通肠清胰汤调控TLR4/NF-κB通路减轻重症急性胰腺炎大鼠肺肠损伤的实验研究

目的探讨通肠清胰汤对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺、肠损伤的保护作用及其可能作用机制。方法将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通肠清胰汤组、乌司他丁组,每组6只。假手术组麻醉暴露腹腔后,仅轻轻翻动十二指肠和胰腺数次后缝合腹部,其余组均经胆胰管穿刺逆行注射牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型,大鼠造模成功后4 h开始给药。通肠清胰汤组予通肠清胰汤煎剂灌胃,模型组和假手术组大鼠予等体积生理盐水灌胃,乌司他丁组予乌司他丁注射液尾静脉注射,均每隔8 h给药1次,共给药3次。造模后24 h将大鼠麻醉、取材,生化法检测血清淀粉酶(amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)含量;酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠胰腺组织、结肠组织、肺组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠结肠组织咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)、闭锁小带蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)含量,大鼠结肠组织和肺组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65蛋白表达量。结果HE染色显示假手术组胰腺、结肠、肺组织无明显病理损伤变化,模型组胰腺腺泡间隙明显扩张、间质水肿、小叶间隙扩大、大量炎性细胞浸润、组织片状坏死,模型组结肠细胞肿胀、炎性细胞浸润、黏膜腺体减少、肠绒毛剥脱,模型组肺组织细胞水肿明显、炎性细胞浸润、间质出血,与模型组比较,通肠清胰汤组和乌司他丁组胰腺腺泡结构破坏、间质水肿、出血坏死均减轻,结肠炎性细胞浸润减少,肺组织细胞水肿和炎性浸润亦减轻。与假手术组比较,模型组大鼠血清AMS、LPS、CRP、TNF-α、IL-6含量均显著升高(P均<0.01),IL-10含量显著降低(P<0.01),结肠组织Occludin、Claudin、ZO-1蛋白表达量显著降低(P均<0.01),结肠组织和肺组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达量显著升高(P均<0.01),与模型组比较,通肠清胰汤组、乌司他丁组大鼠血清AMS、LPS、CRP、TNF-α、IL-6含量显著降低(P均<0.01)、IL-10含量显著升高(P<0.01),结肠组织Occludin、Claudin、ZO-1蛋白表达量显著升高(P均<0.01),结肠组织和肺组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达量显著降低(P均<0.01)。与乌司他丁组比较,通肠清胰汤组大鼠血清AMS、LPS、CRP含量显著升高(P均<0.05)、IL-10含量显著降低(P<0.01),结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达量显著降低(P均<0.05),结肠组织和肺组织TLR4蛋白表达量显著升高(P均<0.05),而血清TNF-α及IL-6含量、结肠组织Claudin及NF-κB p65表达量、肺组织NF-κB p65表达量差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论通肠清胰汤可减轻SAP大鼠的肺肠损伤,可减轻炎性因子释放、保护肠黏膜屏障,其机制可能与调控TLR4/NF-κB通路相关。

通肠清胰汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道功能的实验研究

目的探讨通肠清胰汤对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠道功能的影响。方法将36只雄性Wistar大鼠随机分为通肠清胰汤组、SAP组、假手术组,每组各12只,通肠清胰汤组和SAP组大鼠经胆胰管穿刺逆行注射法制备SAP模型,假手术组大鼠麻醉开腹后翻动十二指肠并触摸胰腺数次后缝合腹部。通肠清胰汤组予通肠清胰汤煎剂灌胃,SAP组和假手术组大鼠予以等体积生理盐水灌胃,每隔2h灌胃1次。术后6h各组大鼠以1.5ml亚甲蓝注射液灌胃,所有大鼠均于造模成功后7h取胰腺组织、小肠,计算小肠推进比,HE染色观察胰腺组织及回肠末端组织;取部分回肠标本以蛋白质印记法(Western blot)检测5-羟色胺受体1A(5-hydroxytryptamine receptor 1A,5HT1AR)的表达;取腹主动脉血,分离血清,检测血淀粉酶(amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)、C反应蛋白(Creactive protein,CRP)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的水平。结果与假手术组比较,SAP组、通肠清胰汤组的小肠推进率差异有统计学意义(P均<0.05);与SAP组比较,通肠清胰汤组的小肠推进率差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示假手术组胰腺、回肠组织无明显病理损伤变化;SAP组胰腺腺泡细胞广泛坏死、小叶结构模糊、间质水肿出血、坏死胰腺周围浸润炎性细胞,回肠细胞肿胀、炎性细胞浸润、肠绒毛剥脱、局部出血坏死、黏膜腺体减少;通肠清胰汤组的胰腺、回肠病理损害较SAP组均减轻。与假手术组比较,SAP组、通肠清胰汤组血AMS、LPS、CRP、DAO、5-HT水平均显著升高(P<0.01);通肠清胰汤组血AMS、LPS、CRP、DAO、5-HT水平较SAP组均降低(P<0.01)。与假手术组比较,SAP组、通肠清胰汤组回肠黏膜5-HT1AR蛋白表达均降低(P均<0.01);通肠清胰汤组回肠黏膜5-HT1AR蛋白表达较SAP组升高(P<0.01)。结论通肠清胰汤能保护肠黏膜,其机理可能是通过恢复5-HT与其受体的亲和力,使5-HT与5-HT1AR的水平处于一个较为平衡的状态,从而收缩胃肠道平滑肌,改善肠道功能。