雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

血清色氨酸羟化酶糖原合成酶激酶3β水平对拉莫三嗪精准用药治疗青少年双相障碍抑郁发作的效果评估

目的探讨血清色氨酸羟化酶(TPH)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)水平评估拉莫三嗪精准用药治疗青少年双相情感障碍(BD)抑郁发作疗效的价值。方法回顾性收集2022年6月至2023年4月浙江省温州市第七人民医院收治的187例青少年BD抑郁发作患儿临床资料,所有患儿均接受拉莫三嗪精准用药治疗,治疗4周评价治疗效果。根据治疗效果将患儿分为有效组与无效组,比较2组患儿基线资料、治疗前血清TPH、GSK-3β水平。用双变量Pearson相关分析血清TPH、GSK-3β水平的相关性;经Logistic回归分析治疗前血清TPH、GSK-3β水平对拉莫三嗪精准用药治疗BD抑郁发作疗效的影响;绘制受试者工作特征(ROC)曲线和决策曲线,分析治疗前血清TPH、GSK-3β水平对拉莫三嗪精准用药治疗BD抑郁发作疗效的预测评估价值。结果187例BD抑郁发作青少年患儿经拉莫三嗪精准用药治疗4周,有效156例,无效31例,有效率为83.4%。无效组患儿治疗前血清TPH水平低于有效组,血清GSK-3β水平高于有效组(t=6.920、4.648,P<0.001)。经双变量Pearson相关分析显示,BD抑郁发作患儿治疗前血清TPH、GSK-3β水平呈负相关(r=-0.173,P=0.018)。经多项Logistic回归分析结果显示,治疗前血清TPH、GSK-3β是拉莫三嗪精准用药治疗BD抑郁发作疗效的独立危险因子(P<0.05)。ROC曲线显示,血清TPH、GSK-3β水平单独及联合预测评估BD抑郁发作患儿疗效的曲线下面积>0.70,具有一定的预测评估价值。决策曲线显示,在阈值0~1.0内,治疗前血清TPH、GSK-3β联合预测评估拉莫三嗪精准用药治疗BD抑郁发作患儿疗效的净收益率优于单独的净收益率,且净收益率>0,有临床意义。结论血清TPH、GSK-3β水平对拉莫三嗪精准用药治疗青少年BD抑郁发作疗效具有良好的预测评估价值。

响应性透明质酸胶束的合成与性能分析

透明质酸(HA)是一种具有癌细胞靶向性的天然多糖,基于特殊功能基团可用于构建病灶环境敏感的高分子纳米载体。本文利用可逆加成⁃断裂链转移(RAFT)聚合可控合成了3⁃丙烯酰胺基苯硼酸与乙烯基吡咯烷酮的嵌段共聚物,通过硼酸酯键与HA自组装形成了纳米胶束。调节两种高分子的投料浓度及优化共聚物的链长比例,能够实现对胶束水合粒径的调控。共聚物浓度为7.5 mg/mL、聚合度为40且嵌段分子量比为2时,组装粒子粒径可以控制在73.3~163.9 nm,有利于体内长循环及病灶渗透。研究表明,该纳米粒子具有良好的pH、糖和盐响应性。合成了多重响应的癌细胞靶向聚合物纳米胶束,具有用作抗肿瘤活性药物及探针载体的潜能。

RNAi阻断人膀胱癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3的表达研究

目的探讨RNA干扰技术阻断人膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3(hyaluronicacidsynthase3,HAS3)的表达与膀胱移行细胞癌生物学行为之间的关系。方法设计、体外化学合成HAS3mRNA序列特异性、非特异性小干涉双链RNA(smallinterferencingRNA,siRNA),分别与脂质体LipofectamineTM2000结合后转染体外培养的人膀胱移行细胞癌组织中的成纤维细胞。实验分为A、B、C、D四组:孵育48h后,取各组细胞培养液进行放免法透明质酸浓度测定、免疫细胞化学染色了解透明质酸的合成、RT-PCR法检测HAS3mRNA的表达。结果与A组相比,D组细胞HAS3mRNA表达减少了78.2%,HA染色明显变淡,细胞培养液中HA浓度下降了60.3%(P<0.01);B、C组mRNA表达分别减少了4.7%、5.4%,HA染色几乎无变化,HA浓度分别下降了5.2%、5.8%(P>0.05)。结论RNA干扰技术可以显著地减少膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞的HAS3的表达,从而大幅度地降低该细胞内透明质酸的合成。

