半定量RT-PCR法测定链球菌透明质酸合酶mRNA的水平

根据透明质酸合酶基因序列及内参照GAPDH基因序列 ,设计目的基因和内参照的引物序列 ,探讨了PCR体系中适宜的退火温度、循环次数和Mg2 + 浓度。实验结果显示 ,要保证半定量RT -PCR的准确性与可靠性 ,目的基因及内参照基因的退火温度均可选择 5 0℃ ,它们的Mg2 + 浓度均选择 1.5mmol L ,目的基因的循环次数选择 30次 ,内参照基因的循环次数选择 35次。在上述适宜的RT -PCR条件下 ,测定兽疫链球菌中透明质酸合酶mRNA水平。

透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞促进舌癌细胞侵袭中的作用

目的:检测透明质酸合酶2(hyaluronan synthase 2,HAS2)在正常成纤维细胞(normal zone fibroblasts,NFs)及癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)中的表达,并探讨其在CAFs介导的舌鳞癌细胞系Cal27侵袭行为中的作用。方法:分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs。免疫细胞化学、Western blot法鉴定细胞表型。实时定量RT-PCR及Western blot检测透明质酸合酶在两种细胞中的表达。利用Transwell小室共培养模型,观察CAFs及NFs对舌癌细胞系Cal27侵袭能力的影响。利用siRNA抑制CAFs中的HAS2,并分析其对Cal27侵袭能力的影响。结果:α-SMA表达于CAFs,NFs中几乎无表达。Cal27在CAFs组中的侵袭力显著高于NFs组及空白对照组(P<0.01)。实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P<0.01),蛋白水平则为NFs的3倍(P<0.01);Cal27在HAS2干扰组的侵袭力显著低于CAFs组及无关序列组(P<0.01)。结论:CAFs具有促进舌癌细胞侵袭能力的作用,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移的途径。

黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合成酶mRNA及透明质酸的影响

目的:探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响。方法:用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞,RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达,放免法检测培养上清液中透明质酸含量。结果:用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRN表达及培养上清液中透明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成。

透明质酸生物合成的研究进展

此文综述了透明质酸合酶分子生物学研究概况,并对利用基因工程改造生产菌株的研究现状及发展趋势进行了论述。

黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞合成透明质酸的影响

目的探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响。方法用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞,RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达,放免法检测培养上清液中透明质酸含量。结果用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及培养上清液中透明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成。

骨桥蛋白-CD44配体受体反应对人膝骨关节炎软骨细胞透明质酸表达的影响

目的:通过干预体外培养人膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中的骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与CD44配体受体反应,观察其对软骨细胞透明质酸(hyaluronic acid,HA)表达的影响。方法:分别从膝OA患者和恶性肿瘤患者的膝关节软骨组织中获取OA软骨细胞和正常软骨细胞,对正常软骨细胞和OA软骨细胞进行检测,然后对OA软骨细胞进行干预分析。将OA软骨细胞分为如下4组:阴性对照组,用完全培基正常培养,不加任何干预试剂;OPN干预组,以人重组OPN(recombinant human OPN,rhOPN)干预24 h;CD44阻断组,预先采用CD44受体特异性拮抗剂干预软骨细胞1 h以阻断OPN-CD44结合后,再加入rhOPN干预23 h;CD44同型组,预先采用CD44干预软骨细胞1 h后,加入rhOPN干预23 h。此外,在OPN-CD44轴线的研究中,OA软骨细胞又分为OA阴性对照组、沉默OPN(si-OPN)干预组、rhOPN干预组和rhOPN+CD44抗体组(rhOPN+CD44 Ab组)。采用蛋白质印迹法、real-time PCR和ELISA分别对OPN,CD44,透明质酸合酶(hyaluronate synthase,HAS)和HA的表达水平进行检测。结果:OA软骨细胞中OPN,CD44和HAS1的蛋白质表达水平及HA的分泌水平均高于正常软骨细胞;与OPN干预组相比,CD44阻断组HAS1,HAS2,HAS3和HA的表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与OPN干预组相比,CD44同型组HAS1,HAS2,HAS3和HA的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。对OPN-CD44轴线的研究结果显示:与OA阴性对照组相比,rhOPN干预组CD44的表达降低,但HAS1的蛋白质和m RNA水平却显著上调,差异均有统计学意义(均P<0.05);与OA阴性对照组相比,si-OPN干预组CD44的表达上调,但HAS1的蛋白质和mRNA水平却受到抑制,差异均有统计学意义(均P<0.05);与OA阴性对照组相比,rhOPN+CD44 Ab组HAS1的蛋白质和mRNA水平也受到显著抑制,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:OA软骨细胞内OPN对HAS1的表达具有促进作用,且OPN是通过与CD44配体受体反应刺激软骨细胞HAS分泌,进而诱导HA表达,三者之间构成OPN/CD44/HAS1的轴线,该轴线对软骨细胞内HA的表达起重要的调控作用。

