基于蛋白质组学技术探讨通关藤注射液治疗小鼠肺癌的作用机制

目的:基于蛋白质组学技术研究通关藤注射液对小鼠肺癌组织生长情况及蛋白表达的影响,探究其作用机制。方法:40只BALB/c雄性小鼠,采用腋下接种Lewis肺癌瘤株的方法建立肺癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组和通关藤注射液高、低剂量组,每组10只。分别在给药前及给药后记录小鼠肿瘤生长情况,在给药第21天时处死,眼球取血,取肿瘤组织,称量体积及瘤体质量。通过检测各组小鼠肿瘤大小,计算抑瘤率来评价肿瘤生长情况。取血清样本,采用定量蛋白质组学分析血清中蛋白表达差异的影响,并分析差异蛋白参与的信号通路。结果:与模型组相比,通关藤注射液高剂量和低剂量组肿瘤组织显著减小(P<0.01)。共定量得到6272个蛋白质,给药组与模型组之间有176个差异蛋白(上调59个,下调117个),这些差异蛋白的功能主要为基因表达、细胞生物合成、DNA模板转录等;对差异蛋白富集的信号通路进行分析可知,PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、ErbB信号通路、心肌收缩、志贺菌病、系统性红斑狼疮、胰岛素信号通路、不同环境中的微生物代谢、cAMP信号通路、信使核糖核酸监测通路等通路可能与肿瘤细胞的增殖、存活有密切关系。结论:通关藤注射液抑制肺癌小鼠肿瘤生长的作用机制,可能通过调节关键蛋白影响基因表达、细胞生物合成、DNA模板转录等过程,与PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、ErbB信号通路等通路密切相关。

基于JAK1/STAT3信号通路的通关藤对人骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨通关藤注射液和通关藤提取液对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及潜在机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、Saos-2和人骨髓间充质干细胞(BMSC),分别予通关藤注射液或通关藤提取液(40、60、80 mg/mL)处理,CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Hoechst33342染色和Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测细胞Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达,Western blot检测细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Janus激酶1(JAK1)、p-JAK1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)9蛋白表达。结果与对照组比较,不同浓度通关藤注射液和提取液均能显著降低MNNG/HOS和Saos-2细胞存活率,抑制细胞克隆形成、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),促进细胞BaxmRNA和蛋白表达,抑制Bcl-2mRNA和蛋白表达,上调Caspase-3mRNA和CleavedCaspase-3蛋白表达。通关藤注射液可显著下调Saos-2细胞p-JAK1、p-STAT3、MMP9蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论通关藤注射液和提取液均可显著抑制人骨肉瘤细胞MNNG/HOS和Saos-2增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,二者抗肿瘤作用无明显差异,其机制可能与抑制JAK1/STAT3信号通路激活有关。

通关藤多糖结构表征及生物活性研究

以通关藤为原料,采用超声辅助水提法提取通关藤多糖,研究其结构表征及体外抗氧化、抗肿瘤细胞增殖作用。采用紫外可见分光光度计、离子色谱仪和红外光谱仪对通关藤多糖的结构进行表征,通过自由基清除能力评价通关藤多糖体外抗氧化活性。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度通关藤多糖分别作用于人肝癌细胞HepG224 h、48 h的细胞抑制率。结果显示通关藤多糖的多糖含量为72.83%,由Glc、Gal、Ara、Rha、Xyl、Man、ManA、GalA和GlcA组成,其摩尔比为58.5∶17.8∶17.1∶2.4∶1.2∶0.9∶0.9∶0.6∶0.5;通关藤多糖对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基都具有一定的清除作用,且呈现浓度依赖性。通关藤多糖可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,且呈浓度与时间依赖性。因此,通关藤多糖具有良好的体外抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用,具有潜在的开发应用价值。