透明质酸合成酶3在胎鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的时空表达

目的:检测透明质酸合成酶3(HAS3)在胎鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备其下颌第一磨牙不同发育时期的切片,采用免疫组化法检测HAS3在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:在E11.5 d牙胚开始发育时,HAS3即在增厚的上皮板中表达;在E13.5 d蕾状期时,牙蕾中央的上皮细胞及其深层的牙源性间充质中,均可检测到HAS3的表达。E14.5 d帽状期至E18.5 d钟状晚期时,HAS3在牙胚星网状层以及牙源性间充质细胞均有较强表达,而在内外釉上皮细胞所在区域不表达或表达不明显。结论:透明质酸合成酶3在星网状层细胞以及牙乳头间充质中的持续高表达提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。

甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架的制备与表征

背景:随着组织工程为关节软骨损伤修复这一世界难题带来了新的希望,构建成分仿生的光固化3D打印水凝胶支架对软骨组织工程具有重要意义。目的:通过数字光处理3D打印技术构建成分仿生的甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架,评价其生物相容性。方法:从人脐带中分离提取华通胶组织后进行脱细胞处理,冷冻干燥后磨成粉末,溶于PBS中制备50 g/L的脱细胞华通胶溶液。制备甲基丙烯酰化透明质酸,冻干后溶于PBS中制备50 g/L的甲基丙烯酰化透明质酸溶液。将脱细胞华通胶溶液与甲基丙烯酰化透明质酸溶液以体积比1∶1混合,加入光引发剂后作为生物墨水。通过数字光处理3D打印技术分别制备甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶支架(记为HAMA水凝胶支架)与甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架(记为HAMA/WJ水凝胶支架),表征支架的微观结构、溶胀性能、生物相容性与促软骨分化性能。结果与结论:①扫描电镜下见两组支架均呈三维立体的网状结构,其中HAMA/WJ水凝胶支架纤维连接更加均匀;两组支架均在10 h内达到溶胀平衡,HAMA/WJ水凝胶支架的平衡溶胀比低于HAMA水凝胶支架(P<0.05)。②CCK-8实验显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖;死活染色显示骨髓间充质干细胞在两组支架上生长良好,并且HAMA/WJ水凝胶支架上的细胞立体分布均匀、细胞数量更多;鬼笔环肽染色显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架上的骨髓间充质干细胞黏附与铺展更佳。③将骨髓间充质干细胞接种于两组支架后进行成软骨诱导培养,qRT-PCR检测结果显示,HAMA/WJ水凝胶支架组聚集蛋白聚糖、SOX9、Ⅱ型胶原mRNA表达量均高于HAMA水凝胶支架组(P<0.05,P<0.01)。④结果表明,数字光处理3D生物打印HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖、黏附及成软骨分化。

