TGF-β_1R在通脉大生片作用下的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的探索TGF-β1R在通脉大生片作用下的离体大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1R的表达量。结果自然生长组各时间点的TGF-β1R的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12 h时TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低,FSH组于给药2 h后TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低。结论通脉大生片可增加TGF-β1R的表达量,进而揭示通脉大生片通过可能通过TGF-β/smad信号通路来调节卵泡的发育和排卵。

通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1表达的影响

目的:探索通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1的影响。方法:取原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组(通高组)、通脉大生片中剂量组(通中组)、通脉大生片低剂量组(通低组)、FSH组,分别于细胞生长对数期给药,取给药后1h、2h、6h、12h、24h、48h的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1的表达量。结果:自然生长对照组各时间点的TGF-β1的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12h时TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到最低,FSH组于给药2h后TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到最低。结论:通脉大生片可能是通过增加TGF-β1的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的。

通脉大生片对雷公藤致卵巢损伤大鼠卵巢激素与卵泡发育的影响

目的:探究补肾养血法中药复方通脉大生片修复雷公藤多苷致大鼠卵巢功能损害的作用机理。方法:选雌性育龄期SD大鼠行阴道脱落细胞学涂片筛选出动情周期正常者为受试动物,随机选取6只为正常对照组,其余大鼠予雷公藤多苷40 mg/kg.d灌胃造模。取已造模大鼠30只,随机分为5组,每组6只,分别予倍美力等剂量和通脉大生片高、中、低剂量治疗7 d,模型空白组同期予等量生理盐水。各组均于治疗后第8 d采血并处死动物,称重法计算卵巢指数,放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、孕酮,酶联免疫吸附法检测抑制素B(INHB);光镜下观察卵巢组织中生长卵泡和黄体数,测量生长卵泡截面积和周长。结果:①雷公藤多苷的生殖毒性使大鼠动情周期紊乱,卵巢指数下降,血中E2、INHB含量明显降低;生长卵泡和黄体数、卵泡截面积和周长均明显减少变小,与正常对照组比较P<0.05。②用通脉大生片治疗后,大鼠动情周期恢复正常,卵巢指数、E2、INHB水平明显升高,卵巢中可见大量初级、次级和接近成熟的卵泡,与模型空白组比较P<0.05,生长卵泡截面积和周长也有升高趋势。结论:①雷公藤多苷可造成育龄期大鼠卵泡发育障碍,补肾养血法复方通脉大生片能增加生长卵泡的数量,提高雌激素和抑制素B水平,从而修复雷公藤所致卵巢损伤,但对孕激素和黄体数量的影响不明显。②补肾养血复方治疗的有效性初步证实该大鼠模型符合中医肾虚证候属性。

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的:探讨通脉大生片对肾虚型排卵障碍不孕症的治疗作用机制。方法:建立雄激素致无排卵大鼠模型。分通脉大生片组高剂量组、通脉大生片组低剂量组、模型组、空白组。观察体重,子宫和卵巢指数,子宫和卵巢病理形态学,血清FSH、LH、E2水平。结果:通脉大生片组与模型组比较,通脉大生片能够增加ASR大鼠子宫指数和卵巢指数(P<0.05)。子宫、卵巢组织形态学表明,通大生片组大鼠子宫内膜比模型组增厚,腺体数目增多。卵巢内有生长卵泡和成熟卵泡,数量明显增多。通脉大生片能够升高大鼠E2、FSH、LH水平(P<0.05)。结论:通脉大生片有促进卵泡发育成熟的作用,能够提高E2、FSH、LH水平,该作用可能通过调节下丘脑-垂体-卵巢轴来实现的。

通脉大生片对排卵障碍型不孕大鼠FSH、LH、TGF-β1的影响研究

目的研究通脉大生片对排卵障碍型不孕大鼠的促卵泡激素(FSH),促黄体生成素(LH),转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,以探讨通脉大生片治疗排卵障碍不孕症的作用机理。方法建立雄激素致排卵障碍型大鼠模型,随机分为空白对照组,模型组,通脉大生片高剂量组,通脉大生片中剂量组,通脉大生片低剂量组,氯米芬片组。第80日龄开始给药,5周后股动脉取血,用酶联免疫法检测血清中FSH、LH和TGF-β1的含量。取出新鲜的卵巢组织,病理切片HE染色后观察卵巢组织的形态学。结果通脉大生片高剂量组FSH水平高于模型组P<0.05,差异有显著性。通脉大生片高、中、低剂量组LH水平均高于模型组,P<0.01,差异有显著性。通脉大生片高剂量组TGF-β1水平高于模型组,P<0.01,差异有显著性。结论通脉大生片可能通过提高垂体的内分泌功能提高FSH、LH水平;通脉大生片可以升高大鼠血清内TGF-β1水平,其导致该效应的机理,尚需进一步探讨。

