基于通路活性的抗癌药物敏感性预测

通路数据库是系统分析基因功能,联系基因组信息和功能信息的知识库,通路作为基因功能集合能够提高预测模型的预测能力和解释能力。本研究通过整合KEGG通路数据和CCLE基因表达谱推断通路活性并结合药物数据建立药物敏感性预测模型。在推断通路活性时,并没有把通路简单地作为基因集合,而是选择通路中的高连接度基因,取高连接度基因的平均表达水平作为通路活性值,合并每个通路的活性向量得到通路活性矩阵,然后输入到弹性网进行药物敏感性预测。实验结果表明,对于大多数药物,使用基于通路中高连接度基因的计算分析方法更有利于药物敏感性预测,同时能识别出更多与药物相关基因的通路。

人脑胶质瘤EGFRAKT通路活性的研究

目的 :研究胶质瘤中细胞EGFR和磷酸化AKT(p AKT)的表达以及EGFR与AKT活性的相互关系。方法 :用免疫组化方法观察 6例正常脑组织、5 0例胶质瘤标本和 2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR表达 ,并应用Westernblot分析p AKT的表达。结果 :EGFR在胶质瘤中的表达阳性率随肿瘤恶性程度增加而增加 ;其蛋白表达水平与病理分级呈正相关。Westernblot分析发现在正常脑组织中p AKT蛋白水平表达极低 ,胶质瘤中p AKT的表达水平均随肿瘤恶性程度增加而明显上升 ,且与胶质瘤病理级别正相关 ;低恶度肿瘤与高恶度肿瘤有明显差异。EGFR的阳性表达率与AKT磷酸化水平显著相关。结论 :EGFR AKT通路的活性状态在胶质瘤的恶性进展具有重要作用 ,该通路可能是胶质瘤恶性表型的责任通路。

长期使用地西泮对神经活性配体受体相互作用信号通路的影响

研究长期使用地西泮对小鼠神经活性配体受体相互作用信号通路的影响。通过长期且逐量递增的方式给小鼠连续灌胃地西泮60 d,提取小鼠全脑总mRNA,进行小鼠全基因组芯片检测,运用生物信息学方法筛选出差异表达基因,并通过《京都基因与基因组百科全书》(KEGG)的基因功能通路数据库分析神经活性配体受体相互作用信号通路的变化。结果发现,与正常组比较,地西泮组的神经活性配体受体相互作用信号通路上的16个基因表达发生了显著性变化,其中表达上调的基因有9个,表达下调的有7个。实验结果表明,长期使用地西泮对神经活性配体受体相互作用信号通路具有显著的影响,可能和长期使用地西泮导致机体所产生的不良反应密切相关。

活性氧代谢通路相关基因多态性对放射性肺炎的预测价值分析

目的探讨活性氧代谢通路相关基因亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)rs1801131、rs1801133位点和超氧化物歧化酶2(SOD2)rs4880位点多态性与放射性肺炎的关系。方法通过聚合酶链反应(PCR)-荧光探针方法检测317例接受胸部放射治疗的肺癌患者MTHFR基因rs1801131、rs1801133位点和SOD2基因rs4880位点单核苷酸多态性(SNP)的基因型,采用Logistic回归模型分析基因多态性与≥2级放射性肺炎的相关性。结果317例患者均完成放疗计划。中位随访时间为16.7个月(3.6~43.0个月),其中67例患者发生≥2级放射性肺炎。Logistic回归模型分析结果显示,MTHFR基因rs1801131位点SNP与放射性肺炎的发生密切相关(P<0.05)。结论MTHFR基因rs1801131位点多态性与肺癌患者放射性肺炎的发生风险密切相关。

甘草酸通过ROS依赖性NLRP3炎性通路减轻缺氧H9c2细胞损伤的实验研究

目的:观察甘草酸(GA)对缺氧H9c2细胞炎症、氧化应激的影响,并探讨其潜在作用机制。方法:将正常培养的H9c2细胞设置为对照组,缺氧培养H9c2细胞设置为缺氧组;GA、GA+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+GA组、缺氧+GA+NAC组;将生理盐水、双蒸水+GA处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+生理盐水组、缺氧+GA+双蒸水组。采用细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法测定细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞NOD样受体蛋白3(NLPR3)mRNA表达。结果:与对照组比较,缺氧组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均降低,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均升高,SOD含量降低(P<0.05);与缺氧+生理盐水组比较,缺氧+GA组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均升高,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均降低,SOD含量升高(P<0.05)。与缺氧+GA+双蒸水组比较,缺氧+GA+NAC组H9c2细胞ROS、NLRP3及TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA降低,SOD含量升高(P<0.05)。结论:GA可减轻缺氧诱导H9c2细胞的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性NLRP3炎性通路有关。