丹酚酸B对创伤后应激障碍模型大鼠认知功能和GSK-3β/β-Catenin信号通路的影响

目的 探讨丹酚酸B(Sal B)是否可通过调节糖原合成酶激酶-3β/β-连环蛋白(GSK-3β/β-Catenin)信号通路改善创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠认知功能。方法 60只大鼠随机分为正常组、PTSD组、Sal B低剂量组(10 mg/kg)、Sal B高剂量组(20 mg/kg)和GSK-3β抑制剂组(30 mg/kg CHIR-99021),每组12只。除正常组外,其余组大鼠采用单一延长应激法构建PTSD大鼠模型。旷场实验、Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能;Nissl染色观察海马神经元病理学变化;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;Western blot检测海马组织中裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、总GSK-3β(tGSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、总β-Catenin(t-β-Catenin)、磷酸化β-Catenin(p-β-Catenin)蛋白表达。结果与PTSD组比较,Sal B低剂量组、Sal B高剂量组和GSK-3β抑制剂组大鼠爬行格数、站立次数、运动总距离、跨越原平台次数增多,逃避潜伏期、首次跨越原平台时间缩短,海马神经元凋亡率以及海马组织中Bax、cleaved caspase-3、t-GSK-3β、p-β-Catenin蛋白表达水平降低,Cyclin D1、c-Myc、p-GSK-3β、t-β-Catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 Sal B能够减轻PTSD模型大鼠海马神经元凋亡、损伤并可改善其认知功能障碍,抑制GSK-3β/β-Catenin信号通路。

蛋氨酸合成酶催化反应研究Ⅴ:5-氨基-6-(3-羟基-4-溴丁基)尿嘧啶的合成研究

报导了 5 氨基 6 (3 丁烯基 )尿嘧啶、5 氨基 6 (3 羟基 4 溴丁基 )尿嘧啶的合成方法 .以γ 取代的β 酮酯和O 甲基异尿硫酸盐为起始物 ,经 6 取代尿嘧啶 (3)、6 取代 5 偶氮尿嘧啶 (4)和未见文献报道的中间体 6 ,首次合成了 5 氨基 6 (3 丁烯基 )尿嘧啶 (5 )及 5 氨基 6 (3 羟基 4 溴丁基 )尿嘧啶 (7)

A型肉毒毒素联合透明质酸注射治疗面下1/3皮肤衰老

目的 评估A型肉毒毒素联合透明质酸注射治疗面下1/3皮肤衰老的安全性和有效性。方法 选择符合手术适应证的56例面下1/3皮肤衰老患者,在局部表面麻醉下,行多位点透明质酸和A型肉毒毒素注射治疗。术后随访,观察并评估治疗前后的临床效果、疗效维持时间,记录不良反应。结果 治疗后,所有患者面下1/3形态较术前丰满、自然;术后随访1~6个月,患者满意率达到91.1%;术后6个月无不良事件出现。结论 应用A型肉毒毒素联合透明质酸注射治疗面部下1/3皮肤衰老的患者,临床效果显著,且安全性好。

利用3D皮肤模型研究不同分子量透明质酸的抗刺激作用

将十二烷基硫酸钠(SDS)和不同分子量的透明质酸(HA)共同作用于人永生化表皮细胞(Ha Ca T)和3D皮肤模型,作用24 h后通过MTT比色法检测细胞活性,利用ELISA方法检测培养液中人白细胞介素(IL-1α)的水平,并进行组织学观察细胞形态。研究在不同实验模型中,不同分子量HA影响SDS对细胞的损伤和释放IL-1α的差异。结果表明,3D皮肤模型可用于HA的体外抗皮肤刺激作用的研究,实验结果更接近人体实际使用情况以及能提供更多的机制信息。

黄芪注射液与透明质酸联合O_3关节腔内注射治疗OA的临床研究

目的观察黄芪注射液和透明质酸联合O3关节腔内注射治疗OA和单独应用O3治疗的疗效比较。方法将60例膝OA患者分为2组;实验组采用黄芪注射液2.5 mL、透明质酸2.5 mL、浓度为35 mg·L-1的医用臭氧15 mL关节腔注射,对照组采用生理盐水5 mL、浓度为35 mg·L-1的医用臭氧15 mL关节腔注射。治疗后1周抽取关节液,分别检测关节液IL-1β、TNF-α水平;治疗前后对OA患者按照VAS、LKSS等标准比较各组疗效。结果黄芪注射液和透明质酸联合O3关节腔内注射治疗OA和单独应用O3治疗均能很好改善VAS及LKSS评分、降低关节肿胀及活动指数,黄芪注射液和透明质酸联合O3注射较单独O3治疗更明显(P<0.05);同时联合注射与O3单独注射治疗OA比较能明显降低IL-1β、TNF-α的含量(P<0.01)。结论黄芪注射液与透明质酸联合O3关节腔内注射治疗OA较单独注射O3明显降低IL-1β、TNF-α的含量,其通过抗炎减轻OA患者临床症状,改善关节功能。

