植物DNA提取方法的研究进展

随着分子生物学的快速发展,植物DNA提取技术在植物科学研究、农业生产、环境保护和法医物证学等领域发挥着至关重要的作用。传统方法如CTAB法、SDS法和高盐低pH法,虽然在提取效率和纯度方面取得了一定的成功,但存在操作繁琐、耗时长、试剂对人体有害等问题。为了克服这些问题,研究者开发了一系列快速、高效的提取方法,如微针贴片法、纤维素滤纸法、EZ-D法和碱裂解法。这些方法在提高提取速度和纯度的同时,减少了对环境和操作人员的影响。本文总结了植物DNA提取的传统方法和近年来发展起来的快速提取新技术的优缺点。

柿属植物基因组DNA提取方法比较

针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。

两种提取人参水煎液miRNA方法的比较

目的筛选获取新鲜人参水煎液中高质量miRNA的提取方法。方法选择改良Trizol法和通用植物miRNA提取试剂盒法提取新鲜人参水煎液miRNA,所得miRNA经DNaseⅠ处理后进行琼脂糖凝胶电泳和Agilent 2100生物分析仪检测,比较两种方法所得miRNA的纯度和质量。结果改良Trizol法步骤简单、快捷省时、成功率较高但纯度较低;通用植物miRNA提取试剂盒法步骤较多耗时较长,但miRNA纯度高质量好。结论通用植物miRNA提取试剂盒法更适用于提取人参水煎液中miRNA,提取的miRNA完整性好、纯度高,可以满足荧光定量PCR、建库测序等后续研究的需要。

石斛属植物茎部总RNA提取方法的研究

获得快速提取高质量石斛属植物茎总RNA的方法,为深入开展分子生物学研究奠定基础。采用7种方法提取铁皮石斛茎总RNA,凝胶电泳和紫外分光光度法检测质量,筛选最佳方法,并对方法进行验证。结果显示,经过比较,用改良华越洋多糖多酚试剂盒法(M7)提取的铁皮石斛茎总RNA的完整性、浓度和纯度均最好。用M7提取铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、球花石斛和重唇石斛的茎总RNA,以及提取不同生长条件(温室和大棚种植)和不同生长时间(大棚生长3个月、1年和2年)铁皮石斛的茎总RNA,所获样品的完整性、浓度和纯度均符合质量要求。M7操作简便,结果重复性好,适于石斛属植物茎总RNA的提取。

快速提取细菌DNA方法的研究

目的:研究快速、有效可以应用于压电基因传感器对病原微生物的快速检测的DNA的提取方法。方法:采用沸水浴法,酚、氯仿法,chelex1 0 0法和试剂盒法提取金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3、铜绿假单胞菌ATCC 2 785 3和大肠杆菌ATCC 2 5 92 2的DNA对产物进行纯度和产量测定,并对1 6SrDNA区域利用通用引物进行扩增。初步应用自行研制的压电基因传感器检测金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3的PCR产物。结果:除沸水浴法,其他3种方法均能抽提出3种细菌的DNA与1 0 0法和酚、氯仿法抽提产物的纯度和产量差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但chelex1 0 0法操作更为简单、成本低;试剂盒法抽提出的产物纯度和产量明显高于酚、氯仿法、chelex1 0 0法P <0 . 0 5 ) ,但成本高,操作繁琐。结论:chelex1 0 0法操作简便、省时、成本低,适宜用于压电传感器样本的预处理。

三种方法提取不同品种梨叶片总RNA

为筛选出提取梨叶片总RNA的最佳方法,以梨极矮化突变体和苹果梨为材料,采用柱式植物RNAout试剂盒、SDS法和改良CTAB法提取其叶片总RNA并比较提取效果。结果表明,改良CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA,其28 S rRNA条带亮度高于18 S rRNA,所提取的RNA适合下一步的研究使用。

