H5Nx禽流感病毒交叉反应性CD4^(+) T细胞表位预测

【目的】评估预先存在的H5Nx交叉反应性免疫记忆,为人类H5禽流感病毒的防治和广谱疫苗的研发提供理论数据。【方法】利用生物信息学方法筛选人源H5Nx禽流感病毒与季节性流感病毒的共同保守的交叉反应性CD4^(+) T细胞表位,进一步分析保守表位嵌套CD8^(+) T细胞表位和B细胞表位情况以及在中国人群中的覆盖率。【结果】92.3%(513/555)的H5Nx CD4^(+) T细胞表位在季节性甲型流感病毒中具有交叉反应性,其中172个表位嵌套CD8^(+) T细胞表位和5个表位嵌套B细胞表位。这些表位与相应HLA-DRB1等位基因在全世界人群中的覆盖率为88.65%。【结论】由于反复接触季节性甲型流感病毒,人群中存在一定水平的的H5Nx交叉反应性免疫记忆,能够为H5Nx感染提供部分保护。

HLA-DRB1^(*)11:01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系探讨

目的我们前期研究显示,无论在汉族人群还是黎族人群中,HLA-DRB1^(*)11∶01均是与机体自发清除HCV相关联的HLA-Ⅱ类基因,因此,本研究的目的是探讨HLA-DRB1^(*)11∶01基因与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系。方法对广东地区常见的HCV 6a慢性感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组和阴性组的E1E2和NS3基因进行病毒选择压力以及病毒群体扩张的分析。采用覆盖我国常见HCV基因型保守区的CD4+T细胞表位的重叠肽段刺激HCV自发清除组和慢性感染组,通过ELISPT实验,根据每孔的斑点形成细胞数以及在不同组出现的频次评估HLA-DRB1^(*)11∶01基因与CD4+T细胞表位的关系。结果广东地区常见的HCV 6a感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组E1E2和NS3的阳性选择位点以及位于CD4+T细胞表位的位点数均大于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组;两组HCV 6a感染者在广东地区均具有群体扩张趋势,且HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组的扩张趋势明显高于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组。HCV自发清除组对其中5条肽段(C-52 E2691-707、C-119 NS31545-1560、C-134 NS4A1669-1684、C-154 NS4B1912-1927和C-159 NS4B1929-1944)刺激的应答率较高,HCV慢性感染组对其中的2条肽段(C-111 NS31497-1512和C-130 NS31650-1665)刺激的应答率较高。当考虑HLA-DRB1^(*)11∶01分型时,在慢性感染组和自发清除组HLA-DRB1^(*)11∶01阳性和HLA-DRB1^(*)11∶01阴性PBMCs产生的HCV特异性免疫应答均无统计学差异。结论研究揭示了HLA-Ⅱ类基因HLA-DRB1^(*)11∶01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系,同时,获得HCV泛基因型CD4+T细胞抗原候选表位,为研发适合HCV泛基因型的T细胞疫苗提供基础数据。

复合通用CD4^+T辅助细胞表位基因克隆载体的构建及测序

目的构建复合通用CD4+T辅助细胞表位基因克隆载体,并进行测序。方法由DNA work2.0软件设计并人工合成20条55个碱基的寡核苷酸序列,利用套叠PCR技术人工合成全基因序列,并克隆至pUC19载体,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒,酶切鉴定并进行测序。结果经PCR扩增出645bp的目的DNA片段。酶切鉴定筛选出8个阳性克隆,经测序获得一个序列完全正确的克隆。结论已成功构建了复合通用CD4+T辅助细胞表位基因克隆载体,为研究表位疫苗和细菌多糖结合疫苗提供了新的载体表位。

H3N2流感病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响

目的探讨H3N2病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响,为后续研究通用流感疫苗奠定基础。方法利用NetMHCⅡpan-4.0软件预测H3N2疫苗株A/Kansas/14/2017 HA的Th表位,以IC 50<500 nM为标准筛选阳性预测表位;采用SWISS-MODLE对A/Kansas/14/2017 HA进行同源建模,在3D模型上定位保守Th表位,根据表位的亲和力、保守性及核心序列的位置筛选高保守表位;合成6个非重叠的高保守Th表位,用保守Th表位体外刺激健康人外周血单核细胞,流式细胞术分析CD4^(+)T细胞表面分子CD69及细胞因子IFN-γ、IL-4的表达。结果在A/Kansas/14/2017 HA中共筛选到48个阳性预测Th表位,其中33个在H3-HA中是保守的;成功构建A/Kansas/14/2017 HA 3D模型,27个保守Th表位位于HA头部,其余6个位于杆部;人外周血PBMC经保守Th表位刺激后,CD69分子表达增加,细胞因子IFN-γ和IL-4合成增加。结论筛选到的6个H3N2 HA高保守Th表位具有免疫原性,可刺激CD4^(+)T细胞活化及分化。