通关藤提取物联合化学治疗药物治疗肿瘤的系统评价再评价

目的为通关藤提取物联合化学治疗(简称化疗)药物治疗肿瘤提供科学、可靠的证据支持。方法采用计算机检索PubMed,The Cochrane Library,Web of Science,Embase及中国知网(CNKI)、万方(WanFang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(CBM)、读秀数据库中自建库起至2023年3月13日的有关通关藤提取物联合化疗药物治疗肿瘤的相关文献,由2位研究者独立筛选出符合纳入标准的系统评价/Meta分析,采用多系统评价量表(AMSTAR 2)评价纳入文献的方法学质量,采用推荐分级的评估、制订与评价(GRADE)3.6系统工具对纳入文献的证据进行质量分级。结果共纳入12篇文献。AMSTAR 2量表评价结果显示,低质量1篇,极低质量11篇;GRADE分级结果显示,47项结局指标中,低质量证据9项,极低质量证据38项。与单用化疗药物比较,通关藤提取物联合化疗药物治疗肿瘤在提高临床有效率[OR=1.71,95%CI(1.53,1.91),P<0.00001]和疾病控制率[OR=1.89,95%CI(1.65,2.17),P<0.00001],改善卡氏(KPS)评分[OR=2.78,95%CI(2.39,3.22),P<0.00001],提高CD3+活性[MD=12.34,95%CI(11.63,13.06),P<0.00001]和CD4+活性[MD=9.14,95%CI(6.72,11.56),P<0.00001],降低神经毒性[OR=0.69,95%CI(0.54,0.86),P=0.001],降低白细胞减少[OR=0.46,95%CI(0.40,0.54),P<0.00001],改善恶心呕吐[OR=0.67,95%CI(0.55,0.80),P<0.0001],降低血小板减少[OR=0.52,95%CI(0.44,0.62),P<0.00001]方面的效果均显著更优。结论通关藤提取物联合化疗药物治疗肿瘤有助于提高临床有效率、疾病控制率、CD3+和CD4+活性,改善KPS评分和恶心呕吐,降低神经毒性、白细胞减少、血小板减少等,但因纳入文献的方法学质量与证据质量普遍较低,仍需更多高质量研究进一步证实。

通关藤口服液联合多西他赛-奈达铂方案治疗中晚期食管癌的临床观察

目的探讨通关藤口服液联合多西他赛(docetaxel,DXT)-奈达铂(nedaplatin,NDP)方案治疗中晚期食管癌的临床疗效。方法选取2020年2月至2023年3月中国人民解放军海军军医大学第一附属医院收治的中晚期食管癌患者64例,采用随机数字表法将患者分为化疗组(n=32)和综合组(n=32),化疗组进行DXT-NDP方案化疗,综合组在化疗组治疗方案的基础上给予通关藤口服液,两组均连续治疗2个周期。比较两组临床疗效、中医证候积分、细胞免疫功能、生活质量及毒副反应发生情况。结果综合组的客观缓解率较化疗组高(P<0.05)。治疗后,两组主症、次症及总分的中医证候积分下降,综合组更低(P<0.05)。治疗前、后,两组CD8^(+)T细胞计数差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前相比,治疗后两组CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)及CD3^(+)CD16^(+)CD56^(+)自然杀伤细胞水平升高,治疗后综合组的CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)及CD3^(+)CD16^(+)CD56^(+)自然杀伤细胞水平高于同时间点的化疗组(P<0.05)。治疗后,两组Karnofsky功能状态评分和生活质量评估表评分较治疗前升高,治疗后综合组Karnofsky功能状态评分和生活质量评估表评分高于同时间点的化疗组(P<0.05)。与化疗组相比,综合组Ⅰ+Ⅱ级胃肠道反应和肝肾功能损伤及骨髓抑制的发生率、肝肾功能损伤和胃肠道反应的总发生率均较低(P<0.05)。结论将通关藤口服液联合DXT-NDP方案运用到中晚期食管癌治疗中可显著提高疗效,缓解临床症状,提高机体免疫功能,进而提升患者生活质量,并能减少毒副反应的发生。

通关藤注射液联合化疗治疗晚期食管癌患者对提升治疗效果分析

观察晚期食管癌患者应用通关藤注射液联合化疗的临床治疗效果。方法 选取2020年5月到2023年5月收治的42例晚期食管癌患者资料。分组为:对照组(21例,化疗),观察组(21例,化疗+通关藤注射液)。结果 观察组肿瘤病情缓解率57.14%(12/21),对照组肿瘤缓解率42.86%(9/21),组间比较(P<0.05)。组间肿瘤标志物、凝血功能比较(P<0.05)。结论 晚期食管癌患者在化疗的基础上,给予通关藤注射液治疗,能够有效促进肿瘤缓解,有利于改善凝血功能,降低相关肿瘤标志物指标。