红花花冠总RNA提取方法的筛选研究

筛选一种红花花冠总RNA提取方法。采用植物总RNA提取试剂盒法、传统佰烈法、改良Trizol法提取红花花冠总RNA。凝胶电泳、RT-PCR、紫外分光光度法检测三种方法提取所得总RNA，并将筛选得到的方法应用于红花愈伤组织总RNA的提取。改良Trizol法提取得到的红花花冠总RNA凝胶电泳检测可见清晰的三条带，RT-PCR结果凝胶电泳检测可见清晰的一条带，紫外分光光度法检测符合要求，其余两种方法均不符合要求。改良Trizol法应用于红花愈伤组织总RNA提取，检测结果均符合要求。改良Trizol法可用于红花花冠总RNA提取，提取所得红花花冠总RNA可用于后续分子生物学实验。

大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .

三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究

草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的DNA片段,用CTAB试剂盒提取的DNA质量最高,改良SDS法提取的DNA质量较低。将不同方法提取的DNA经过PCR反应特异性检测SVBV后,将与目的片段大小一致的PCR扩增产物经序列测定及分析,证明与SVBV的序列相吻合,证明了方法的可靠性,其质量能够满足PCR特异性检测需要。

绿绒蒿属植物不同DNA提取方式的比较

以绿绒蒿属(Meconpsis Vig.)3种植物叶片为试材,采用研钵手动研磨和电动匀浆马达研磨器2种研磨方式处理叶片,采用改良的CTAB法、国产天根试剂盒、德国Qiagen试剂盒法3种提取方式从绿绒蒿属植物叶片中提取DNA,研究了不同提取方式对绿绒蒿属植物DNA提取效果的影响,以期为绿绒蒿属植物的分子遗传学研究奠定基础。结果表明:几种不同提取方法均能获得较为完整的DNA,研钵手动研磨的植物叶片提取的DNA无论是从质量、纯度还是得率均好于电动匀浆马达研磨器研磨。3种提取方式提取的DNA均可直接用于下游PCR反应,改良的CTAB法提取的DNA纯度和得率均很高;天根试剂盒法和Qiagen试剂盒法提取的DNA得率不高;Qiagen提取的DNA纯度和质量均比较好,但成本较高。

不同方法提取新疆红肉苹果RNA差异研究

使用生工柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒、Trnzol法以及改良CTAB 3种方法,提取红肉苹果克孜阿尔玛的果肉、果皮、花瓣、叶片中的总RNA,并对比这3种方法提取RNA的产量、质量以及完整性。结果表明,由Trnzol方法提取所获得的RNA纯度较低,有降解现象,且有DNA、蛋白质的污染,果肉和果皮RNA的产量也并不理想;而用改良CTAB法和生工试剂盒法提取的RNA较少降解,所得28 S rRNA和18 S rRNA条带较为清晰,花瓣和叶片的OD260/280均在2以上,生工试剂盒法提取的RNA产量高,OD260/280和OD260/230比值均在1.8~2.5,条带的完整性好。3种方法比较而言,改良CTAB法和Tr Nzol法提取的RNA条带的清晰度、产量及质量都低于生工试剂盒法。

绿绒蒿属植物不同RNA提取方式的比较分析

提取分离绿绒蒿属植物高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础。通过采用研钵手动研磨的研磨方式处理叶片,采用Trizol法,OMAG试剂盒法,国产天根试剂盒法三种提取方式从绿绒蒿属植物叶片中提取RNA,将不同提取方法提取的RNA通过Nanodrop2000超微量分光光度计和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对RNA的浓度和质量进行分析。结果表明,几种不同提取方法均能获得较为完整的RNA。均可直接用于下游PCR反应,OMAG法提取的RNA纯度和得率均较高;天根试剂盒法提取的RNA纯度不高;Trizol提取的RNA纯度和质量均比较好,但成本较高,本研究对绿绒蒿属植物的分子生物学方面提供了科学依据。