单宁酸协同顺铂增强肝癌HepG2细胞内质网应激PERK-ATF4通路的激活水平

本文主要研究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)对肝癌Hep G2细胞内质网应激PERK-ATF4通路的影响,以探究TA协同CDDP抗肝癌的分子机制。用180μM TA、0.9μg/m L CDDP单独用药或者联合用药处理肝癌Hep G2细胞24 h和48 h后,利用实时荧光定量PCR技术(q-RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测细胞PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、Procaspase3与Cleaved caspase3分子的表达水平。q-RT-PCR及Western Blot结果显示,TA与CDDP联合用药能显著上调细胞PERK、ATF4、CHOP的表达水平和Caspase3的剪切活化水平,下调PERK的磷酸化水平(P<0.01或P<0.05)。TA协同CDDP增强了肝癌Hep G2细胞内质网应激PERK-ATF4通路的激活水平,其可能是通过激活细胞ERS,促进PERK-ATF4通路相关分子和ERS标志性分子CHOP的表达,抑制PERK的磷酸化,从而促进Caspase3的剪切活化来诱导细胞凋亡的发生。

基于MAPK信号通路的丹参注射液体外调控小鼠前成骨细胞的增殖分化作用

目的:探究丹参注射液对小鼠前成骨细胞的增殖分化的影响及其与有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法:将小鼠前成骨细胞分为4组,分别采用丹参稀释液浓度为0(对照组),75,150,300 mg·L-1进行干预。采用细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞光密度(OD)值;采用0.1%的茜素红溶液对细胞进行染色,并观察各组钙结节生成情况;采用实时荧光定量PCR法检测γ-羟基谷氨酸骨蛋白(BGP)及Runt相关基因2(Run×2) mRNA表达情况;采用蛋白免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶2(ERK2)及其磷酸化状态(p-ERK1/2)、p-p38蛋白表达情况。采用抑制剂PD98059抑制ERK1/2通路,采用实时荧光定量PCR检测BGP及Run×2 mRNA表达。结果:各浓度丹参注射液组的OD值均高于对照组,其中300 mg·L-1丹参组各个孵育时间差异均有统计学意义(P<0.01)。各浓度丹参组钙结节数量均显著高于对照组,且呈浓度依赖性(P<0.05)。7 d后各浓度丹参注射液组的BGP及Run×2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.05)。经PD98059抑制后,300 mg·L-1丹参注射液(SM)+PD组BGP及Run×2 mRNA表达显著低于SM组(P<0.05或P<0.01)。300mg·L-1丹参组p-ERK1/2蛋白表达量和相对蛋白密度显著高于对照组(P<0.01);300 mg·L-1丹参组p-p38蛋白表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:丹参注射液对成骨细胞增殖、分化及矿化具有促进作用,其作用机制可能与激活MAPK通路中的ERK1/2细胞信号相关。

