通用型辅助性T细胞表位增强了猪瘟病毒合成肽抗原的免疫原性

为了探讨通用型辅助性T细胞表位对猪瘟病毒人工合成短肽抗原免疫原性的影响,本研究合成了含有猪瘟病毒E2蛋白线性中和表位的短肽B,合成了含有通用型辅助性T细胞表位的短肽Th-B。同时,为了探讨免疫刺激基序对人工合成短肽抗原免疫原性的影响,合成了含有免疫刺激序列的IS-Th-B。将上述3种合成肽与弗氏佐剂混合乳化后,免疫兔子,比较3种不同的抗原肽诱导的抗体水平,并用猪瘟弱毒对免疫兔子进行攻击,比较抗原肽的免疫保护效果。结果显示,Th-B和IS-Th-B诱导了相当的抗体水平,但显著高于抗原肽B诱导的抗体水平。Th-B和IS-Th-B免疫延迟但没有阻止兔定型热的产生,而抗原肽B免疫兔和未免疫兔一样发生了明显的定型热反应。本研究表明,免疫刺激基序对本研究中的短肽诱导的抗体应答没有产生明显影响,但通用型辅助性T细胞表位增强了短肽抗原的免疫原性。

原发性肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位预测

目的预测原发性肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法通过国家生物技术信息中心(NCBI)数据库获取GPC-3蛋白的氨基酸序列,利用超基序、量化基序法和NetCTL数据库预测分析GPC-3的HLA-A2限制性CTL表位。结果初步筛选出GPC-3肿瘤抗原的HLA-A2限制性CTL优势表位,分别为GPC-3 102～110,155～163,169～177,229～237,281～289,319～327,326～334,367～375,522～530,564～572。结论预测出GPC-3的HLA-A2限制性CTL表位为GPC-3阳性原发性肝癌免疫靶向治疗奠定了基础。

用辅助性T细胞表位增强猪带绦虫DNA疫苗的免疫保护反应

在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的 3个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入 1个通用型辅助性T淋巴细胞表位、2个谷胱甘肽还原酶的辅助性T淋巴细胞表位 (TGG) ,构建成DNA疫苗。通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠和仔猪。动物试验结果表明 ,TGG表位可提高小鼠血清 pCC2 7抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪获得了 89%的保护率。

辅助性T细胞表位预测

辅助性T细胞表位是由十几个连续的氨基酸残基构成的特殊肽段 ,在体液与细胞免疫中有重大作用。本文回顾了辅助性T细胞表位预测的原理与方法 ;

信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导免疫应答的初步研究

目的 研究信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导的免疫应答。方法 在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的三个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入人IL - 2信号肽、一个通用型辅助性T淋巴细胞表位 ,谷胱甘肽还原酶的T和B淋巴细胞表位 (TGG) ,经pGEX4T - 2表达鉴定 ,序列分析后构建成DNA疫苗 ,通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠。结果 这种含辅助表位的DNA疫苗诱导的免疫应答效果明显超过对照组 ,对绦虫卵攻击的保护率为 90 %。结论 构建了含绦虫融合抗原 pCC2 7及TGG的核酸疫苗 ,动物试验结果表明 ,TGG表位既可提高IgG、IgG1、IgG2a的水平 ,又进一步增强Th1和Th2细胞间的平衡关系。免疫小鼠对绦虫卵的攻击具有很好的保护作用。

辅助性T细胞表位HBV表面抗原融合基因真核表达质粒的构建

为提高HBVDNA疫苗的免疫效率,将一个通用型辅助性T细胞表位基因引入HBV表面抗原基因的5’末端,构建成真核表达质粒。PCR方法合成PADRE-HBsAg目的基因,产物与pMD18T载体连接,经HindⅢ,EcoRI双酶切,再克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。酶切及测序鉴定,该真核表达载体构建成功,为进一步观察其特异性细胞和体液免疫反应奠定了基础。

HLA-A^＊0201限制性CTL表位肽的三维定量构效关系的研究

运用比较分子力场 (CoMFA)和比较分子相似性指数分析 (CoMSIA)方法研究了 5 0个HLA A 0 2 0 1限制性CTL表位九肽结构与亲和性间的关系 ,另外 15个表位九肽作为预测集用于检验模型的预测能力 .结果表明采用CoMSIA得到的构效关系模型 (q2 =0 .62 8,r2 =0 .997,F =840 .419)要明显优于采用CoMFA得到的构效关系模型 .在CoMSIA计算中 ,当引入疏水场时 ,三维构效关系模型得到明显改善 ,通过该三维构效关系模型 ,可较精确地估算预测集中 15个CTL表位肽与HLA A 0 2 0 1间的亲和力 (r2pred=0 .743 ) .通过分析分子场等值面图在空间的分布 ,可以观察到表位肽分子周围的立体及疏水特征对表位肽与HLA A 0 2 0 1间结合亲和力的影响 ,从而为进一步对CTL表位肽进行结构改造并基于此进行治疗性疫苗分子设计提供理论基础 .