透明质酸、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体-3和高尔基蛋白73联合检测在肝脏疾病诊断中的价值

目的探讨联合检测透明质酸(HA)、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)和高尔基蛋白73(GP73)水平在肝脏疾病诊断中的价值。方法对2014年1月至2016年6月收治的36例原发性肝癌患者、46例肝硬化患者、40例慢性肝炎患者及50例健康体检者血清中的HA、AFP、AFP-L3和GP73水平进行检测。结果原发性肝癌组的HA、AFP、AFP-L3、GP73水平较慢性肝炎组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);原发性肝癌组的AFP、AFP-L3水平较肝硬化组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);原发性肝癌组的HA、GP73水平与肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组的HA、AFP、AFP-L3、GP73水平较慢性肝炎组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在36例原发性肝癌患者中,AFP-L3的灵敏度和特异度最高,分别为76.4%和83.1%。在联合检测中,HA、AFP、AFP-L3、GP73四项联合检测的灵敏度和特异度分别为89.5%和91.7%,高于其他任一组合。结论 HA和GP73的高水平与肝损伤及长期纤维化有关,其在诊断肝硬化中有较好的灵敏度和特异度,AFP-L3在诊断肝癌方面灵敏度较好,AFP-L3和AFP两者联合应用可提高肝癌的诊断特异度。

神经营养因子3修饰透明质酸-甲基纤维素水凝胶修复脊髓损伤大鼠神经功能的恢复

背景:透明质酸-甲基纤维素水凝胶不仅能与短肽序列和生长因子缀合实现缓释,还具有封闭硬脊膜缺损并减轻炎症反应的作用,是治疗脊髓损伤的理想生物材料。目的:探讨透明质酸-甲基纤维素-神经营养因子3水凝胶对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的效果。方法:将54只雌性SD大鼠(由解放军军事医学科学院实验动物中心提供)随机分成3组,每组18只:假手术组行T10椎板切除;模型组和实验组行T10椎板切除后,利用动脉瘤夹建立脊髓损伤模型,随后实验组脊髓损伤区域局部注射透明质酸-甲基纤维素-神经营养因子3水凝胶。造模后1d及1,2,3,4,5,6,7,8周行Basso Beattie Bresnahan(BBB)功能评分,造模后4,6,8周行斜板实验,评估后肢功能恢复情况;术后1周,利用ELISA法检测脊髓中炎性因子质量浓度;造模后8周,用免疫组织化学染色观察脊髓空洞面积、胶质纤维酸性蛋白表达、神经再生变化情况。结果与结论:①模型组、实验组造模后各时间点的BBB评分均低于假手术组(P<0.05),实验组造模后4-8周的BBB评分高于模型组(P<0.05);②斜板实验中,模型组、实验组术后各时间点的最大倾斜角均低于假手术组(P <0.05),实验组造模后6,8周的最大倾斜角高于模型组(P <0.05); ③实验组、模型组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6及白细胞介素10质量浓度高于假手术组(P <0.05),实验组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6质量浓度低于模型组(P <0.05),实验组白细胞介素10质量浓度高于模型组(P <0.05);④免疫组织化学染色显示,实验组和模型组胶质纤维酸性蛋白表达多于假手术组,实验组胶质纤维酸性蛋白表达低于模型组;实验组脊髓空洞面积小于模型组(P <0.05);⑤结果表明,脊髓损伤后局部注射透明质酸-甲基纤维素-神经营养因子3水凝胶,能有效抑制炎症反应和星型胶质细胞活化增生,减少纤维瘢痕形成,保护神经组织,促进肢体运动功能恢复。

