Src-MAPK信号通路参与透明质酸寡糖片段诱导PIEC细胞的增殖

探讨透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长的影响及机制。采用细胞计数、流式细胞术、Western blot等方法,检测o-HA作用于内皮细胞后,Src激酶、丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK-1/2)的磷酸化程度及细胞周期蛋白D1的表达水平。o-HA在10μg/ml浓度时可明显地促进血管内皮细胞的增殖,包括细胞周期水平及细胞数量。继续增加o-HA的浓度及延长培养时间均未出现进一步的变化；细胞增殖在12h开始出现,72h达到高峰。1μg/ml的o-HA作用于细胞2min后,胞内Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度即增强,并在3h后检测到周期蛋白D1的表达水平增高。o-HA具有促进血管内皮细胞增殖的作用,其机制可能是通过激活Src激酶及细胞内MAPK信号通路,从而促进血管内皮细胞生长；该作用也可能与上调周期蛋白D1的表达有关。

荧光标记电泳对透明质酸寡糖片段鉴定的方法建立

近年来,透明质酸寡糖片段(hyaluronan oligosaccharides,o-HA)的生物学活性引起国外学者的重视,因为o-HA具有一定的生物学活性,如参与免疫调节、刺激新生血管形成等.本研究建立一种经济、简便的ANTS(8-氨基奈-1,3,6-三磺酸)荧光标记电泳对透明质酸寡糖片段大小鉴定的新实验方法.实验原理为,ANTS能与糖分子发生还原反应,在反应时提供3个电子和1个荧光基团,通过高浓度PAGE分离,在特定波长下呈现颜色反应.采用酶消化法得到不同分子量大小的o-HA片段,测得不同片段大小的o-HA聚合度,分别与高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)和静电喷雾电离质谱(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)进行比较,结果吻合.研究提示,用荧光标记电泳法分析寡糖分子量,操作简单、设备低廉、灵敏度较高且检测速度快,是一种检测鉴定寡糖分子的较好方法.

透明质酸寡糖片段促进血管内皮细胞增殖的研究

目的:研究分离纯化的透明质酸寡糖片段(o-HA)对血管内皮细胞增殖的作用。方法:选用猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)做为靶细胞,人胚肾293细胞做为对照细胞,应用本实验室分离纯化的o-HA(4-12-mer)配成一系列浓度(0、1、3、5、10及20μg/ml),加入靶细胞及对照细胞继续培养不同时间(0、6、12、24、48、72及96 h),从细胞计数、细胞周期分布和单层血管内皮细胞损伤修复来观察血管内皮细胞的增殖情况。结果:10μg/ml o-HA作用于PIEC时能显著促进增殖,继续增加o-HA的浓度,增殖作用未随之增强;o-HA刺激培养12 h PIEC即明显增生,至72 h达高峰(P<0.05);o-HA对PIEC损伤模型也有显著的促愈合作用。结论:o-HA能显著促进血管内皮细胞的增殖。