通脉大生片对雷公藤致卵巢损伤大鼠性激素与抑制素的影响

目的:探讨补肾法中药复方干预性治疗的作用机理,为中医药调节女性生殖轴的研究提供一个新的符合中医证候特点的病证结合动物模型。方法:选雌性育龄期SD大鼠行阴道脱落细胞学涂片,筛选出动情周期正常者为受试动物,除正常组外,其余大鼠予雷公藤多苷致动情周期紊乱模型。雷公藤模型大鼠随机分为即空白组、倍美力组、中药高、中、低剂量组5组,分别予倍美力和通脉大生片不同剂量治疗7天,空白组同期给予等量生理盐水,正常组正常喂养。各组均于治疗前后采血,称重法测算卵巢指数;放射免疫法检测血清雌二醇、孕酮;酶联免疫吸附法检测抑制素B水平;免疫组化法检测卵巢雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)。结果:①予雷公藤多苷40 mg/kg.d连续灌胃10周,可造成育龄期大鼠动情周期紊乱或消失,卵巢指数下降,血中E2、INHB水平明显降低;卵巢组织中ER表达明显降低;②运用通脉大生片干预性治疗后,大鼠动情周期恢复至正常范围,卵巢指数升高;血清E2、INHB水平及卵巢组织中ER表达均明显升高;与空白组相比均有显著统计学意义。结论:雷公藤多苷可造成大鼠卵泡发育障碍和卵巢功能低下,补肾气益精血的中药复方"通脉大生片"能显著提高模型大鼠血清雌二醇和抑制素B水平及卵巢中ER表达,从而有效地提高雌激素的生物效应和卵巢储备功能。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠IGF-1及其受体影响的研究

目的:研究通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠血清中的胰岛素生长因子-1(IGF-1),卵巢中胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)表达的影响,以探讨通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠的卵巢局部因子的调控影响。方法:建立雄激素致排卵障碍型大鼠模型,随机分为空白对照组,模型组,通脉大生片高剂量组,通脉大生片中剂量组,通脉大生片低剂量组,克罗米芬组。第80日龄开始给药,5周后股动脉取血,采用酶联免疫法检测血清中IGF-1的含量。取出新鲜的卵巢组织,用免疫组化法检测卵巢局部IGF-1R的表达以及病理切片,HE染色后观察卵巢组织形态。结果:通脉大生片高剂量组降低血清中IGF-1(P<0.05)和卵巢局部IGF-1R表达(P<0.01),有统计学意义。通脉大生片低剂量降低卵巢局部IGF-1R表达(P<0.01),有统计学意义。结论:通脉大生片可通过调节卵巢局部因子IGF-1及其受体途径,促进卵泡生长发育及排出。

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕模型大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的影响

目的:探讨通脉大生片治疗对雄激素致不孕大鼠模型(ASR)卵巢基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:采用雄激素致不孕大鼠模型(ASR模型),以原位杂交方法观察分析卵巢MMP-9 mRNA信号表达的情况。结果:由于药物的干预,各个用药组MMP-9阳性细胞的表达浓度和表达总量均高于模型组,以通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达尤其明显,与正常组水平接近,差异无统计学意义(P>0.05)。通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达亦明显优于氯米芬组,差异(P<0.05)。结论:通脉大生片可能通过促进肾虚排卵障碍不孕大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的表达,发挥其对不孕症的治疗作用,这可能是其促进卵泡发育和卵巢排卵的机制之一。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢指数和FSHR mRNA表达的影响

目的:探讨以"补肾调冲法"立法的通脉大生片对排卵障碍型不孕(ASR)大鼠卵巢FSHR mRNA表达的调节作用。方法:选取9日龄SD大鼠,给予颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚ASR大鼠模型,根据大鼠阴道涂片结果筛选造模成功大鼠,随机分组。灌胃5周后处死,取卵巢,计算卵巢指数。荧光定量RT-PCR检测计算各组大鼠卵巢FSHR mRNA表达量。结果:与正常组FSHR mRNA表达量比较,模型组降低且差异有统计学意义(P<0.05);与模型组FSHR mRNA表达量比较,通高组、右归丸组上调,差异有统计学意义(P<0.05),通中组、来曲唑组均上调,差异有显著统计学意义(P<0.01),通低组升高,差异无明显统计学意义(P>0.05);通高、中组FSHR mRNA表达量上调幅度明显高于通低组,尤以通中组最显著。结论:通脉大生片可治疗肾虚排卵障碍型不孕,其机制与调节FSHR mRNA的表达水平,提高卵巢反应性有关。

Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的研究Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞爬片后,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞爬片,用免疫组化法检测细胞爬片中Smad3的表达量。结果自然生长对照组各时间点的Smad3的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组给药12h时Smad3核阳性率明显高于给药6h和24h(P<0.05);通中组给药12h时Smad3核阳性率明显高于通高组和通低组12h时Smad3核阳性率,有统计学意义(P<0.05);FSH组给药后1h、2h时Smad3核阳性率明显高于正常组,有统计学意义(P<0.05),FSH组给药后2h时Smad3核阳性率明显高于给药后1h时Smad3核阳性率,有统计学意义(P<0.05)。结论通脉大生片可能是通过增加Smad3的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的 。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢TGF-β1及Smad7表达的影响

目的:观察通脉大生片对大鼠卵巢TGF-β1、Smad7在TGF-β/smads通路中的表达变化及意义。方法:建立大鼠肾虚排卵障碍不孕(ASR)模型,通过阴道涂片筛选造模成功大鼠后分组用药,采用酶联免疫法(Elisa)法检测TGF-β1的表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠卵巢中Smad7蛋白的表达量。结果:①模型组大鼠卵巢TGF-β1的表达量最低,与正常组、通高组、来曲唑组、右归丸组相比,有统计学差异(P<0.05,P<0.01);通脉大生片组中以通高组最优;②通脉大生片高、中组来曲唑组及右归丸组Smad7表达均低于模型组(P<0.05,P<0.01),以通高组效果最好。结论:通脉大生片可用于治疗肾虚排卵功能障碍型不孕,而其促排卵作用可能部分是通过调节TGF-β/smads信号通路中TGF-β1及Smad7的表达,进而促进排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β/smads信号通路的激活来实现的。

基于有效成分的溶出性与粉末分散性构建通脉大生片的粉末分散体

目的改善通脉大生片中丹参与白芍的溶出性,构建优良的粉末分散体。方法采用普通粉碎法及超微粉碎法对白芍、丹参及紫河车进行粉碎,并将六偏磷酸钠(SH)作为粉碎分散剂,共制备19个粉末分散体样品。考察各粉末分散体的粒径分布、红外光谱、分散性,比表面积及孔隙率,采用HPLC法测定丹酚酸B、芍药苷含量,评价不同粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度。结果红外光谱结果显示超微粉碎、药材混合打粉、SH均没有使药材粉末产生新的物质。丹参-白芍混合超微粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度最高,丹酚酸B 83.57%,RSD 2.03%;芍药苷80.75%,RSD 0.61%。结论溶出度不仅受粉末比表面积的影响,同时还受到粉末分散性的影响。在改善粉末中有效成分溶出度时,不仅要考虑增大粉末的比表面积,还应改善粉末的分散性。紫河车与丹参-白芍的混合超微粉末中,丹酚酸B、芍药苷溶出度较丹参-白芍混合粉末中两者的溶出度低,因此将紫河车单独粉碎后与另两者混合。

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫组织形态学的影响

目的观察以"通补法"立法的通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫组织形态学的变化,探讨通补法治疗肾虚排卵障碍不孕的机制。方法建立肾虚排卵障碍不孕大鼠模型,根据大鼠阴道涂片的结果,筛选造模成功大鼠,随机分为6组,分别为模型组,通脉大生片高剂量组(简称通高组),通脉大生片中剂量组(简称通中组),通脉大生片低剂量组(简称通低组),右归丸组,来曲唑组,另设正常组,于大鼠第80日龄,对各组大鼠分别进行相应药物干预,灌胃5周后处死动物,取子宫组织制成病理切片,在光镜和电镜下观察。结果光镜和电镜下,通脉大生片各组大鼠与模型组大鼠比较,子宫有不同程度的恢复(P<0.05),通高组效果最好,与正常组比较,结果无差异(P>0.05)。结论通脉大生片对促进肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫的发育作用是肯定的,其组织形态学变化为通脉大生片治疗肾虚排卵障碍不孕症提供了客观基础和理论支持。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢Smad4表达的影响

目的观察通脉大生片对大鼠卵巢形态学改变及信号蛋白Smad4在TGF-β/smads通路中的表达变化及意义。方法建立大鼠肾虚排卵障碍不孕(ASR)模型,通过阴道涂片筛选造模成功大鼠后分组用药5周后,处死大鼠,HE染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测大鼠卵巢中Smad4蛋白的表达量。结果 1各用药组从卵巢形态学上明显恢复的趋势,镜下可见成熟卵泡和黄体。2与模型组相比,通脉大生片高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠卵巢Smad4的表达水平升高(P<0.05),以高剂量组及来曲唑组最明显。结论通脉大生片可用于治疗肾虚排卵障碍型不孕,而其促排卵作用可能部分是通过调节Smad4的表达,进而调控卵巢TGF-β/smads信号通路的激活来实现的。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢P-Smad3表达水平影响研究

目的在前期研究的基础上,探讨以"补肾调冲法"立法的通脉大生片对大鼠卵巢TGF-β/Smads信号转导通路的调控作用,探索中医补肾调冲法促卵泡发育的机制,从而为补肾调冲法治疗肾虚排卵障碍型不孕提供科学依据。方法选取9日龄SD大鼠,通过给予颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)模型,根据大鼠阴道脱落细胞涂片的表现,筛选出造模成功的大鼠,随机分为6个组,分别为模型组、通脉大生片高剂量组(简称通高组)、通脉大生片中剂量组(简称通中组)、通脉大生片低剂量组(简称通低组)、来曲唑组(LE)、右归丸组,另设正常组,于大鼠第80日龄,分别给予相应药物进行干预,连续干预5周后股动脉取血并处死动物,迅速剥离大鼠卵巢,每组选取三只大鼠的卵巢组织,立即置于Eppendorf管中,储存于液氮中以备检测。采用免疫印迹法,检测各组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平。结果与模型组相比,正常组、通高组、来曲唑组、右归丸组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平较高,差异有显著意义(P<0.01),通低组、通中组的P-Smad3水平亦有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);通脉大生片各剂量组中,通高组升高P-Smad3水平的效果明显高于通中组、通低组。结论通脉大生片可以提高肾虚排卵障碍性不孕大鼠P-smad3的表达水平,进而改善卵巢局部的微环境,以促进卵泡的生长、发育和促进成熟卵泡破裂及卵子的排出,从而达到治疗肾虚排卵障碍性不孕的作用。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

目的在前期实验的基础上探讨通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)卵巢颗粒细胞超微结构的影响。方法选取9日龄SD大鼠,通过颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)模型,根据大鼠阴道脱落细胞涂片表现,筛选出造模成功的大鼠并进行分组。于大鼠第80日龄,分别给予相应药物干预,连续5周后股动脉取血处死动物,迅速剥离大鼠两侧卵巢,制成电镜标本,应用透射电镜观察卵巢颗粒细胞的超微结构。结果 (1)正常组卵巢颗粒细胞超微结构表现为:多层卵巢颗粒细胞分布,核圆形,线粒体丰富,可见大量粗面内质网;(2)模型组与正常组、给药各组大鼠卵巢颗粒细胞超微结构有明显差异,表现为细胞核团块状,核糖体丢失,可见凋亡小体,线粒体肿胀,且嵴肿胀。(3)通脉大生片各剂量组中,通高组、通中组与正常组大鼠卵巢颗粒细胞结构较相近,主要表现为成熟卵泡颗粒细胞丰富,多层分布,细胞核呈圆形,核内染色质分布均匀,胞浆内可见丰富的线粒体、粗面内质网,且结构正常,可见丰富的脂滴,细胞膜表面有微绒毛突起;通低组可见卵巢颗粒细胞结构尚可,胞浆内线粒体轻度肿胀,可见少量粗面内质网及少量脂滴。(4)左归丸及来曲唑组卵巢颗粒细胞超微结构表现相似且与正常组结构相近,可见卵巢颗粒细胞,核染色质均匀,胞浆内可见大量线粒体、高尔基复合体,结构良好。结论 (1)通脉大生片能恢复肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞的超微结构。(2)通脉大生片可通过对卵巢颗粒细胞细胞器结构及数目的影响,从而影响卵泡的发育和成熟,发挥促排卵作用。(3)中医补肾调冲法治疗肾虚排卵障碍型不孕有其现实意义。

吴克明教授治疗原发性痛经经验

原发性痛经（primary dysmenorrhea，PD）以经期或经期前后1周以内出现周期性下腹疼痛为主症，妇科检查或B超检查生殖器官无明显器质性病变，多发于月经初潮后2—3年的青春期少女或未婚年轻妇女。