透骨消痛颗粒防治膝骨性关节炎的机理研究

目的探讨透骨消痛颗粒防治膝骨性关节炎的作用机制。方法新西兰大白兔50只,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,分别测定关节液白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)浓度,血清MDA、NO吸光度及关节滑膜SOD活性。结果各实验组8周、16周关节液中IL-1、IL-6、TNF-α、MMP-3,血清NO、MDA均呈高表达,16周时关节滑膜中SOD含量呈低表达状态,与正常组比较差异有显著性(P<0．05,P<0．01)。8周后IL-1、TNF-α、MMP-3、NO、MDA含量,对照组、实验2组、实验3组与模型组比较差异有显著性(P<0．05,P<0．01),对照组、实验1组与实验3组比较差异有显著性(P<0．05);8周后IL-6含量,对照组、实验2组、实验3组与模型组比较差异有显著性(P<0．05);实验1组与实验3组比较差异有显著性(P<0．05)。16周后对照组、实验2组、实验3组与模型组比较差异有显著性(P<0．05,P<0．01);对照组、实验1组与实验3组比较差异有显著性(P<0．05)。结论透骨消痛颗粒通过有效抑制细胞因子、基质金属蛋白酶、氧自由基的生物效应来延缓软骨的退变。

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和Wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。

透骨消痛颗粒干预膝骨性关节炎早期环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶的表达

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风、川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效改善膝骨性关节炎的症状,但其具体机制尚不清楚。目的:观察透骨消痛颗粒对膝骨性关节炎早期环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响。方法:将90只新西兰大白兔随机等分为6组:除正常组外均采用改良Hulth法建立骨性关节炎动物模型,透骨消痛颗粒低、中、高剂量组及壮骨关节丸组分别在造模的基础上每天灌胃给予含透骨消痛颗粒5,10,20g或壮骨关节丸10g的水溶液。4周后,检测兔关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2及关节软骨和滑膜组织中诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶2的水平。结果与结论:骨性关节炎早期,关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2水平及滑膜和软骨中环氧合酶2、诱导型一氧化氮合酶表达均明显升高。透骨消痛颗粒及壮骨关节丸均可降低关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2及滑膜和软骨中环氧合酶2、诱导型一氧化氮合酶的表达,以透骨消痛颗粒中、高剂量组作用更明显。提示透骨消痛颗粒可通过抑制环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶表达,从而抑制软骨降解,缓解临床症状,达到保护关节软骨、防治骨性关节炎的作用。

透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化

背景:骨髓基质干细胞根据环境而有不同的分化路径,在特定的环境中有分化为透明软骨细胞的趋势,可能为治疗骨性关节炎提供新思路。目的:观察透骨消痛颗粒含药血清对骨髓基质干细胞向软骨分化的影响。方法:取SD大鼠四肢建立体外培养的骨髓基质干细胞,取第3代骨髓基质干细胞进行干预,分为生理盐水血清组、透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组。Real time PCR及Western Blot检测Sox9、collagenⅡ、collagenⅩ mRNA及蛋白表达。结果与结论:含药血清干预14d后,Sox9、collagenⅡ、collagenⅩ mRNA及蛋白表达水平,透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于生理盐水血清组(P<0.05,P<0.01),诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组(P<0.01),其中Sox9表达透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组高于诱导软骨。说明透骨消痛颗粒含药血清通过上调Sox9的表达,加速骨髓基质干细胞细胞向软骨细胞分化。

透骨消痛颗粒对骨性关节炎组织形态学的影响

为探讨透骨消痛颗粒对兔膝骨性关节炎组织形态学的影响。取新西兰大白兔50只,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,进行CR片、光镜、透射电镜观察。结果正常组膝关节间隙正常,关节面平整光滑,无骨赘;模型组内侧间隙明显变窄,有明显骨赘;实验1组关节变化基本同造模组;实验3组内侧间隙变窄,关节面粗糙变形,关节边缘有轻微骨赘形成,软骨下骨密度增高。对照组与实验2组介于实验1组、实验3组之间。表明透骨消痛颗粒具有延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变的作用。