金黄色葡萄球菌FnbpA的CD4^+ T细胞表位鉴定

金黄色葡萄球菌(S.aureus)表达的菌体表面纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)在感染早期与宿主细胞粘附过程中起关键作用,将其免疫小鼠后能够诱导机体产生强烈的Th1和Th17反应。但FnbpA诱导Th1和Th17反应的CD4^+ T细胞表位尚不清楚。本研究根据FnbpA二级结构及其与MHCⅡ分子的结合能力对CD4^+ T细胞表位进行预测与分析,选择并合成7个候选CD4^+ T细胞表位肽。将每个表位肽分别对FnbpA免疫的C57BL/6小鼠CD4^+ T细胞进行体外刺激,通过检测CD4^+ T细胞增殖及其分泌的细胞因子水平对免疫优势表位进行初步鉴定。再以初步鉴定的优势表位肽段免疫小鼠,并检测其诱导的特异性细胞免疫应答水平。结果表明,表位肽F5(FnbpA488-505)能够显著诱导CD4^+ T细胞增殖并分泌高水平IFN-γ和IL-17A,而且F5在不同S.aureus菌株中高度保守。表明FnbpA_(488-505)是诱导CD4^+ T细胞分化为Th1/Th17的T细胞表位。本研究为S.aureus的FnbpA表位肽疫苗的进一步设计提供了实验依据。

卵巢子宫内膜异位囊肿患者血清及腹腔液中Th1/Th2细胞因子、IL-37、HE4表达及其临床意义

目的:探讨卵巢子宫内膜异位囊肿(OEM)患者血清及腹腔液中辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)细胞因子、白细胞介素-37(IL-37)、人附睾分泌蛋白4(HE4)表达及其临床意义。方法:选择2017年1月-2020年10月行腹腔镜手术治疗的OEM患者102例为OEM组,同期因输卵管阻塞行腹腔镜检查术且盆腔结果正常的患者68例为对照组。检测两组血清与腹腔液中Th1/Th2细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-37、HE4水平。结果:OEM组血清IFN-γ、IFN-γ/IL-4低于对照组,IL-4、IL-6、IL-37、HE4高于对照组,腹腔液IFN-γ、IL-2、IFN-γ/IL-4低于对照组,IL-4、IL-6、IL-37、HE4水平高于对照组(均P<0.05)。分期高的OEM患者的血清及腹腔液IFN-γ、IL-2、IFN-γ/IL-4均低于分期早期患者,IL-4、IL-6、IL-37、HE4水平均高于早期患者(均P<0.05)。结论:OEM患者血清及腹腔液中Th1细胞因子低表达而Th2细胞因子、IL-37、HE4高表达,且随OEM疾病分期升高变化增大;Th1/Th2细胞因子失衡及IL-37、HE4过表达可能参与了OEM的发生发展。

扩散性抗原决定簇特异性Th2/Tr1细胞被动免疫治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的研究

目的 :研究用扩散性抗原决定簇特异性Th2 /Tr1细胞被动免疫治疗实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的有效性和可能性。方法 :应用髓鞘蛋白脂质蛋白 (PLP) 139 15 1诱发EAE小鼠模型 ,通过转染方式建立具有高效表达IL 10特性的抗原特异性Th2 /Tr1样T细胞系 ,在EAE小鼠发病 6d后给予静脉注射。小鼠每天称体重并进行神经功能评分。实验结束时 ,取脊髓进行PLP免疫组化染色 ,应用数字化图像分析技术进行图像分析。结果 :注射扩散性抗原决定簇MBP87 99特异性Th2 /Tr1样T细胞的治疗组小鼠的临床评分明显改善 ,并伴有复发率的下降、首次复发时间的延迟 (P <0 0 5 )。PLP免疫组化染色的图像分析结果显示 ,接受MBP87 99特异性Th2 /Tr1样T细胞治疗组小鼠脊髓内PLP像素水平为正常值的 94 37%± 0 5 2 %,而对照组小鼠为正常PLP水平的 91 94%± 0 5 0 %(P <0 0 0 1) ,与对照组比较 ,治疗组小鼠脊髓内脱髓鞘病变下降 30 %。结论 :扩散性抗原决定簇特异性Th2 /Tr1细胞被动免疫治疗可明显减少脱髓鞘病变 ,改善EAE的临床症状 ,为多发性硬化的免疫治疗提供了理论依据。