谷氨酸棒杆菌3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因的克隆与过量表达

本实验对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AS10111及其亚硝基胍诱变获得的丙氨酸和酪氨酸双营养缺陷型、抗3-甲基色氨酸突变菌株JLC1中3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶(DS)基因进行克隆和序列分析,将突变体来源DS基因构建pZ8-1-DSM重组质粒,在谷氨酸棒杆菌突变株JLC1中进行表达,重组菌株JLC1(pZ8-1-DSM)DS酶活力分别是宿主菌和野生型菌株DS酶活力的5.9和7.3倍,色氨酸产量达到14.90g/L,较宿主菌提高了65%。这表明通过在谷氨酸棒杆菌中过量表达3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因可以有效提高该酶活力和色氨酸的产量。

透明质酸支架复合小鼠3T3-L1细胞及VEGF注射充填的实验研究

目的观察透明质酸（HA）支架复合小鼠3T3- L1细胞及血管内皮细胞生长因子（VEGF）注射充填后移植细胞的存活情况。方法体外培养细胞并诱导后分组，PCR法检测分组后的脂肪分化相关基因[氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、转录因子CCAAT增强子结合蛋白α（C- EBPα）]的表达。根据移植物成分分为4组：实验组（3×106诱导后脂肪细胞＋0.6mlPBS缓冲液＋0.6mlHA＋20ng/mlVEGF），HA对照组（3＆#215;106诱导后脂肪细胞＋0.6mlPBS缓冲液＋0.6mlHA），VEGF对照组（3＆#215;106诱导后脂肪细胞＋1.2mlPBS缓冲液＋20ng/mlVEGF），空白对照组（3＆#215;106诱导后脂肪细胞＋1.2mlPBS缓冲液）。术后2、4、8周处死小鼠后取材，标本行形态学及病理学检查，并测定移植物质量及微血管计数。结果体外培养后各组小鼠PPARγ及C/EBPα条带密度相近。实验组较其他各组存活的细胞多，形态均一，坏死较少。2、4、8周实验组小鼠移植物质量均明显高于其他组，HA对照组均明显高于VEGF对照组及空白对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；2、4、8周实验组小鼠微血管计数均明显高于其他组，VEGF对照组均明显高于空白对照组，HA对照组均明显低于VEGF对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 HA支架复合小鼠3T3- L1细胞及VEGF体外培养后移植入小鼠体内可以提高移植细胞的存活水平。

石榴3-脱氢奎尼酸合成酶基因的克隆及表达分析

利用RT-PCR技术从泰山红石榴(Punica granatum L.)果皮中获得3-脱氢奎尼酸合成酶(DHQS)基因cDNA序列,分析了其在不同石榴品种发育期果实中的表达情况。结果表明,DHQS基因cDNA序列长273 bp,编码91个氨基酸,编码蛋白具有典型的DHQ_Fe_ADH超家族保守结构域。该基因核苷酸序列与欧洲山毛榉、梅花和蒺藜苜蓿的相似性分别为91%、87%和88%,氨基酸序列与欧洲山毛榉、苹果、白梨和拟南芥的相似性分别为95%、92%、92%和88%。两个石榴品种发育期果皮中DHQS基因相对表达量逐渐降低,均在7月15日出现峰值。整个发育期,泰山红DHQS基因表达量高于泰山三白甜。

透明质酸酶和C3F8诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的研究透明质酸酶联合C3F8玻璃体腔注药诱导兔眼玻璃体后脱离(PVD)的效果及安全性。方法12只兔(24只眼)随机分A、B、C3组,每组4只,每兔一眼为实验眼,另一眼为对照眼。A组实验眼玻璃体腔注射0.2ml(10U)透明质酸酶,B组为0.2mlC3F8,C组为0.1ml(10U)透明质酸酶+0.1mlC3F8,对照眼玻璃体腔注入0.2mlBSS溶液。注射后常规裂隙灯、直接眼底镜及眼部B超检查。在2周后处死动物,眼球标本送光镜、扫描电镜和透射电镜检查。结果C组4只实验眼在术后2周时B超有完全性玻璃体后脱离表现,扫描电镜也表现为较光滑的后极部视网膜表面;A组、B组及对照组眼B超检查无玻璃体后脱离表现,扫描电镜示视网膜表面较多纤维状附着物。各实验组及对照组光镜及透射电镜检查未发现视网膜组织有毒性改变。结论10IU透明质酸酶联合0.1mlC3F8玻璃体腔注药2周后可诱导兔眼完全性玻璃体后脱离的发生,且形态学上无视网膜毒性表现。