m6A调节因子在肺腺癌和肺鳞癌中的生物学差异

目的探讨m6A调节因子在肺腺癌(LUAD)和肺鳞癌(LUSC)中的生物学差异。方法在癌症基因组图谱(TCGA)数据库中获取LUAD和LUSC相关表达谱数据,并利用R分析26个m6A调节因子的潜在靶基因在LUAD和LUSC的肿瘤组织与正常组织之间的表达差异;利用癌症蛋白质组图谱(TCPA)的反相蛋白微阵列(RPPA)数据计算26个m6A调节因子在10个肿瘤相关通路的通路活性评分(PAS)与差异;利用TCGA数据库采用单因素Cox回归分析(Univariate COX analysis)和Kaplan-Meier生存分析方法分析m6A调节因子的潜在靶基因对LUAD和LUSC患者预后的影响及差异。结果在26个m6A调节因子中,ZCCHC4、ALKBH1和YTHDF2仅在LUAD的肿瘤组织和正常组织中表达水平差异具有统计学意义,IGF2BP2和YTHDC2仅在LUSC的肿瘤组织和正常组织中表达水平差异具有统计学意义。m6A调节因子在LUAD和LUSC中,参与调控的通路活性存在明显的差异,METTL3、METTL5、METTL14、ZC3H13、RBMX和FTO仅在LUAD中的Apoptosis、Cell cycle、EMT和RAS/MAPK等肿瘤相关通路中发挥激活或抑制功能,EIF3A、YTHDC2和RBM15B仅在LUSC中的PI3K/AKT和TSC/mTOR信号通路中发挥抑制或激活作用。IGF2BP3和IGF2BP3调节因子的表达与LUAD预后生存呈负相关,与LUSC预后生存呈正相关。结论相同的m6A调节因子可能在LUAD和LUSC的生物学过程中发挥着不同的调控功能。

温补肾阳方通过ROS/p38 MAPK通路对骨髓增生异常综合征细胞株自噬及凋亡的影响

目的探讨温阳补肾方对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1凋亡和自噬的影响及其机制。方法SD大鼠分别以5,10,20 g/kg温阳补肾方药液和等量生理盐水灌胃,获得低、中、高剂量温阳补肾方含药血清及对照血清;将体外培养的SKM-1细胞分为空白对照组、生理盐水组和药物低、中、高剂量组(分别加入低、中、高剂量温阳补肾方含药血清),采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测SKM-1细胞增殖和凋亡,比色法检测SKM-1细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测SKM-1细胞内活性氧(ROS)水平,免疫印迹法(Western blot)检测SKM-1细胞中自噬相关蛋白Beclin1、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路相关蛋白P38 MAPK、p-P38 MAPK表达水平。结果与空白对照组相比,生理盐水组细胞增殖活力、凋亡率、Caspase-3活性、ROS水平以及P62、Beclin1蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-P38 MAPK/P38 MAPK比值差异无统计学意义(P>0.05)。与生理盐水组比较,药物低、中、高剂量组SKM-1细胞增殖活力和P62蛋白表达水平明显降低,而细胞凋亡率、Caspase-3活性、ROS水平、Beclin1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和p-P38 MAPK/P38 MAPK值均明显升高(P<0.05),且呈一定的药物浓度依赖性(P<0.05)。结论温阳补肾方可能通过激活ROS/p38 MAPK信号通路,调控细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达,进而促进MDS细胞发生凋亡自噬。

骨髓间充质干细胞移植对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的治疗作用及机制

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤(EBI)的治疗作用及机制。方法将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、蛛网膜下腔出血(SAH)组、BMSC组、VitE组,每组10只,采用血管内穿刺法构建SAH模型。分离、培养、鉴定BMSC。造模后24 h,将第4代BMSC 3×10^(6)个重悬于0.6 mL PBS中,经股静脉注入BMSC组;假手术组、SAH组、VitE组经股静脉注入等量PBS。VitE组给予维生素E(100 mg/kg)灌胃,其他组给予等量橄榄油灌胃。造模后48 h,用改良Garcia评分评估大鼠的神经功能,计算脑组织水含量,用HE染色法观察脑组织病理变化,统计坏死的神经细胞数量,普鲁士蓝染色(铁染色)法检测脑组织铁沉积情况,吸光光度法检测脑组织铁含量、MDA、GSH,Western blotting法检测脑组织NOX2蛋白,ROS探针法检测脑组织ROS。结果与假手术组比较,SAH组改良Garcia评分低,脑组织含水量高,SAH组神经细胞坏死数量多,脑组织中铁沉积量、铁含量、MDA含量高,GSH含量低,脑组织中NOX2蛋白表达、ROS水平高(P均<0.05);与SAH组比较,BMSC组、VitE组改良Garcia评分高,脑组织含水量低,神经细胞坏死数量少,脑组织中铁沉积量、铁含量、MDA含量低,GSH含量高,脑组织中NOX2蛋白表达、ROS水平低(P均<0.05)。除改良Garcia评分外,BMSC组、VitE组以上其他指标比较差异有统计学意义(P均<0.05)。假手术组神经细胞形态规则,均匀;SAH组神经细胞排列紊乱,细胞核破碎;与SAH组比较,BMSC组神经细胞损伤情况明显改善;VitE组神经细胞损伤修复情况比BMSC组弱。结论BMSC移植可有效治疗SAH大鼠EBI,其作用机制可能通过NOX2/ROS通路调控铁死亡。