重组生产透明质酸技术中国专利申请分析

本文从相关专利申请的申请数量、申请人分布、申请所处法律状态、专利技术概况等角度,对通过基因工程手段重组生产透明质酸领域的中国专利申请状况进行了分析和概述。

脑胶质瘤组织中HAS2、ADAMDEC1蛋白及VTN表达临床意义

目的:分析透明质酸合酶2(HAS2)、ADAMDEC1蛋白与玻连蛋白(VTN)在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:将2021年8月至2022年8月本院收治的89例脑胶质瘤患者纳入观察组,另将同期本院行手术治疗的无任何肿瘤疾病的90例脑外伤患者纳入对照组,采集两组脑组织标本,检测对比其HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表达的差异;另收集脑胶质瘤患者的年龄、性别等资料,统计分析HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表达与患者各项临床病理特征之间的关系。结果:观察组的HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表达与脑胶质瘤患者的性别、年龄、肿瘤部位、体质量指数(BMI)无关,差异无统计学意义(P>0.05);与肿瘤的直径、淋巴结转移、世界卫生组织(WHO)分级有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN在脑胶质瘤患者癌组织内呈异常的高表达,三者的阳性表达与患者的肿瘤直径、WHO分级、淋巴结转移密切相关,参与肿瘤的发生与发展。

人HAS3启动子的结构与功能初步分析

透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点.结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.

彩色多普勒超声联合血清HAS2和ADAM9诊断甲状腺微小乳头状癌的价值

目的分析彩色多普勒超声(彩超)、血清透明质酸合酶2(HAS2)、去整合素金属蛋白酶9(ADAM9)及三者联合对甲状腺微小乳头状癌(PTMC)的诊断价值。方法选取2020年10月至2022年10月在联勤保障部队第九一〇医院行手术治疗,且病理结果证实为PTMC的患者74例作为恶性组,选取同期术后病理结果为甲状腺良性结节的患者71例作为良性组。所有患者均行彩超检查;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HAS2、ADAM9水平;采用Pearson法分析PTMC患者血清HAS2、ADAM9的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析彩超、血清HAS2、ADAM9以及三者联合对PTMC的诊断价值。结果恶性组和良性组结节在边界、内部回声、边缘、微钙化、纵横比以及声晕方面差异有统计学意义(P<0.05)。恶性组血清HAS2[(97.01±21.38)pg/mL vs(66.47±10.29)pg/mL,t=10.886,P<0.01]和ADAM9[(1.96±0.50)pg/mL vs(1.33±0.28)pg/mL,t=9.308,P<0.01]水平高于良性组。PTMC患者血清HAS2和ADAM9水平呈正相关(r=0.516,P<0.05)。血清HAS2、ADAM9诊断PTMC的AUC为0.929和0.924。三者联合在PTMC诊断中的准确度为85.52%,灵敏度为95.95%,高于单一检测。结论彩超联合血清HAS2、ADAM9对PTMC具有较高的诊断价值,三者联合可提高诊断灵敏度。

老年胃肝样腺癌患者临床及病理特征探讨

作为一种特殊类型胃癌疾病,胃肝样腺癌疾病主要在于患者的胃黏膜表现,呈现腺癌疾病分化特征以及肝细胞癌样分化特征的情况,主要集中于老年患者。当前胃肝样腺癌疾病的发生机制未有效明确,对于透明质酸合酶(hyaluronic acid synthase,HAS)疾病,其呈现在的恶性侵袭力较为严重,较易呈现出疾病复发以及肝转移的情况,从而较易有预后不良的情况[1]。

HAS-2沉默抑制大肠癌细胞上皮间质转化

目的本研究主要探讨HAS-2沉默前后对大肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法分别用Realtime PCR及Western blot方法检测HAS-2 siRNA转染前后E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail mRNA、蛋白表达水平变化,用免疫荧光法观察HAS-2 siRNA转染前后E-Cadherin、Vimentin表达的变化。结果 E-Cadherin蛋白和mRNA在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组比阴性对照组明显上调(<0.05),而Vimentin蛋白和mRNA,Snail mRNA and Slug蛋白在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组表达水平比阴性对照组明显下调(<0.05)。结论 HAS-2沉默对大肠癌细胞EMT有抑制作用。