通关藤口服液联合化疗治疗非小细胞肺癌临床研究

目的 观察通关藤口服液联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及对转移侵袭标志物的影响。方法 80例中晚期NSCLC患者随机分为观察组与对照组各40例。对照组接受多西他赛+顺铂化疗方案,观察组加服通关藤口服液。对比两组患者治疗客观缓解率、Karnofsky功能状态(KPS)评分,血清转移侵袭标志物[基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)]水平和不良反应。结果 观察组临床客观缓解率为55.0%(22/40),高于对照组的30.0%(12/40)(P<0.05)。治疗后两组MMP-2、MMP-9、VEGF水平下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组Ⅲ-Ⅳ级中性粒细胞减少、血小板减少、恶心呕吐发生率分别为10.0%(4/40)、5.0%(2/40)和2.5%(1/40),明显低于对照组的30.0%(12/40)、25.0%(10/40)和17.5%(7/40)(P<0.05)。其余指标相近。结论 通关藤口服液联合化疗药物治疗中晚期NSCLC,能够下调血清转移侵袭标志物的表达,提高疗效。

UPLC-MS/MS法同时测定通关藤药材中3种皂苷的含量

目的:建立同时测定通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法,色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18,流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.2 m L/min,柱温为40℃,进样量为5μL,离子源为电喷雾离子源,多反应离子监测模式,正离子扫描,离子源喷射电压为5 500 V,雾化气压力为60 psi,加热气压力为60 psi,帘气压力为20 psi,去溶剂温度为600℃。结果:通关藤苷A、H、I检测质量浓度线性范围分别为0.1~10 ng/m L(r=0.999 7)、0.025~10 ng/m L(r=0.999 5)、0.025~10 ng/m L(r=0.998 9);定量限分别为0.1、0.025、0.025 ng/m L,检测险分别为0.05、0.012 5、0.012 5ng/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4.0%;加样回收率分别为97.67%~99.00%(RSD=0.47%,n=6)、95.00%~101.67%(RSD=2.59%,n=6)、96.67%~103.33%(RSD=2.83%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的同时测定。

HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤中3种皂苷

目的建立HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.中3种皂苷的含有量。方法通关藤70%乙醇提取物的分析采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水(45∶55);检测波长235 nm;体积流量1.0 mL/min;漂移管温度80℃;载气压力3.5 bar(1 bar=100 kPa)。结果通关藤苷G、H、I分别在1.768～5.305μg(r=0.999 2)、3.842～11.526μg(r=0.999 0)、3.026～9.078μg(r=0.999 1)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.60%(RSD=1.86%)、99.88%(RSD=2.49%)、99.08%(RSD=1.14%),不同产地样品中三者含有量有明显差异。结论该方法稳定可靠,可用于通关藤的质量控制。

通关藤化学成分及其细胞毒活性

目的研究通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的化学成分及其细胞毒活性。方法通关藤水提取物采用大孔树脂、硅胶、ODS、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法评价其对肿瘤细胞A549、Bel-7402的细胞毒活性。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为通关藤醇A(1)、12-O-惕各酰基-通关藤苷元A(2)、isoshonanin(3)、caruilignan D(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、通关藤苷元A(7)、白桦脂酸(8)、11-O-异丁酰基-12-O-乙酰基通关藤苷元B-3-O-茯苓二糖苷(9)、通关藤苷H(10)、通关藤苷G(11)、通关藤苷I(12)。化合物1~2、7、10、12能抑制A549、Bel-7402细胞的生长。结论化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3~6为首次从该植物中分离得到。化合物1~2、7、10、12具有细胞毒活性。

通关藤口服液联合化疗治疗中晚期食管癌临床观察

目的 观察通关藤口服液联合化疗治疗中晚期食管癌的疗效、安全性及对细胞免疫功能的影响。方法 选取佳木斯市肿瘤医院2017年6月—2018年6月收治的80例中晚期食管癌患者,随机分为对照组和观察组各40例,对照组予5-氟尿嘧啶(5-FU)+顺铂化疗方案,观察组加用通关藤口服液,治疗3个月。比较两组临床治疗效果及不良反应发生情况,流式细胞仪测定细胞免疫功能(CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(3)^(-)CD_(16)^(+)CD_(56)^(+)、CD+3CD_(16)^(+)CD_(56)^(+))。结果 观察组患者治疗总有效率为75.0%(30/40),显著高于对照组的52.5%(21/40)(P<0.05);观察组CD_(4)^(+)、CD_(3)^(-)CD_(16)^(+)CD_(56)^(+)细胞亚群比例及CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)比值较高(P<0.05)。观察组白细胞减少、血小板减少和恶心呕吐发生率分别为50.0%(20/40)、42.5%(17/40)和32.5%(13/40),均低于对照组的72.5%(29/40)、65.0%(26/40)和57.5%(23/40)(P<0.05)。结论 通关藤口服液联合化疗治疗中晚期食管癌的疗效确切,可以提高治疗有效率、改善细胞免疫功能,降低化疗不良反应。