基于多维基因组学的卵巢癌亚型分析

卵巢癌预后较差且个体差异很大,有必要从多维基因组学的角度来理解卵巢癌复杂的致癌机制,以期获得导致卵巢癌亚型间预后差异的分子机制.鉴于从基因组学数据中所识别的预后特征往往不具备较好的一致性,提出一种多维基因组学中应用通路活性对卵巢癌亚型进行区分的方法.首先,通过DNA拷贝数、DNA甲基化及miRNA等基因表达调控因素与基因表达变化相结合的方法来识别卵巢癌预后相关的14个通路.其次,基于卵巢癌预后相关的通路活性在不同亚型中有不同的模式,得到4种存在着生存差别的稳定亚型,并提取了其中预后最差的亚型区别于其它亚型的TGF-β等显著差异通路.最后,独立数据验证显示,该组显著差异通路的活性在验证集预后最差的亚型中也发生了一致地改变.识别预后显著差别的亚型及其内在一致的分子机制可以对卵巢癌的预后预测及治疗提供一定的参考.

内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的作用及其对活性氧／c-Jun氨基末端激酶通路的影响

目的观察内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的作用及其对活性氧（ROS）／c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路的影响。方法选取60只雄性大鼠，分为空白组（尾静脉注射0.1ml的体积分数0.1％胎牛血清）、模型组（尾静脉注射0.1ml的体积分数0.1％胎牛血清）及手术干预组（内镜逆行性胰胆管造影术）各20只。建模后，处死大鼠后，留取外周血、胰腺组织标本，采用免疫组织化学技术检测3组大鼠核凶子-κB（NF-κB）的核转位，胰腺组织切片采用苏木素-伊红（HE）染色法行病理检查，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定3组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-d）、白细胞介素（IL）-6、IL-1β水平，采用流式细胞分析检测3组大鼠胰腺组织ROS水平变化，采用Western blot检测3组大鼠胰腺组织磷酸化JNK（p-JNK）、JNK变化。结果与模型组（55.9±2.2、79.6±12.6、322.3±28.5、436.8±32.9）比较，手术干预组的NF-κB、ROS、P-JNK、JNK均明显降低（12.3±1.1、61.2±13.2、2551.4±25.9、289.6±36.5），差异有统计学意义（P=0.011、0.015、0.014、0.009）；与模型组（85.6±2.5、58.6±13.6、82.3±12.5）比较，手术干预组的TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显降低（22.3±1.1、10.3±1.2、11.3±2.3），差异有统计学意义（P=0.018、0.012、0.016）。结论ROS／JNK通路的启动会引发一系列炎性反应加重病情，内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的治疗作用是通过抑制ROS／JNK通路发挥作用。

