应用通用荧光引物筛选裸鼹鼠微卫星位点方法的建立

目的 建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法.方法 在特异性引物F链的5＆#39;端连接通用引物,先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR,再加入通用荧光引物进行第二步PCR,最后使用琼脂糖电泳和毛细管电泳检测扩增产物,同时以传统的荧光引物PCR为对照.结果 琼脂糖电泳结果显示,通用荧光引物PCR产生的目的片段清晰,引物特异性强,目的片段多态性与传统PCR产生的多态性一致,且片段大小均比传统PCR产生的目的片段大15 bp左右,与预期一致.毛细管电泳结果也显示,通用引物PCR结果检测的等位基因数与传统荧光引物PCR方法产生的数量完全一致,无杂带,扩增效率高,具有较强的可操作性.结论 使用通用荧光引物分步PCR法结果可应用于裸鼹鼠基因组大量微卫星位点的筛选.

基于荧光通用引物竞争性PCR分析候选基因的表达

目的:建立用于小家鼠X染色体性发育相关候选基因筛选的一种基于荧光通用引物竞争性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)定量技术。方法:在小家鼠X染色体上与性发育启动相关的数量性状基因座(quantitative traitlocus,QTL)区段内选择10个候选基因,应用竞争性PCR技术,建立基于荧光通用引物竞争性PCR方案。结果10个候选基因在近交系品系C57BL/6J(B6)和C3H/HeJ(C3)的下丘脑中无表达量差异。结论:本研究,通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-PCR)技术验证竞争性PCR方案的检测结果准确、可靠。明确10个候选基因与近交系品系B6和C3的性发育启动差异无关。

构建基于荧光多重cPCR的小鼠基因拷贝数检测方法

目的建立基于竞争性聚合酶链式反应(competitive polymerase chain reaction,cPCR)小鼠基因拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的检测方法,用于检测野生小家鼠来源一号染色体替换系群体(population of specific chromosome 1 substitution strains,PCSSs)的CNVs。方法选取小鼠一号染色体上11个CNVs位点,及7、9和X染色体上各1个内对照位点,分别构建克隆质粒为竞争性粒模板,应用cPCR技术,建立荧光通用引物多重cPCR检测方法。结果多重cPCR方案适用于小鼠一号染色体上11个CNV位点的拷贝数检测,且能准确检测X染色体的拷贝数。结论实现小鼠快速、高通量的CNVs检测,可准确检测小鼠1号染色体中11个CNV位点的拷贝数变异。