通关藤抗结直肠癌活性及作用机制研究进展

通关藤是萝藦科属植物通关藤的干燥藤茎,具有较高的药理活性。研究显示,通关藤成分多样,并且其部分成分在抗肿瘤方面具有良好的药用价值。在近几年的研究中发现,通关藤在抗结直肠癌的治疗中,可通过阻滞肿瘤细胞周期、抑制肿瘤细胞迁移、促进肿瘤细胞凋亡、免疫调节、抑制肿瘤血管生成以及逆转肿瘤细胞耐药性等作用机制,发挥抗结直肠癌活性,从而改善结直肠癌患者的临床治疗效果。另外,通关藤提取物及制剂已在临床中广泛应用,具有较大的开发潜力。本文将从活性成分、药理和临床展望等方面,对通关藤提取物抗结直肠癌活性及作用机制进行综述,旨在为通关藤抗结直肠癌的开发利用提供理论依据。

通关藤口服液联合化疗药物治疗非小细胞肺癌临床疗效观察

目的观察通关藤口服液联合化疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效。方法86例NSCLC患者随机分为对照组43例和治疗组43例,对照组予常规化疗方案,治疗组加用通关藤口服液。比较两组客观缓解率、肺部肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)]、生活质量核心问卷(EORTC QLQ-C30量表)和不良反应。结果治疗组患者临床控制率为86.0%(37/43),高于对照组的62.8%(27/43)(P<0.05)。治疗后,治疗组血清CEA、CYFRA21-1、CA125水平,中性粒细胞减少、血小板减少、恶心呕吐发生率均低于对照组(P<0.05);EORTC QLQ-C30量表中恶心呕吐、疼痛、总体健康状况评分优于对照组(P<0.05)。结论通关藤口服液可以提高化疗治疗中晚期NSCLC的疗效,改善生活质量,降低化疗不良反应。

基于网络药理学探讨通关藤抗肝细胞癌的作用机制

目的 通过生物信息学、网络药理学和分子对接技术研究通关藤治疗肝细胞癌(HCC)的作用机制。方法 通过文献检索和ADME平台筛选通关藤活性成分并利用Swiss Target Prediction预测化合物的作用靶点;从GEO数据库获得HCC数据芯片GSE147888并筛选表达差异显著基因;通过Genecards和OMIM数据库获得HCC疾病相关靶点;Venny在线对上述靶点取交集。利用Cytoscape软件和String数据库构建药物成分-靶点网络图和PPI网络图;利用R软件进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;利用GEPIA数据库对靶基因进行生存分析,筛选在HCC生存率中显著差异表达的基因,并用Proteinatlas数据库分析基因在HCC组织中免疫组化表达情况;将排名前5的靶蛋白与对应药物活性成分进行分子对接验证。结果 共筛选通关藤活性成分50个,药物与疾病交集靶基因12个。通关藤治疗HCC的重要成分有野黄芩素四甲醚、通关苷元、芥子酸、苦绳苷元、山奈酚等,关键基因有JUN、MMP9、PTGS2等。GO、KEGG分析结果显示,关键靶点主要涉及基因沉默调节、炎症反应调节等过程,主要富集在IL-17、TNF等信号通路。生存分析显示ESR1、MMP1、MMP9、JUN、PPARG在高低风险组之间有显著差异。免疫组化结果显示ESR1和MMP9在正常组织和肝癌组织中差异表达。分子对接结果验证了药物活性成分与靶蛋白可稳定结合。结论 研究体现了中草药通关藤治疗HCC的多成分、多靶点、多通路的特点,为通关藤在HCC的临床应用中提供科学依据。

