生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究

目的建立软骨细胞体外培养模型,研究纤维软骨和透明软骨的生物学差异。方法分离4周龄雌性兔双侧髁突软骨和膝关节骨骺软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化的方法收集软骨细胞,分别进行体外培养并连续传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色的方法分别对髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞进行鉴定;用细胞计数的方法绘制生长曲线;运用荧光定量PCR和Western印迹技术对软骨特异性指标Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan进行检测,并使用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果倒置显微镜观察示,髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞形态均会随细胞传代而发生改变,且P2代以后改变明显;基因和蛋白水平的检测均证实P2代后软骨细胞去分化明显。阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定结果均为阳性,对照组为阴性。实时定量荧光PCR和Western印迹结果证明:在纤维软骨中,Ⅰ型胶原的表达量高于透明软骨;而Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达量却明显低于透明软骨。结论使用本方法培养软骨细胞简单有效;髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞体外培养均存在去分化现象,且两者Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达存在显著差异,生物学特性并不相同。

基因芯片筛选骨髓间充质干细胞与透明软骨细胞的差异表达基因

[目的]通过筛选大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与透明软骨细胞及弹性软骨细胞的差异表达基因,为进一步筛选可诱导MSCs向透明软骨细胞分化的生长因子打下基础。[方法]分离获得所需MSCs、弹性软骨细胞和透明软骨组织,提取细胞和组织块的总RNA并纯化。获得经荧光标记的cDNA,与基因芯片杂交后扫描荧光信号图像,对所获图像进行分析,找到差异表达基因。分析所获差异表达基因功能。[结果]以2倍差异显著性为标准,在两种软骨中共同上调的基因数为582条,而于透明软骨组中上调,弹性软骨组中下调的基因数为459条。将基因功能查询结果与cy5/cy3比值大小结合考虑后,确定了软骨调节素1(chondromodulin1,Chm1)基因、前II型胶原α1链(procollagen,type2,alpha1,Col2α1)基因和软骨同源异型蛋白1(Cartilagehomeopro-tein 1,Cart1)基因可做为目标研究基因。[结论]Chm1基因、Col2α1基因与Cart1基因可能是诱导MSCs向透明软骨细胞方向分化的关键基因。

两种方法保存人体透明软骨行异种移植的实验研究

目的 探讨不同方法保存的人体透明软骨 ,异种移植后软骨存活的动态变化及在整形外科应用的可行性。 方法 选择 4 8只新西兰种成年白兔 ,随机分为两组 ,每组 2 4只 ,分别接受 - 198℃液氮冷冻和 75 %酒精灭活法保存的人体透明软骨移植 ,观察一年。术后每 3个月比较两组血清IgG、IgM、IgA、C3、C4 、PFB(补体B因子 )含量 ,每月随机抽取两组各两只兔子取移植软骨块观察其外形、色泽 ,测重量。比较光学显微镜和透射电镜下的组织学变化。 结果 两实验组各时间点IgG、IgM、IgA、C3、C4 、PFB含量与术前相比无显著性差异 ,P >0 0 5。深低温保存法软骨移植后 1- 2个月内重量略有增加 ,3个月重量开始减少 ,至 1年达最低点。光学显微镜下观察 ,2个月可见新生不成熟软骨细胞。 3个月时软骨开始出现退行性变 ,至 6个月时明显加重。酒精灭活移植软骨重量无明显变化 ,仅在 6个月时开始出现轻度退行性变。透射电镜下观察的变化规律基本与光学显微镜下的观察结果相一致。结论酒精灭活法保存的人体透明软骨用于异种移植后 ,外型变化小 ,提示其临床应用可行性优于液氮冷冻保存法。

滑膜间充质干细胞向透明软骨分化条件的体外研究

目的:研究TGFβ1、BMP-2、b FGF、IGF、BMP-7、ASA、Dex七种因素在滑膜间充质干细胞向透明软骨分化中起的作用。方法:酶消化法、有限稀释法获得滑膜间充质干细胞,并诱导其向脂肪细胞、软骨细胞和骨细胞分化。正交实验中纳入TGFβ1、BMP-2、b FGF、IGF、BMP-7、As A、Dex七种因素。通过SPSS22.0统计软件设计L8(27)正交实验及表头,定义2水平条件。结果:滑膜间充质干细胞在成骨、成脂、成软骨分化后分别进行油红染色、碱性磷酸酶染色、甲苯胺蓝染色,染色结果均呈现为阳性。正交实验中直观观察、主体间方差分析显示TGFβ1作用最强。结论:滑膜间充质干细胞能够成功诱导向各种组织细胞分化,TGFβ1是七种因素中作用最明显的一种。

