通络清脑注射液通过减轻星形胶质细胞神经肿胀及抑制HMGB1/TLR4炎症通路对脑缺血再灌注大鼠脑水肿的影响

目的运用大鼠脑缺血再灌注模型,观察通络清脑注射液(TLQN)及其单体对缺血再灌注大鼠急性期水肿的及高迁移率族蛋白(HMGB1)/Toll样受体(TLR4)通路的影响。方法用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为再灌注组(CIR)、TLQN组、三七总皂苷(PNS)组、栀子苷+黄芩苷(BA+GE)组,手术当天给药,尾静脉注射给药2 d,每天1次。假手术组(Sham)正规饲养,设立再灌注24和48 h为观察期。①观察PNS对脑缺血再灌注小鼠的神经功能评分、脑干湿重影响;②采用生化法检测小鼠脑缺血侧皮层IL-6,IL-1β,IL-10,TNF-α浓度含量;③Western印迹法检测TLQN及其单体对缺血再灌注大鼠24和48 h皮层GFAP,AQP4,HMGB1,TLR4和p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。④免疫荧光检测TLQN及其单体对缺血再灌注大鼠24和48 h皮层GFAP,AQP4,HMGB1,TLR4和p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。结果①神经功能评分结果显示,再灌注大鼠出现明显的神经功能缺损症状,与24和48 h CIR组相比,TLQN(48 mg·kg^-1)组、PNS组和BA+GE组大鼠神经功能评分明显降低(P<0.05);与Sham组相比,再灌注24和48 h,CIR组大鼠脑含水量明显增加(P<0.01),TLQN(48 mg·kg^-1)组小鼠在再灌注24 h后脑含水量明显降低(P<0.01);再灌注48 h,BA+GE组和PNS(60和120 mg·kg^-1)组脑含水量明显降低(P<0.05)。②炎性因子检测结果显示,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显上升(P<0.01),IL-10无明显变化(P>0.05);给予TLQN和PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显下降(P<0.01)。③Western印迹结果显示,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高(P<0.01),GFAP激活(P<0.01),并且HMGB1,TLR4和p-NF-κB也明显上升(P<0.01);给予TLQN和BA+GE组,PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显著降低(P<0.05);GFAP明显受到抑制(P<0.05),HMGB1,TLR4和p-NF-κB含量也明显下调(P<0.05)。④免疫荧光结果与Western印迹法相似,与Sham相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高(P<0.01),GFAP激活(P<0.01),并且HMGB1,TLR4,p-NF-κB也明显上升(P<0.01);给予TLQN和PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显著降低(P<0.05);GFAP明显受到抑制(P<0.05),HMGB1,TLR4,p-NF-κB含量也明显下调(P<0.05)。结论TLQN可以抑制缺血再灌注大鼠急性期梗死区域面积扩大及脑水肿的损害,其作用机制可能是通过减轻HMGB1/TLR4炎性通路,从而降低星形胶质细胞肿胀和AQP4的表达。

通络清脑注射液对大鼠脑缺血再灌注致脑水肿的影响

目的:探讨清热解毒活血中药有效组分配伍通络清脑(TLQN)注射液对大鼠脑缺血再灌注所致脑水肿的影响及其可能的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.4mg/kg),通络清脑注射液低、中、高剂量组(24、48、95mg/kg),每组10只。线栓法建立大鼠脑缺血模型,1.5h后再灌注,同时经大鼠尾静脉注射相应药物。缺血后24h处死大鼠,取各组脑组织标本及血清,干湿重法检测脑组织含水量,HE染色后观察皮层、海马病理形态变化,免疫组化法分析皮层及海马AQP-4蛋白表达,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6含量。结果:通络清脑注射液高剂量组可显著降低模型大鼠脑指数与脑组织含水量(P<0.01,P<0.05),各剂量组均可不同程度改善缺血再灌注损伤所致的病理形态变化,高剂量组可显著下调模型大鼠皮层、海马AQP-4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),各剂量组均可显著降低血清TNF-α含量(P<0.01),中、高剂量组可显著降低血清IL-6含量(P<0.05)。结论:通络清脑注射液具有减轻和改善脑缺血再灌注损伤后脑水肿的作用,其机制可能是通过抑制TNF-α、IL-6的释放,减轻脑内炎症免疫反应,从而抑制脑组织中AQP-4的表达,降低血脑屏障的通透性,对神经功能起到保护作用。

通络清脑注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑微透析液中两种氨基酸水平的影响

目的:观察清热解毒活血中药有效组分配伍通络清脑注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑微透析液中2种氨基酸类神经递质谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)水平的影响。方法:24只SD大鼠随机分为大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/RP)模型组,尼莫地平组(0.4 mg·kg-1),通络清脑注射液低剂量组(48 mg·kg-1)及高剂量组(95mg·kg-1),每组6只。采用微透析技术对大鼠纹状体脑组织进行连续取样,流速1μL·min-1,每30 min采集1个样品。收集至第3个样品时,采用线栓法制备MCAO/RP模型,90 min后拔出线栓,实现再灌注,同时经大鼠尾静脉给予各组药物,继续收集微透析液至再灌注后180 min。微透析液样品经柱前衍生化后,经高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)检测Glu和GABA的水平。分别以造模时间点Glu及GABA含量为基础值计算释放率百分比。结果:建立MCAO模型后,各组Glu,GABA释放量均急剧上升,造模后120 min,通络清脑注射液高剂量组Glu释放量(327.29±127.31)%与模型组(1 041.08±190.57)%相比明显下降(P<0.05),造模后120,150 min,通络清脑注射液高剂量组GABA释放量(11 843.99±3 952.45)%,(4 785.80±3 051.98)%与模型组(35 204.61±6 919.45)%,(27 694.76±18 393.61)%相比明显下降(P<0.05)。随后各组Glu,GABA释放量均呈逐渐下降趋势。结论:抑制氨基酸的过量释放是通络清脑注射液抗脑缺血/再灌注损伤的可能机制之一。