通关藤中新C_（21）－甾体甙的化学结构研究

从通关藤（Ｍａｒｓｄｅｎｉａｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ（Ｒｏｘｂ．）ＷｉｇｈｔｅｔＡｒｎ）中分得多个Ｃ_（２１），甾体甙类化合物。通过ＦＡＢＭＳ、￣１ＨＮＭＲ、￣（１３）ＣＮＭＲ、￣１Ｈ－￣１ＨＣＯＳＹ、ＬＳＰＤ、ＴＯＣＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ等光谱分析，确定了其中３个新化合物的化学结构。

不同产地通关藤药材中总皂苷与通关藤苷B的含量比较

目的考察不同产地通关藤药材中总皂苷及通关藤苷B的含量。方法以通关藤苷B为对照品,分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定总皂苷和通关藤苷B的含量,并对测定方法进行了系统的方法学考察。结果广西、四川、湖北等地通关藤药材中总皂苷平均含量分别为5.7%,5.3%,4.8%;通关藤苷B平均含量分别为0.22%,0.27%,0.20%。结论广西产通关藤药材中总皂苷含量较高,四川产通关藤药材中通关藤苷B的含量较高。

HPLC测定通关藤药材及消癌平片中通关藤苷A含量

目的建立通关藤药材及消癌平片中通关藤苷A的高效液相色谱含量测定方法。方法色谱柱:SinochromODS-BP分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(41∶59);检测波长:230 nm。结果通关藤苷A在0.996～19.92μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,r=0.999 95,平均加样回收率为96.6%,RSD=2.19%(n=6)。结论本方法操作简单,结果准确,稳定性和重复性好,可用于通关藤药材及消癌平片的含量测定及质量控制。

高效液相色谱-质谱联用法测定消癌平片中通关藤苷A、H、I含量

目的 建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定消癌平片中的通关藤苷A、H和I的含量。方法 采用Phenomenex KinetexXB-C18色谱柱,以0.1%甲酸∶乙腈为流动相,线性梯度洗脱,通过电喷雾离子源,多反应监测(MRM),正离子模式。结果 通关藤苷A、H、I质量浓度线性范围分别为0.1~10.0ng/ml(R=0.9997)、0.025~10.0ng/ml(R=0.9995)、0.025~10.0ng/ml(R=0.9989);平均加样回收率分别为97.71%、98.93%和98.92%,RSD分别为1.70%、0.58%和0.49%。消癌平片中通关藤苷A、H、I含量分别为620.33~622.00、310.67~311.33、377.33~379.33μg/g。结论 UPLC-MS/MS方法快速、准确、灵敏,可用于消癌平片中通关藤苷A、H、I的含量测定。

HPLC法同时测定不同产地通关藤中通关藤苷GIH的含量

目的采用HPLC法同时测定不同产地通关藤中通关藤苷G、I、H的含量。方法色谱柱为资生堂MG-C18(3.0mm×100mm,3.0μm),流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液(40∶60,V/V),流速:0.5 ml·min-1,波长:230nm,柱温:25℃,进样量:5μl,外标法定量。结果 3种通关藤苷在25min内基线分离,方法学验证表明,线性关系良好(r>0.9999),日内日间精密度均小于2.0%,回收率在98%~102%,稳定性和重复性RSD也均小于2.0%,符合方法学要求。结论本方法测定了云南、贵州、广西、四川4个产地中3种通关藤苷的含量,快速简便,可为不同产地通关藤药材的质量控制提供参考依据,也为后期开展药材中通关藤苷类有效成分的体内代谢及药动学研究奠定了良好的基础。

不同产地通关藤中总皂苷的含量测定

目的:建立了以通关藤苷D为对照,采用比色法测定通关藤中总皂苷含量的方法,比较了不同产地通关藤药材中总皂苷的含量,为通关藤药材的质量控制提供依据。方法:以通关藤苷D作为对照品,采用香草醛-高氯酸法显色,在462nm处测定通关藤中总皂苷的含量,并对其方法学进行系统考察。结果:本品在16.08μg～160.8μg范围内吸光度与含量成良好的线性关系,r=0.9993(n=5),重复性良好,回收率RSD小于3%(n=6)。结论:此方法稳定可靠、重复性好,可控制药材质量,且其4个不同产地通关藤中云南的总皂苷含量为最高,这与云南为通关藤地道药材相一致。