透骨消痛颗粒含药血清对兔软骨细胞增殖影响的研究

目的:探讨透骨消痛颗粒含药血清对兔软骨细胞增殖的影响。方法:取4周龄新西兰兔膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,体外培养第3代软骨细胞随机分为5组,分别加入培养液、空白血清和中药血清低、中、高剂量继续培养24、48、72 h后,采用流式细胞仪检测软骨细胞周期的变化。结果:流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清中、高剂量能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,干预48 h后G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与低量组、空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:透骨消痛颗粒含药血清能有效促进软骨细胞的增殖。

透骨消痛颗粒水提与醇提物含药血清干预骨髓基质干细胞活性的实验研究

背景:骨髓基质干细胞根据环境而有不同的分化路径,在特定的环境中有分化为透明软骨细胞的趋势,可能为治疗骨性关节炎提供新思路。目的:观察透骨消痛颗粒水提与醇提物含药血清对骨髓基质干细胞活性的影响。方法:制备透骨消痛颗粒水、醇提物,108只SD大鼠随机摸球法均分为低、中、高剂量对照组、水、醇提物组,腹主动脉采血制备含药血清。取4周龄SD大鼠四肢骨髓基质干细胞,第3代同步化后用含药血清进行干预,MTT检测其活性,流式细胞仪检测其周期分布,Real time PCR检测Cyclin D1 mRNA表达,Western Blot检测Cyclin D1蛋白表达。结果与结论:透骨消痛颗粒水、醇提物含药血清干预48h后,软骨细胞的A值中高剂量组明显高于对照组(P<0.01,P<0.05);各组G0/G1期细胞,水、醇提物组明显低于对照组(P<0.01),水提物组明显低于醇提物组(P<0.05);各组增殖指数及Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水、醇提物组明显高于对照组(P<0.01),水提物组明显高于醇提物组(P<0.05)。说明透骨消痛颗粒水醇提物含药血清通过上调Cyclin D1的表达,加速骨髓基质干细胞周期的进程,从而促进其增殖,且透骨消痛颗粒水提物的效果优于醇提物。

透骨消痛颗粒干预早中期兔骨关节炎的影像学观察

目的 :应用影像学方法 ,观察透骨消痛颗粒对早中期兔骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型的干预作用,探讨影像学技术在OA实验研究中的应用价值。方法:新西兰大白兔48只,采用改良Hulth法造模,动物分成正常组、OA模型组、透骨消痛颗粒低、中、高剂量组和壮骨关节丸组,术后4、8、12、16周进行影像学检查(DR、CT、MRI),观察关节间隙狭窄、软骨下骨质变化、骨赘、关节积液、关节软骨等改变。结果:OA模型组各时段关节腔积液都较多,实验前期(4、8周)见软骨面毛糙,软骨下骨轻度增生硬化,实验后期(12、16周)软骨凸凹不平,软骨下骨增生硬化范围增大,内侧关节间隙略狭窄;透骨消痛颗粒中、高剂量组各时段,关节腔积液都较模型组少,后期见软骨面毛糙、软骨下骨硬化,且高剂量组病变程度最轻。结论:透骨消痛颗粒能减轻OA关节及滑膜炎症,延缓软骨损伤,延迟软骨下骨病变。MRI能较全面地观察膝OA,对早期病变更敏感、更准确。

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的探讨透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制。方法从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富。在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒含药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05)。结论透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化。

透骨消痛颗粒的现代药理学基础

透骨消痛颗粒组方缜密，具有很好的临床疗效川，为进一步探讨透骨消痛颗粒的疗效和作用机制．借助现代医学的理论与方法进行研究，冀在为开发Ⅲ类新药打下基础，并为中医药防治膝骨性关节炎（Orthteoarthritis，OA）提供科学的理论依据。

透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响

目的观察透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪检测透骨细胞颗粒干预后兔软骨细胞周期的变化。结果含药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,干预48 h后,G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.05)。结论透骨消痛颗粒含药血清能有效地促进软骨细胞的增殖。

透骨消痛颗粒治疗膝骨性关节炎骨内高压的成分模拟分析

目的预测透骨消痛颗粒对膝骨性关节炎骨内高压的影响。方法采用主成分分析、描述符计算等计算机方法来研究透骨消痛颗粒中分子和与血液循环系统相关药物分子/类药分子的化学空间。结果透骨消痛颗粒中分子有良好的多样性,具有类药性质,存在与血液循环系统作用的分子。结论透骨消痛颗粒可通过改善血液循环来达到防治膝骨性关节炎骨内高压。