骨性关节炎患者生物标志物透明质酸、软骨寡聚基质蛋白、基质金属蛋白酶3水平的变化及意义

目的探讨骨性关节炎患者生物标志物透明质酸(HA)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)水平的变化及意义。方法随机选取2016年1月~2019年1月我院收治的40例骨性关节炎患者作为观察组,选取同期在我院进行体检的40例健康人群作为对照组,分别检测两组的HA、COMP、MMP-3水平。比较两组的HA、COMP、MMP-3水平,并根据观察组患者的关节软骨分型,比较轻、中、重型患者的HA、COMP、MMP-3水平。结果观察组的HA、COMP、MMP-3水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组轻、中、重型患者的HA、COMP、MMP-3水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);重型患者的HA、COMP、MMP-3水平高于中、轻型,差异均有统计学意义(P<0.05);中型患者的HA、COMP、MMP-3水平高于轻型,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在骨性关节炎患者中,生物标志物HA、COMP、MMP-3的水平升高,且随着病情的加重而逐渐增加,在骨性关节炎患者的早期诊断中具有一定的参考价值。

PI3K/Akt-aPKC_(ι/ζ)-Nrf2调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

目的:观察香烟烟雾提取物(CSE)是否通过磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt-不典型蛋白激酶Cι/ζ(aP-KCι/ζ)-核因子相关因子2(Nrf2)信号通路调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(-γGCS)表达。方法:用Western blot法检测-γGCS、Nrf2、p-Akt和p-aPKCι/ζ蛋白质,细胞免疫化学法观察-γGCS蛋白质表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测-γGCSmRNA,免疫荧光法检测Nrf2蛋白质,流式分析法检测p-Akt阳性细胞率,双酶法测定-γGCS活性,酶循环分析法测定总还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果:暴露CSE 3 h,GSH含量显著升高,Nrf2胞核蛋白质、p-aPKCι/ζ蛋白质、p-Akt蛋白质及其阳性细胞率、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性均显著增强。aPKCι/ζ抑制剂RO813220明显减弱p-aPKCι/ζ蛋白质、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性表达,但增强Nrf2胞浆蛋白质表达,对p-Akt无影响。p-Akt抑制剂LY294002及RO813220+LY294002均降低p-aPKCι/ζ蛋白质、p-Akt蛋白质及阳性细胞率、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性表达,增强Nrf2胞浆蛋白质表达。直线相关性分析显示Nrf2与-γGCS、p-Akt及p-aPKCι/ζ呈正相关,p-Akt与Nrf2、p-aPKCι/ζ及-γGCS呈正相关,p-aPKCι/ζ与Nrf2、p-Akt及-γGCS呈正相关(P<0.05)。结论:CSE可能通过PI3K/Akt-aPKCι/-ζNrf2调节-γGCS表达。

红藻氨酸癫痫大鼠颞叶皮层糖原合成酶激酶3β的变化

目的观察红藻氨酸癫痫大鼠颞叶皮层糖原合成酶激酶3β(GSK3β)在细胞内转运的变化。方法利用红藻氨酸颈部皮下注射诱发大鼠癫痫发作,用Western Blot方法检测大鼠颞叶皮层总GSK3β,同时分离细胞核与细胞质蛋白,分析细胞核和细胞质GSK3β水平。结果在诱发4、5级癫痫发作后4周,模型大鼠颞叶皮层总的GSK3β水平没有明显改变,但发生了细胞质到细胞核的迁移。结论红藻氨酸诱导的癫痫发作可促使GSK3β从胞质至胞核的迁移。