大鼠透明质酸合成酶-2抗血清的制备及鉴定

目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时表达大鼠HAS-2和HAS-3,分别用抗His抗体和抗血清检测,鉴定制备抗血清的特异性。结果:通过原核表达并纯化得到抗原多肽,免疫家兔后获得ELISA效价大于1∶10000的抗血清。所制备的抗血清至少可以检测出10ng以上的抗原多肽,并且能够特异地检测HAS-2而与HAS-3无反应。结论:成功通过大鼠HAS-2非保守区域多肽的原核表达产物制备出高灵敏度和特异性的大鼠HAS-2抗血清,为研究透明质酸(HA)的病理生理意义提供了有利支持。

维生素E对体外培养人皮肤成纤维细胞透明质酸合成酶-2基因表达的影响

目的通过研究维生素E对体外培养的人皮肤成纤维细胞透明质酸合成酶-2（hyaluronic acid synthetase-2，HAS-2）mRNA转录水平的影响，探讨维生素E减缓皮肤老化的机制。方法采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养，然后将不同浓度的维生素E（0、1×10^-1、1×10^-9mol／L）加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中，待药物作用24h后，提取总RNA，通过逆转录反应获得cDNA，并进行体外扩增。对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据条带的亮度来判断成纤维细胞中HAS-2mRNA的表达水平。结果对体外培养的成纤维细胞进行维生素E干预，经B肌动蛋白内参校正后，反转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）示低剂量组与对照组相比HAS-2mRNA表达水平的差异有统计学意义（P〈0．05），高剂量组与对照组相比HAS-2mRNA表达水平的差异有统计学意义（P〈0．05），低剂量组与高剂量组相比HAS-2mRNA表达水平的差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论维生素E可以上调HAS-2基因的转录水平，可能增加皮肤成纤维细胞透明质酸的合成，增加皮肤的水分含量，使皮肤湿润、弹力增加、皱纹变浅，逆转或延缓皮肤老化。

绵羊HAS2基因遗传变异及其与产羔性状关联性分析

利用PCR-SSCP和DNA测序法,首次检测了湖羊、小尾寒羊、洼地绵羊、阿勒泰羊中的HAS2基因,并对该基因第2和第3外显子部分单核苷酸多态性进行分析。结果表明:湖羊、小尾寒羊、洼地绵羊、阿勒泰羊在第2外显子中存在3种基因型,各是pp、pq、qq基因型;在第3外显子中存在2种基因型,为rr、rs基因型;HAS2基因第2外显子中发生1处C→A突变,第3外显子中发生1处A→G突变。经χ2适合性检验,4种绵羊在HAS2基因第2外显子上的基因型分布均不符合Hardy-Wenberg平衡,在第3外显子上的基因型分布全符合Hardy-Wenberg平衡。各基因型频率在4种绵羊间的分布均没有显著差异(P>0.05);湖羊2个位点上的所有基因型在产羔数上差异均不显著(P>0.05)。初步认为HAS2基因不能作为湖羊高繁殖力的候选基因。

成纤维细胞激活基因的调控及改善皮肤老化的研究

目的通过研究雌二醇、维生素E、维生素C对体外培养的人皮肤成纤维细胞丛质金桶蛋白酶1（MMP1）mRNA、透明质酸合成酶-2（HAS-2）mRNA转录水平的影响，探训小Ⅲ药物改善皮肤老化的叮能机制。方法将不同浓度的雌二醇、维生素E、维生素C分别加入体外培养的人皮肤成纤维细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）榆测不同物质对成纤维细胞中HAS-2mRNA、MMt）。1mRNA表达水平的影响。结果雌二醇、维生素C对MMP-1mRNA表达的影响：高剂量组、低剂量组与对照组的差异有统计学意义（P〈0．05）。低剂量组与高剂量组差异无统计学意义（P〉0．05）。维生素E、维生素C对HAS-2mRNA表达的影响：高剂量组、低剂量组与对照组的差异有统计学意义（P〈0．05），低剂量组与高剂带组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论雌二醇、维生素C可以下调MMP-1基因的转录水平，减少后者对皮肤胶原的降解；维生素E、维生素C可以上调HAS-2基因的转录水平，可能增加透明质酸的合成，从而改善皮肤老化。