透骨消痛颗粒对兔关节软骨细胞增殖的影响

目的:研究透骨消痛颗粒对兔关节软骨细胞增殖的影响。方法:取新西兰大白兔6只,随机分为含药血清组和空白血清组,分别给予用10 mL生理盐水溶解的透骨消痛颗粒2 g·kg-1·d-1和生理盐水10 mL·d-1灌服,1月后截取膝关节的软骨,对软骨细胞的分离、培养、纯化及鉴定后,采用MTT法检测不同浓度透骨消痛颗粒含药血清对成骨细胞增殖以及软骨细胞周期的影响。结果:用含药血清或空白血清干预,随着干预时间的延长,G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞数量增加,PI升高。与空白血清组相比,含药血清组在干预24小时即能促使较多软骨细胞进入增殖周期,由G0/G1期进入S期和G2/M期,在干预24、48、72小时的检测中G0/G1期细胞比例明显低于空白血清组,S期和G2/M的细胞数明显高于后者,PI与空白血清组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:透骨消痛颗粒含药血清可以促使更多体外培养软骨细胞迅速进入增殖周期,推进软骨细胞由G0/G1期向S期、G2/M期推进,推动细胞周期的进程,促进软骨细胞增殖。

透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓间充质干细胞分化的实验研究

目的探讨透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向软骨细胞分化的潜能。方法以临床等效剂量0.145 g/(kg·d)、0.29g/(kg·d)、0.58 g/(kg·d)制备各浓度透骨消痛颗粒含药血清,36只SD大鼠随机均分为空白对照组,低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别给予0.9%生理盐水20 m L,不同浓度透骨消痛颗粒含药血清各20 m L,连续灌胃3 d,采用全骨髓培养法分离培养BMSCs,显微镜下观察软骨细胞分化的形态变化并计数;RT-PCR检测骨髓基质干细胞中Sox9、CollagenⅡ、Runx2 mRNA表达。结果空白对照组细胞呈梭形,漩涡状,单一生长;透骨消痛颗粒含药血清各组BMSCs形态发生转变,至接种7 d后,其细胞生长达到高峰;透骨消痛颗粒含药血清可促进软骨细胞数量,且具有明显的剂量效应;透骨消痛颗粒含药血清可增加Sox9、CollagenⅡ和Runx2 mRNA表达水平。结论透骨消痛颗粒含药血清可有效诱导BMSCs向软骨细胞分化。

透骨消痛颗粒干预OA早期COX-2和iNOS表达的实验研究

目的:通过动物试验探讨透骨消痛颗粒对骨性关节炎早期环氧化酶-2(COX-2)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,研究透骨消痛颗粒在膝骨性关节炎治疗中的相关作用机制.方法:新西兰大白兔采用改良Hulth法造模,造模成功后随机分成3组:模型组、对照组、实验组,和正常组共4组,分别灌胃给药4周后处死动物取材,并观测如下指标:关节腔大体观察,滑膜与软骨组织学观察;关节液内NO、NOS、PGE2含量检测,滑膜软骨中iNOS、COX-2含量检测.结果:4周后关节液中NO、NOS含量、PGE2浓度,滑膜和软骨中iNOS、COX-2含量,模型组、对照组、实验组均呈高表达,与正常组比较差异有显著性(P<0.05);对照组、实验组与模型组比较差异有显著性(P<0.05);对照组与实验组比较差异有显著性(P<0.05).结论:透骨消痛颗粒可通过抑制COX-2和iNOS在OA早期滑膜和软骨细胞中的表达及其诱导产物PGE2和NO的生成,从而达到控制OA早期炎症、减轻疼痛、缓解症状的作用.

透骨消痛颗粒对骨性关节炎影响的组织化学研究

目的:探讨透骨消痛颗粒对兔膝骨性关节炎软骨及软骨下骨的影响。方法:取新西兰大白兔36只,雌雄各半,根据改良Hulth法制作骨性关节炎模型,动物随机分成正常对照组、骨性关节炎模型组、透骨消痛颗粒干预组,术后第1、3、6、9、12、15周分批进行取材,采用石蜡切片苏木精-伊红染色、番红-固绿染色、AB-PAS染色和V-G染色,观察膝关节软骨和软骨下骨的变化,以及PCNA免疫组织化学染色观察软骨细胞和成骨细胞的增殖情况。结果:模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理形态变化,软骨基质蛋白多糖尤其是酸性粘多糖减少,软骨和成骨细胞增殖早期较正常组活跃,晚期软骨细胞增殖能力下降;透骨消痛颗粒干预组与模型组相比,组织结构破坏和软骨下骨硬化明显减轻,蛋白多糖的含量增加,细胞增殖较稳定。结论:透骨消痛颗粒对实验性兔膝骨性关节炎软骨和软骨下骨病变均有一定的防治作用,这可能主要与其阻止或减缓OA过程中细胞外基质的降解作用有关。