T辅助细胞在疫苗研制中的作用(英文)

发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注 ,其意义在于 ,已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减毒的活疫苗要安全并且相对而言比制造亚单位疫苗要容易。然而 ,多肽疫苗的发展面临巨大挑战。这一方法在诱导遗传背景复杂的人群免疫反应方面受到限制 ,这与主要组织相溶性复合物 (MHC)多态性有关。因同样的理由 ,肽类免疫应答常因缺乏适当的辅助T淋巴细胞 (HTL)而引导出不充分的细胞毒素T淋巴细胞 (CTL)和抗体反应。另一个运用线性肽链结构的可能缺点是 :为了引导出合适抗体反应 ,表面免疫球蛋白受体簇对于激活静息的B细胞就成为必须因素。由MHC多肽性引起的问题可由运用不加区别的T细胞表位来解决。从麻疹病毒F蛋白 (氨基酸 2 88到 30 2 )中得到的不加区别的T细胞表位和鼠的确定结合在多种MHC分子上的辅助T细胞表位 (V1EB ,aa 191- 2 0 9)已被定性并且被用于能极大激发免疫应答的结构中 ,以克服单一限制型免疫应答的缺陷。合成的 ,非自然PanDR表位 (PADRE)具有退化的结合几种通常HLA DR的能力 ,能以绝对效价和抗体反应质量两种形式来增强激发短肽链的免疫应答。另外 ,?

外源辅助T淋巴细胞表位影响HBVS基因DNA免疫的体液免疫应答

目的 探讨外源辅助T淋巴细胞 (HTL)表位对HBVS基因体液免疫应答的影响。方法选用 2种通用HTL表位 ,破伤风类毒素的氨基酸残基 (aa) 830 843片段 (TTE)和人工HTL表位(PADRE) ,以及 3种特异性HTL表位 ,结核杆菌热休克蛋白 6 5的aa1 2 0片段 (TBE)、风疹蛋白E2 4的aa5 4 6 5片段 (ME)和沙眼衣原体热休克蛋白 6 0的aa35 48片段 (CE) ,以单个表位或复合表位形式插入HBVS基因的翻译起始密码下游而构建成真核表达载体。 10 0 μg重组载体DNA免疫BALB/c小鼠 ,3周加强 1次 ,共 3次 ,第三次加强接种后 1月取血采用Abbott试剂盒检测抗 HBs。结果 HBVS基因真核表达载体pHB和 6种外源HTL表位HBVS基因真核表达载体pHB TBE、pHB PADRE、pHB TTE、pHB MTE2、pHB MTE3和pHB MTE5构建成功 ,DNA免疫的抗 HBs水平 (IU/L)分别为 10± 5 ,5± 5 ,49±7,2 9± 6 ,16± 8,2 3± 7和 2 8± 8。单个表位中 ,TTE和PADRE具有良好的免疫促进作用 ,而TBE无促进作用。复合表位均有不同程度的免疫增强作用。结论 部分外源HTL表位对HBVS基因的体液免疫应答有促进作用 ,复合表位中的单个表位间的促进作用无协同或迭加效果。表位PADRE可能用于新型高效乙肝疫苗的研制 。

PADRE-TGFβ1融合蛋白的原核表达及鉴定

构建PADRE-TGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及TGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-TGFβ1序列,合成产物克隆至pET-28a(+)质粒。将构建好的质粒转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在约19.87 ku处出现与预期目的蛋白一致的新蛋白条带,Western blot鉴定结果显示,该蛋白能够与TGFβ1抗体发生特异性结合。表明成功构建了pET28-PADRE-TGFβ1原核表达质粒,表达的融合蛋白质具有TGFβ1的反应原性,为TGFβ1自体疫苗的制备及应用奠定了基础。

