致眶周组织、外周血及体液中透明质酸含量增加,并在一定程度上为疾病诊断、病情判断及疗效和预后评估提供参考.

运动训练对脊髓损伤大鼠脊髓内神经生长因子及其受体TrkA表达的影响

目的研究运动训练对脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓内神经生长因子（NGF）及其酪氨酸激酶受体A（TrkA）表达的影响。方法成年雌性SD大鼠24只分为假手术组（n=6）、损伤对照组（n=9）和运动训练组（n=9）。采用通用型脊髓打击器建立大鼠T10脊髓损伤模型。损伤后7 d起,对SCI大鼠进行4周运动训练,假手术组和损伤对照组不进行运动训练。损伤前及损伤后第1、2、3、4、5周采用BBB评分评定大鼠运动功能,训练结束后取T12－L1节段脊髓组织行病理切片,免疫组织化学法检测脊髓内NGF和TrkA蛋白表达及分布,Western blot检测脊髓内NGF和TrkA蛋白含量。结果损伤后第3周（即运动训练两周）起,运动训练组BBB评分高于损伤对照组（P〈0.05）。NGF免疫反应阳性产物多分布于脊髓前角,运动训练组NGF阳性染色颗粒增多,平均光密度值较假手术组及损伤对照组增加（P〈0.05）。TrkA免疫反应阳性产物于脊髓前角、后角、中央管周围处出现分布;运动训练组TrkA阳性染色颗粒增多,平均光密度值较假手术组及损伤对照组增加（P〈0.05）。Western blot结果显示运动训练组大鼠脊髓内NGF及TrkA表达较假手术组、损伤对照组增加（P〈0.05）。结论运动训练可诱导SCI大鼠脊髓内NGF及其受体TrkA表达,促进SCI大鼠运动功能恢复。

透明质酸键合分枝状聚乙烯亚胺的基因载体靶向性

目的研究透明质酸键合分枝状聚乙烯亚胺的复合载体对癌细胞的靶向性,探究其是否受透明质酸相关受体的介导作用。方法通过对比观察复合载体在B16F1和HEK-293两种细胞内的传递及基因沉默现象,确定该载体在有无透明质酸受体情况下的运载状态。通过单体透明质酸与复合载体的竞争实验,进一步验证推断。根据复合载体在生物体内的分布及其对肿瘤增长的抑制效果,确定透明质酸受体对复合载体靶向性的影响。结果复合载体能够很好的运载si RNA进入含有透明质酸受体的B16F1细胞内,并且于该细胞内的基因沉默效率高达92%。随着培养基中单体透明质酸含量的增加,复合载体所实现的基因沉默效率逐渐降低。载体进入生物体内后,主要分布在细胞表面含有透明质酸受体的组织中。复合载体对于肿瘤的治疗效果好于单体分枝状聚乙烯亚胺作为载体的效果。结论复合载体对癌细胞的靶向性是由于透明质酸相关受体介导所实现的,其对于靶向治疗带有透明质酸受体的癌症,降低癌症治疗的副作用具有深远的意义。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白关节腔注射联合中药薰洗治疗膝骨关节炎的临床研究

目的:观察注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(recombinant human tumor necrosis factor receptor-Fc fusion protein,rh TNFR:Fc)关节腔注射联合中药薰洗治疗膝骨关节炎的临床疗效。方法:将60例膝骨关节炎患者随机分为2组,每组30例。分别采用关节腔注射rh TNFR:Fc联合中药薰洗和关节腔注射玻璃酸钠联合中药薰洗治疗。比较治疗前后2组膝关节疼痛视觉模拟评分(visual analogue score,VAS)及西安大略和麦克马斯特大学(Western Ontario and Mc Master Universities,WOMAC)骨关节炎评分,并于治疗结束后3个月比较2组患者的综合疗效。结果:治疗前2组患者的膝关节VAS评分及WOMAC评分比较,组间差异均无统计学意义[(7.15±1.09)分,(6.90±1.52)分,t=1.045,P=0.309;(54.75±3.23)分,(55.45±3.11)分,t=0.700,P=0.493]。治疗结束后3个月,2组患者的膝关节VAS评分[(3.05±0.76)分,(4.10±0.97)分]及WOMAC评分[(16.55±2.65)分,(27.20±3.17)分]均较治疗前下降(t=14.173,P=0.000;t=10.101,P=0.000;t=34.451,P=0.000;t=39.161,P=0.000);rh TNFR:Fc组的膝关节VAS评分及WOMAC评分下降幅度均大于玻璃酸钠组[(4.10±1.29)分,(2.80±1.31)分,t=3.771,P=0.001;(38.20±4.96)分,(28.25±3.23)分,t=8.132,P=0.000]。治疗结束后3个月,rh TNFR:Fc组治愈10例、显效12例、有效7例、无效1例,玻璃酸钠组治愈6例、显效8例、有效13例、无效3例,rh TNFR:Fc组疗效优于玻璃酸钠组(Z=﹣1.987,P=0.047)。结论:采用关节腔注射rh TNFR:Fc联合中药薰洗治疗膝骨关节炎,可以有效缓解膝关节疼痛,促进膝关节运功功能恢复,疗效优于关节腔注射玻璃酸钠联合中药薰洗治疗,值得临床推广应用。