HPV18 E7抗原T细胞表位的鉴定及CD4^+T淋巴细胞的免疫反应

目的初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4^+T淋巴细胞的免疫反应。方法以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1~*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4~T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得的3个HPV18 E7抗原HLA-DRB1~*0301限制性Th表位刺激外周血CD4~T淋巴细胞,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测CD4~T淋巴细胞增殖活性。ELISA方法分析表位刺激CD4~T淋巴细胞分泌的细胞因子。结果多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激CD4^+T淋巴细胞后能够有效诱导CD4~T淋巴细胞增殖,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<O.01),多肽P1(HPV18 E780-94)刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IFN-γ,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1~*0301限制性Th表位。

金黄色葡萄球菌FnbpA的CD4^+ T细胞表位鉴定

金黄色葡萄球菌(S.aureus)表达的菌体表面纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)在感染早期与宿主细胞粘附过程中起关键作用,将其免疫小鼠后能够诱导机体产生强烈的Th1和Th17反应。但FnbpA诱导Th1和Th17反应的CD4^+ T细胞表位尚不清楚。本研究根据FnbpA二级结构及其与MHCⅡ分子的结合能力对CD4^+ T细胞表位进行预测与分析,选择并合成7个候选CD4^+ T细胞表位肽。将每个表位肽分别对FnbpA免疫的C57BL/6小鼠CD4^+ T细胞进行体外刺激,通过检测CD4^+ T细胞增殖及其分泌的细胞因子水平对免疫优势表位进行初步鉴定。再以初步鉴定的优势表位肽段免疫小鼠,并检测其诱导的特异性细胞免疫应答水平。结果表明,表位肽F5(FnbpA488-505)能够显著诱导CD4^+ T细胞增殖并分泌高水平IFN-γ和IL-17A,而且F5在不同S.aureus菌株中高度保守。表明FnbpA_(488-505)是诱导CD4^+ T细胞分化为Th1/Th17的T细胞表位。本研究为S.aureus的FnbpA表位肽疫苗的进一步设计提供了实验依据。

CD4^+ T细胞表位预测方法的研究进展

CD4^+T细胞表位是指外源性抗原经过抗原提呈细胞加工后,由MHC-Ⅱ类分子提呈给初始CD4^+T细胞受体的短肽。在过去的20年中,随着分子免疫学技术和生物信息学技术的发展及应用,CD4^+T细胞表位的预测技术获得了较大的进展,其预测效率也在逐步提高,这对于减少实验合成重叠肽、研究抗原与机体作用的免疫机制以及研制蛋白质亚单位疫苗和表位疫苗等均有重要意义。本文就CD4^+T细胞表位预测的分子基础和CD4^+T表位生物信息学预测分析进行阐述。

破伤风类毒素CD4^+ T细胞表位P2增强重组轮状病毒ΔVP8*亚单位疫苗的免疫原性

目前市面上的口服活轮状病毒疫苗Rotarix 和RotaTeq 疫苗，在发达国家非常有效。然而，此类疫苗的免疫原性和疗效在一些发展中国家较低。我们以前报道，在肌注免疫动物中细菌表达轮状病毒ΔVP8＊亚单位疫苗候选物，具P［8］、P［4］或P［6］，能特异性引发高滴度的病毒中和抗体。值得注意的是，发现P［8］ΔVP8＊疫苗诱导产生的抗体既中和同型P［8］又中和异型P［4］轮状病毒毒株。

CD4^+CD25^+T细胞在CD8^+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用

实验旨在研究CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组,即去除CD4+CD25+T细胞组和未去除CD4+CD25+T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN-γ分泌,以及多肽特异性CD8+T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,所诱导的特异性CD8+CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8+T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明,预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。

CD4^+T细胞识别的肿瘤抗原的研究进展

在以往的肿瘤免疫研究中 ,人们往往关注肿瘤特异性CD8+ T细胞的抗肿瘤效应 ,并由此鉴定出许多CD8+ T细胞识别的肿瘤抗原。随着研究的深入 ,CD4 + T细胞在抗肿瘤免疫中的作用逐渐为人们所关注。联合应用MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性抗原的肿瘤疫苗将有可能取得更好的抗肿瘤效果。本文就近年来鉴定的CD4 + T细胞识别的肿瘤特异性抗原进行了综述。

异位性皮炎患者外周血Th2细胞分化偏态性分析

为了探讨异位性皮炎患者外周血辅助性T(Th)细胞亚群分化表达及其在异位性皮炎发病过程中的作用,采用三色流式细胞术测定20例异位性皮炎患者和30例健康对照者外周血趋化性细胞因子受体CCR4+CD4+T和CXCR3+CD4+T细胞的表达水平。异位性皮炎患者外周血CCR4+CD4+T细胞水平明显高于对照组(P<0.01);异位性皮炎患者外周血CCR4/CXCR3比率明显高于对照组(P<0.01);异位性皮炎患者外周血CXCR3+CD4+T细胞的水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。异位性皮炎患者外周血T细胞亚群分化失衡,Th2细胞和异位性皮炎发生、发展有关。

戊型肝炎

戊肝病毒Th表位肽免疫可增强其载体蛋白的体液免疫应答——林春鑫等（福建 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 361005）；《生物工程学报》，2007，23（2）：310-314[戊型肝炎病毒衣壳蛋白内包含一个强H-2^d限制性Th表位P34。以该表位肽免疫BALB／c鼠，其脾细胞能够在体外识别重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白，剔除实验表明应答细胞几乎完全是CD4^＋T细胞，