体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究

目的研究体外持续传代对透明软骨细胞形态表型、分化特性及细胞外基质(ECM)平衡状态的影响。方法酶消化法分离培养小鼠透明软骨细胞,连续传代至第5代。采用苏木精-伊红染色观察软骨细胞的形态改变,采用半定量聚合酶链式反应分析软骨细胞特异性基因、常规基因、基质金属蛋白酶家族(MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(TIMPs)m RNA水平的变化,采用明胶酶谱分析鉴定软骨细胞明胶酶活性的改变。结果随着传代次数增加,软骨细胞形态由圆形或多边形变为长梭形,其特异性基因的表达量明显下降(P<0.05),至第5代已基本丧失。相比而言,常规基因的下调并不明显。MMPs和TIMPs均有下调(P<0.05),仅MMP-1和TIMP-1改变的差异无统计学意义(P>0.05);MMPs/TIMPs比值随传代发生紊乱。在蛋白质水平,随传代次数增加,明胶酶的活性下降,P4和P5代细胞下调显著(P<0.05)。结论软骨细胞在体外培养过程中,其特异性表型特征会随传代次数增加而逐渐丧失,软骨细胞发生反分化而表现出纤维化趋势。同时,ECM的平衡状态被打破,合成与分解代谢紊乱。在利用软骨细胞进行相关疾病的研究或软骨组织工程学实验时,应选用前3代的软骨细胞。

隆鼻最理想的材料——透明软骨

鼻尖被视为鼻子这个锥体形"金字塔"结构的"塔尖",其视觉上的重要作用不言而喻,因而隆鼻术中使用的材料也受到人们的更多关注。那么隆鼻最理想的材料是什么呢?在美国德克萨斯达拉斯市召开的第25届《达拉斯鼻整形研讨会》上。

透明细胞软骨肉瘤术后皮肤和内脏多发性转移一例

透明细胞软骨肉瘤是一种生长缓慢、低度恶性的肿瘤,皮肤转移罕见,本文报道1例中年女性患者,左臀部丘疹及全身多发结节伴瘙痒5年余。左臀部丘疹及右臀部结节的组织病理及免疫组化结果均符合转移的透明细胞软骨肉瘤。完善PET-CT提示内脏多发性转移。患者接受化疗联合靶向药物治疗8个疗程后,病情明显好转,目前仍在随访中。

推动同种异体骨软骨移植治疗软骨损伤在我国的应用

随着体育运动的广泛普及,局限性关节软骨损伤患者逐渐增多。由于关节软骨损伤不能自我修复,临床上对青壮年局限性较大面积软骨缺损的治疗尤为棘手。常用的治疗方法有微骨折、软骨细胞移植、组织工程软骨修复等,但存在不能形成透明软骨、修复组织远期退变等不足,尤其是不能提供即时、正常的负重等生物力学功能。

同种异体骨软骨移植治疗关节软骨损伤的现状

关节软骨是一种特殊的透明软骨组织,由细胞外基质与少量软骨细胞构成,关节软骨损伤在年轻、活跃的人群中非常常见[1]。损伤范围较大、有明显症状的关节软骨损伤影响患者运动和日常生活活动,可致骨关节炎的发病率明显提高,由于关节软骨的再生能力及自我修复能力较差,使关节软骨损伤的自然愈合有限。

使用细胞外基质启发的天然水凝胶支架促进骨软骨修复与透明软骨形成

骨软骨缺损是一个巨大的挑战,目前临床上尚未确定满意的修复策略.尤其是不恰当的修复方法可能导致纤维软骨和软骨下骨的生成,从而导致骨软骨组织的退化,最终导致修复失败.本研究受天然细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中固有的化学成分的启发,提出了一种由天然多糖和多肽组成的新型仿生ECM支架,用于骨软骨修复.通过对天然生物聚合物进行修饰改性,形成具有可逆的客体-主体网络和刚性的共价网络的双网络结构,该支架不仅表现出优秀的生物相容性、细胞适应性和生物可降解性,还具有卓越的机械性能以适应骨软骨组织的环境.在兔的骨软骨缺损中,这种受ECM启发的支架不仅展示了强大的促进透明软骨形成的能力,还加速了具有优良骨密度的软骨下骨的再生.此外,新生的软骨和软骨下骨表现出了天然软骨的异质性特征,模拟了软骨到软骨下骨的渐进过渡.这些结果突显了该新型仿生ECM支架在临床应用中的潜在价值.