转基因细胞移植对损伤脊髓天门冬氨酸受体的影响

[目的]研究腺病毒介导的脑源性神经生长因子(brainderivedneurotrophinfactor,AxCABDNF)转基因细胞移植和大剂量甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓组织N甲基D天门冬氨酸(NMDA)受体的影响。将成年大鼠分为4组,A组单纯脊髓损伤组;B组脊髓损伤+AxCABDNF基因转染的成肌细胞移植组;C组脊髓损伤+甲基强的松龙组;D组脊髓损伤+细胞移植+甲基强的松龙组。应用后1、3、7、14d,采用[3H]标记的地卓西平马来酸盐([3H]MK801)放射性配基分析法检测大鼠损伤后脊髓NMDA受体的变化。[结果]发现各组[3H]MK801放射性配基分析最大结合容量都有不同程度的减少,其减少程度顺序是A组>B组>C组>D组。表明应用甲基强的松龙(MP)和BDNF转基因细胞移植可以通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤。

疑诊妊娠合并抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎1例报告

抗N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体脑炎,是一种抗体介导的脑炎,常伴有卵巢畸胎瘤的发生,是以迅速进展的精神异常、痫性发作、中枢性低通气、意识障碍、运动功能异常等为特征的边缘叶脑炎。我科疑诊1例,报道如下。1病例女,23岁,因＂发热、头痛3 d,肢体抽搐3 h＂于2013年4月29日入院。

血管内皮生长因子C及其受体3在人恶性黑色素瘤组织内的表达及意义

目的观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C（VEGF-C）及其受体3（VEGFR-3）的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用。方法取人恶性黑色素瘤组织48例（石蜡标本30例,术后新鲜组织18例）,应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在恶性黑色素瘤组织内的表达情况。以淋巴管内皮透明质酸受体（LYVE-1）标记淋巴管,计数恶性黑色素瘤组织淋巴管数密度。结果VEGF-C和VEGFR-3蛋白主要表达于恶性黑色素瘤细胞胞浆内,在肿瘤周围的血管和淋巴管内皮上也可见VEGFR-3蛋白表达,VEGF-C和VEGFR-3蛋白在淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组（P〈0.05）。在18例新鲜恶性黑色素瘤中,淋巴结转移组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0.01）。LYVE-1表达于肿瘤间质内的淋巴管内皮细胞,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度（LMVD）为9.845±2.454,无淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度为6.534±2.193,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的淋巴管数密度明显高于无淋巴结转移组（P〈0.01）。结论恶性黑色素瘤组织内VEGF-C表达明显增高,并通过上调其受体VEGFR-3的表达促进恶性黑色素瘤组织内淋巴管的生成,从而促进恶性黑色素瘤的淋巴道转移。

透明质酸介导运动受体真核表达载体的构建及其对乳腺癌增殖和迁移的影响

目的构建透明质酸介导运动受体(HMMR)真核表达重组质粒并在乳腺癌ZR75-1细胞中转染和鉴定,探究HMMR对乳腺癌细胞生长、增殖和迁移的影响。方法采用PCR技术以人乳腺文库为模板扩增HMMR基因并与pcDNA3.0-FLAG载体在EcoRⅤ和XhoⅠ酶切位点进行连接,构建真核表达载体(pcDNA3.0-FLAG-HMMR),并转染乳腺癌ZR75-1细胞;通过Western印迹法、CCK8实验和克隆形成检测HMMR基因表达对ZR75-1生长的影响,划痕实验验证真核表达载体对ZR75-1细胞迁移的影响。结果经酶切鉴定及序列测序验证真核重组表达载体构建成功,并在ZR75-1细胞中表达;并且发现HMMR对ZR75-1细胞的增殖和迁移具有显著的促进作用。结论构建的真核表达载体转染至ZR75-1细胞后,明显促进ZR75-1增殖和迁移,这为研究HMMR基因在乳腺癌发生发展机制奠定了基础。

透明质酸介导的细胞游走受体基因的分子生物学特性及其与肿瘤的关系

透明质酸介导的细胞游走受体(receptor for hyaluronan-mediated motility,RHAMM)是继CD44之后发现的,分布于细胞膜表面、细胞浆以及细胞核,参与细胞分裂周期的调节、细胞的生长增殖、细胞迁移运动、细胞骨架的组装以及维持中心体和纺锤体极的结构的完整性,与细胞恶性转化、肿瘤浸润和转移等生物学行为密切相关;并且已作为一些肿瘤的肿瘤相关抗原,确定了其抗原表位,成为肿瘤免疫治疗的靶点;在一些肿瘤组织内的表达水平升高和呈现一定的表达模式,与肿瘤临床分级以及肿瘤预后有一定的相关性。

淋巴管透明质酸受体1和血管内皮生长因子受体3在胃癌组织中的表达

目的以淋巴管透明质酸受体1(LYVE-1)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)作为淋巴管特异性标志物,研究胃癌组织和癌周组织中淋巴管的生成表达情况。方法应用免疫组织化学和Real-time聚合酶链反应的方法检测62例胃癌、癌周组织中的LYVE-1和VEGFR-3蛋白及其mRNA表达情况,计算淋巴管的密度(LVD),检测淋巴管mRNA的相对含量。结果胃癌组织周边区淋巴管的密度高于胃癌组织中心区,而癌旁正常组织中很少见LYVE-1和VEGFR-3染色阳性的微淋巴管;胃癌组织周边区LVD和胃癌组织中LYVE-1和VEGFR-3mRNA含量与胃癌组织浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期及术后复发有关(P<0.05)。结论LYVE-1是一种特异性高于VEGFR-3的淋巴管内皮特异性标志物,淋巴管生成促进胃癌发展及淋巴结转移。