表没食子儿茶素没食子酸酯对肥胖型哮喘小鼠气道炎症和Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肥胖型哮喘小鼠调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17 (Treg/Th17)免疫失衡的调节作用,为EGCG治疗肥胖型哮喘提供依据。方法:40只C57BL/6J小鼠分为正常对照组(采用正常饲料喂养)、肥胖组(采用高脂饲料喂养)、肥胖型哮喘组[采用高脂饲料喂养的同时给予卵白蛋白(OVA)致敏和激发,制备肥胖型哮喘模型],EGCG干预组(在OVA激发前1h给予20mg·kg^-1 EGCG腹腔注射)和地塞米松干预组(在OVA激发前1h给予2mg·kg^-1地塞米松腹腔注射),每组8只。采用无创肺功能仪测定各组小鼠的增强呼气间歇(Penh)值;HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,HE染色切片半定量方法进行小鼠气道炎症评分;ELISA法检测各组小鼠血清中脂联素、瘦素和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素10 (IL-10)、白细胞介素17A (IL-17A)水平;流式细胞术检测各组小鼠脾组织中Th17和Treg百分比。结果:肥胖组小鼠体质量高于正常对照组(P<0.05),为正常对照组小鼠平均体质量的1.67倍。与正常对照组比较,肥胖型哮喘组小鼠Penh值和气道炎症评分均升高(P<0.05),血清中瘦素水平升高(P<0.05),BALF中IL-17A水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),脾组织中Th17百分比升高(P<0.05),Treg百分比降低(P<0.05)。与肥胖型哮喘组比较,EGCG干预组小鼠Penh值和气道炎症评分均降低(P<0.05),血清中瘦素水平降低(P<0.05),BALF中IL-17A水平降低(P<0.05),BALF中IL-10水平升高(P<0.05),脾组织中Th17百分比降低(P<0.05),脾组织中Treg百分比升高(P<0.05)。结论:在肥胖型哮喘小鼠中存在Treg/Th17免疫失衡,EGCG能够抑制肥胖型哮喘小鼠的气道炎症及气道高反应性,能够改善Treg/Th17免疫失衡。

T细胞表位对新型冠状病毒疫苗诱导抗体反应的影响

目的通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位(pan HLA DR-binding epitope,PADRE)融合的DNA疫苗,探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒(pJW4303-S1)、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒(pJW4303-S1-PADRE)。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物,PCR扩增获得基因片段,并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切,产物通过琼脂糖凝胶电泳验证,并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293T细胞,Western blot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组,采用不同的免疫接种策略进行动物免疫,每次免疫间隔2周,免疫前采血,第6次免疫2周后处死小鼠并采血。通过ELISA检测不同免疫策略诱导的针对SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)的特异性抗体水平及其亲和力指数。结果PCR扩增和酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果及质粒测序结果表明质粒构建成功;Western blot结果表明这2个质粒可以在体外稳定表达S1蛋白、S1融合PADRE蛋白;ELISA结果显示,pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE单次免疫均可以诱导产生明显的针对RBD的抗体水平(P<0.0001,P=0.0034)。不同的免疫策略在进行6次免疫后,针对RBD的特异性抗体水平在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。抗体亲和力检测结果显示,第6次免疫后不同免疫策略诱导的针对RBD的抗体亲和力指数差异也无统计学意义(P>0.05)。结论pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE均具有较强的体液免疫原性,但PADRE不能进一步提高S1蛋白DNA疫苗的体液免疫原性。

T_H细胞在记忆性CTL介导的肿瘤抑制中的作用研究

目的 观察记忆性CTL的抑瘤作用是否需要抗原特异性TH 细胞的辅助。方法 表达OVAT细胞表位SIINFEKL特异性TCR的T细胞转输RAG- - 小鼠,经相应T细胞表位多肽刺激后产生记忆性CTL ,将此记忆性CTL转输已产生特异性和非特异性TH 细胞的C5 7BL 6小鼠体内并接种肿瘤细胞EG7。结果 经T细胞表位多肽免疫后,SIINFEKL特异性TCRT细胞成功在RAG- - 小鼠体内增殖并分化为记忆性CTL ;抗原特异性TH 细胞可辅助产生较多效应性CTL但并没有完全的肿瘤抑制作用;记忆性CTL的完全抑瘤活性需要抗原特异性TH 细胞的辅助。结论 机体对肿瘤的长期完全杀伤作用不但需要肿瘤特异性抗原诱导产生的记忆性CTL ,而且需要特异性TH 细胞的辅助,肿瘤疫苗的设计必须包括特异性的CTL表位多肽和辅助性TH 细胞多肽。