同种透明软骨移植后蛋白多糖动态变化的实验观察

通过动物实验,利用组织学、组织化学和生物化学等手段,对同种透明软骨移植后不同时期基质中的蛋白多糖含量进行了动态变化观察。结果显示,蛋白多糖含量的高低对移植的异体软骨能否存活极为重要。

非诱导脂肪源性干细胞对修复全层透明软骨创伤的可行性研究

目的探讨源自分布广泛的脂肪组织的干细胞的体内分化潜能及非诱导修复全层透明软骨缺损的效果。方法体外切取脂肪组织并分离培养脂肪源性干细胞(ADSCs)。随机将36只新西兰大白兔分为三组,混合有藻酸钙凝胶的ADSCs用来填充髌股关节的全层透明软骨损伤,凝胶修复或未做治疗组作为对照组。4周和12周后对重建组织进行大体和光镜、电镜下观察,组织学分析和定量计分也用于检测结果。结果 ADSCs重建的组织白色质韧,完全充填缺损处,表面光整与周围软骨连接,修复组织的微观结构与软骨相似,含有更多的细胞和规则的基质纤维,基质有甲苯胺蓝异染性,优于其他各组。透射电镜可见大量胶原纤维环绕细胞周围。凝胶组和对照组修复组织为薄层纤维组织。修复效果评分的统计分析显示实验组在各时间点上与其他组相比有统计学差异(P<0·01)。结论这些结果表明源自成熟脂肪而未经诱导的干细胞拥有修复软骨创伤的能力,组织显示为透明样,产生生物学可行性结果。

低强度He-Ne激光辐照对兔透明软骨细胞活性的影响

整形外科领域中，由于软骨组织和软骨细胞的自身生理特性限制，软骨缺损修复目前仍为一亟待解决的医学难题。为寻找一种修复成熟关节软骨缺损并能提高修复质量的有效方法，通过实验来评价低强度He-Ne激光辐照能否提高兔透明软骨细胞的生长与活性状态，并寻找建立该激光辐照参数与该细胞活性之间的关系。从婴兔的关节软骨分离出的透明软骨细胞经过培养、孵育，以O．25×10^5／mL的密度接种于96孔培养板，每孔为一组，均匀设定了12组。第1组作为对照组，后11组用激光辐照。细胞的生长活性采用四氮唑复合物(XTT)比色法进行检测。t检验分析得出，组5和组10(辐照剂量5J／cm^2)增殖效果最好，优于对照组和其他组(P<o．001)。另外，实验中采用扫描电子显微镜(SEM)观察，进一步验证了实验结论。结果表明，低强度He-Ne激光辐照对透明软骨细胞的活性提高具有明显效果．并且对细胞无损伤、无副作用，初步证实了低强度He-Ne激光用于临床软骨损伤修复的可行性。

低强度激光诱导透明软骨细胞增殖的初步研究

采用MTT比色法评价低强度He-Ne激光辐照能否对兔透明软骨细胞的增殖产生生物刺激效应。从婴兔的关节软骨分离出的透明软骨细胞经过培养、孵育用于激光生物刺激。透明软骨细胞以0．25×10^5ml的密度接种于96孔细胞培养板，每3孔为一组，均匀设定了12组。第1组作为对照组，后11组用激光辐照。其中，组5和组10增殖效果最好，优于对照组和其他组。实验结果表明：低强度He-Ne激光辐照对透明软骨细胞的增殖具有明显效果，并且对细胞无损伤、无副作用，初步证实了低强度He-Ne激光用于诱导透明软骨细胞体外增殖和临床软骨损伤修复的可行性。

纤维软骨透明化的研究进展

关节软骨是分布在关节表面的主要组织,在承重和润滑中起着重要作用。四肢关节的关节软骨主要由富含Ⅱ型胶原的透明软骨组成。当软骨损伤或退变时,原有的天然软骨会被富含Ⅰ型胶原蛋白的纤维软骨逐步取代。在此,我们提出一种新的软骨修复策略,该观点的重点是原位纤维软骨的改性和透明软骨的形成,即"纤维软骨透明化"。我们对纤维软骨透明化的可行性和潜在机制进行初步探讨和展望,有望此策略对软骨修复研究的发展和临床转化有一定帮助。

关节透明软骨的MRI实验研究

关节透明软骨的ＭＲＩ实验研究吴春江蒋学祥李松年刘赓年笔者对３０个新鲜离体牛髌骨及１０名健康志愿者的髌软骨进行系列的ＭＲＩ研究和相应的组织学对照研究，旨在认识正常关节软骨的ＭＲＩ信号特点。一、材料和方法１．材料：２岁龄牛髌骨３０个，１８～３０岁健康志愿...