透骨消痛颗粒对兔骨关节炎模型作用的超微结构研究

目的观察透骨消痛颗粒干预兔骨关节炎模型软骨和软骨下骨的超微结构变化情况,探讨药物对关节微观结构的作用机理。方法 18只新西兰大白兔分3组,模型组与药物组按改良Hulth法建立膝骨关节炎模型。建模后1周药物组以1 g·ml^(-1)透骨消痛颗粒溶液20 ml·d^(-1)灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,持续12周。胫骨标本采用透射电镜观察软骨和软骨下骨超微结构。结果正常组软骨细胞及核椭圆形,常染色质为主,粗面内质网等细胞器发达;骨细胞近梭形,核扁椭圆形,核质比大,异染色质散在;成骨细胞扁长形,见粗面内质网等细胞器,核异染色质散在。模型组软骨细胞及核不规则,固缩变性,异染色质分布不均,细胞器模糊;骨细胞核固缩或不规则,异染色质聚集;成骨细胞呈椭圆形,核不规则,异染色质斑块状多位于核膜下,细胞器较少、模糊。药物组软骨细胞多正常,粗面内质网较发达;骨细胞核近椭圆形,异染色质散在或部分聚集;成骨细胞呈扁长形,核近椭圆形,异染色质散在,粗面内质网可见扩张。结论透骨消痛颗粒能够改善骨关节炎软骨与软骨下骨的超微结构,主要作用表现于细胞核染色质、参与合成细胞外基质成分的粗面内质网等细胞器的变化。

透骨消痛颗粒防治骨性关节炎的计算药效学研究

目的:从分子水平验证透骨消痛颗粒治疗骨性关节炎疗效,为临床用药提供依据。方法:分子对接法和靶-配体空间分布,初步鉴定出透骨消痛颗粒中治疗骨关节炎疾病的有效成分群。结果:透骨消痛颗粒是通过抑制聚蛋白多糖酶的活性、降低骨内压和降低骨性关节炎细胞因子的产生等起作用,其中,有些化合物显示出多重激酶特性。结论:透骨消痛颗粒对骨性关节炎具有潜在的协同作用。

中药在组织工程化骨及软骨组织构建过程中的作用

1透骨消痛颗粒诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化 吴追乐,刘献祥,李西海,李明波,李民,林久茂（福建中医学院骨伤系,福建省福州市350108） 推荐理由：实验证明,骨髓间充质干细胞在骨及软骨组织损伤中的应用能较好地刺激骨及软骨修复再生,

早期膝骨性关节炎NO炎症途径及中药干预的实验研究

目的:探讨NO炎症途径在早期膝关节骨性关节炎中的作用及透骨消痛颗粒对膝骨性关节炎早期NO炎症途径的影响。方法:用改良的Hulth法建立骨关节炎动物模型,随机分为6组,模型组、对照组(壮骨关节丸组)、实验Ⅰ组(透骨消痛颗粒低剂量组)、实验Ⅱ组(透骨消痛颗粒中剂量组)、实验Ⅲ组(透骨消痛颗粒高剂量组)及正常组,4周后行关节腔大体观察、关节软骨和滑模组织学观察、关节滑液NO、NOS活性检测、软骨和滑膜组织中iNOS含量测定。结果:骨性关节炎关节局部表达NO。透骨消痛颗粒具有延缓关节大体形态,透骨消痛颗粒可降低关节液NO、NOS含量,降低关节软骨及滑模iNOS的表达。其中透骨消痛颗粒中剂量组及高剂量组作用更明显,但两者之间比较差异无统计学意义。结论:关节局部NO是引起膝骨性关节炎的重要介质;透骨消痛颗粒可抑制NO炎症途径,缓解软骨细胞的退变和软骨基质的降解,有效改善膝骨性关节炎患者的临床症状。