阿尔茨海默病多肽表位疫苗免疫原性研究

目的以淀粉样蛋白Aβ作为免疫靶标,优化阿尔茨海默病多肽B细胞表位疫苗。方法化学合成人Aβ1-42多肽、含B细胞表位的Aβ1-15多肽、含两个B细胞表位及一个辅助T细胞表位PADRE的多肽Aβ(1-15)2-PADRE及含13个氨基酸的PADRE。以上4种多肽免疫普通BALB/c小鼠,ELISA试验比较免疫后的小鼠血清抗体水平和亚型,点杂交分析其与不同状态Aβ的结合免疫特性。结果 Aβ(1-15)2-PADRE组免疫后诱导产生了良好的免疫效果,100μg组4次免疫后其抗体滴度可以达到1∶3500;抗体亚型分析后得知,其主要产生IgG1型抗体,免疫反应完全偏向于Th2型,其免疫血清可与不同状态Aβ的结合免疫特性不同。结论辅助T细胞表位PADRE增强了B细胞表位Aβ1-15的免疫效果,并且其免疫血清抗体与Aβ寡聚体结合效果更好。

CD4^+CD25^+Treg细胞延长大鼠肾移植术后存活时间的量效关系分析

目的观察肾移植受者(Wistar大鼠)应用供者(SD大鼠)抗原特异性CD4^+CD25^+免疫调节性T细胞(CD4^+ CD25^+ Treg细胞)对移植肾存活时间的影响,为CD4^+CD25^+Treg细胞在体内应用提供定量分析依据。方法SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,建立同种肾移植动物模型;免疫磁珠(MACS)法分选Wistar大鼠脾脏CD4^+CD25^+T细胞,检测CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞的纯度,并诱导其对SD大鼠供者抗原的特异性表型;根据在肾移植术中经受者尾静脉注射不同数量(2×10~5、5×10~5、1×10~6、2×10~6)的供者抗原特异性CD4^+CD25^+T细胞分为:实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,并以未注射组作为对照。术后观察移植肾的存活时间;监测血肌酐(Cr)的水平;按照Banff Schema标准进行移植肾病理诊断,并根据Watanabe的方法进行半定量评分。结果肾移植术后实验Ⅲ组平均存活时间最长,为(31.4±4.6)d,对照组平均存活时间最短.为(11.7±6.2)d;各实验组与对照组间血Cr检测结果比较,差异均有统计学意义(P<0.05);实验Ⅲ组和Ⅳ组不同时段的移植肾病理检查半定量评分结果与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论初步证实在受者体内应用适当数量的供者抗原特异性CD4^+CD25^+Treg细胞,能够改善移植肾的功能,有效延长大鼠肾移植术后的存活时间。

环孢素A在眼表移植和角膜炎症中的应用

目的 探讨环孢素A (CyclosporineA ,CsA)在眼表移植手术和炎症性疾病中的疗效和相关影响因素。方法 通过10 6眼眼表手术(羊膜贴敷71眼、穿透性角膜移植2 0眼、指环形/全角膜上皮移植15眼)的术后用药和32眼角膜炎症性疾患(干燥性角结膜炎8例16眼、蚕蚀性角膜溃疡3例4眼、单疱角膜基质炎2例2眼、表层点状角膜病变7例10眼)的系统治疗观察,对临床疗效作回顾性研究。用药途径:穿透性角膜移植和指环形/全角膜上皮移植病例,术后口服CsA6w～8w ,联合局部0 . 5 %CsA滴眼剂3次～4次/d ,持续用药8m～12m ;羊膜贴敷者仅在术后0 . 5 %CsA滴眼剂3次/d ,持续用药8m～12m ;角膜炎症性病例中蚕蚀性角膜溃疡4眼中3眼采用病灶切除后羊膜贴敷联合局部用药,1眼单用0 . 5 %CsA局部滴眼;其他病例按病种不同,分别应用0 . 1%～0 . 5 %CsA局部滴眼3～4次/d联合相关对因治疗。结果 135眼治疗者中有12 8眼随访6m～36m ,7眼为新近观察病例,仅随访3m～6m。35眼穿透性角膜移植和指环形/全角膜上皮移植术中,仅3眼因移植排斥致角膜血管化,32眼透明愈合,获得91. 4 %的移植成功率;所有重症烧伤羊膜贴敷患者,术后眼表重新上皮化且未遗留睑球粘连。70 %以上病例瞳孔区角膜维持透明而重获有用视力;角膜炎症性疾病中,4眼蚕蚀性溃疡随访2