调神通络针刺法通过Nrf2/ROS通路对脑卒中后痉挛大鼠神经功能、肌张力及神经递质的影响

目的:观察调神通络针刺法通过核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路对脑卒中后痉挛大鼠神经功能、肌张力及神经递质的影响,探讨其作用机制。方法:SD大鼠分为假手术组、模型组、西药组、非穴位针刺组、调神通络针刺组、调神通络针刺+ML385组,每组15只。采用大脑中动脉栓塞法制备脑卒中后痉挛大鼠模型。造模后,西药组大鼠给予巴氯芬灌胃(0.4mg/kg);非穴位针刺组选择大鼠患侧肋下髂嵴上10mm的固定点进行针刺;调神通络针刺组于顶中线、右侧顶旁线给予调神通络法针刺;调神通络针刺+ML385组大鼠在行调神通络针刺前30min按30mg/kg剂量给予腹腔注射Nrf2抑制剂ML385。针刺干预均每次10min,每日1次,各组均干预7d。用神经功能缺损评分和改良Ashworth量表(MAS)评分评估大鼠神经功能和痉挛程度;电生理记录仪检测大鼠肌张力和H反射;用TTC染色法测定大鼠脑梗死体积百分比;用高效毛细管电泳法检测大鼠大脑皮层梗死区组织氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)含量;荧光分光光度法检测大脑皮层梗死区组织单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)含量;二氢乙锭染色检测大鼠大脑皮层梗死区组织ROS水平;Westernblot法检测大鼠大脑皮层梗死区组织Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、MAS评分、Hmax/Mmax比值、脑梗死体积百分比、Glu含量、Asp含量、ROS水平均升高(P<0.001),肌肉反应对张力传感器的作用力、诱发H反射的刺激阈值,GABA、Gly、5-HT、DA、NE含量及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均降低(P<0.001);与模型组比较,非穴位针刺组各指标差异均无统计学意义;与模型组、非穴位针刺组比较,西药组、调神通络针刺组大鼠神经功能缺损评分、MAS评分、Hmax/Mmax比值、脑梗死体积百分比、Glu含量、Asp含量、ROS水平均降低(P<0.001),肌肉反应对张力传感器的作用力、诱发H反射的刺激阈值,GABA、Gly、5-HT、DA、NE含量及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均升高(P<0.001,P<0.01);与调神通络针刺组比较,调神通络针刺+ML385组大鼠神经功能缺损评分、MAS评分、Hmax/Mmax比值、脑梗死体积百分比、Glu含量、Asp含量、ROS水平均升高(P<0.001,P<0.05),肌肉反应对张力传感器的作用力、诱发H反射的刺激阈值,GABA、Gly、5-HT、DA、NE含量及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均降低(P<0.001,P<0.05,P<0.01)。结论:调神通络针刺法可通过激活Nrf2/ROS通路,调节皮层梗死区神经递质含量,从而改善脑卒中后痉挛大鼠神经功能损伤和肌肉痉挛。

麦门冬汤抗肺纤维化作用机制的网络药理学研究

目的:采用网络药理学方法探讨麦门冬汤治疗肺纤维化的潜在作用机制。方法:通过中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)、中医药百科全书数据库(ETCM)获取麦门冬汤的化学成分和潜在作用靶点;通过治疗靶点数据库(TTD)、人类的非线性孟德尔遗传数据库(OMIM)、DRUGBANK数据库获取肺纤维化相关的作用靶点。采用Cytoscape3.6.2软件绘制单味药-成分-共有靶点网络;采用STRING数据库并结合Cytoscape3.6.2软件绘制关键靶点相互作用图;采用David 6.8数据库进行基因本体论(GO)分析与京都基因和基因组数据库(KEGG)通路分析。结果:获得麦门冬汤392个成分,2682个潜在靶点,98个肺纤维化相关靶点,麦门冬汤和肺纤维化共有靶点49个。对单味药-成分-共有靶点网络进行网络参数分析,筛选出24个麦门冬汤抗肺纤维化的主要作用靶点。GO及KEGG分析显示,麦门冬汤抗肺纤维化的主要靶点涉及119个生物学过程,28个细胞组分,27个分子功能以及12条信号通路。结论:麦门冬汤抗肺纤维化作用可能与5-羟色胺受体(5-HTR)、转化生长因子受体(TGF)等密切相关,麦门冬汤可能通过调节神经活性配体-受体相互作用通路、钙信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路发挥抗肺纤维化作用,有待于进一步实验验证。

恒古骨伤愈合剂对背根节压迫模型大鼠的镇痛作用及机制

目的:探讨恒古骨伤愈合剂(OK)对腰椎间盘突出压迫神经的镇痛作用及机制。方法:建立模拟临床腰椎间盘突出压迫神经的背根神经节慢性压迫(CCD)大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、OK低、中、高剂量组(1.31、2.63、5.25 mL·kg^(-1))、普瑞巴林组(5 mg·kg^(-1)),每组8只;另取8只SD大鼠作为空白组,灌胃给予等体积的生理盐水。并采用行为学检测、不良反应评估、网络分析、蛋白免疫印迹法、免疫荧光及拮抗剂应用等方法进行探讨。结果:与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值、脊髓背角炎症因子表达均显著升高(P<0.01),患侧足印相关指标均显著下调(P<0.01);模型组脊髓背角小胶质细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,OK低、中、高剂量组可剂量依赖性提高CCD大鼠的机械痛敏、热辐射痛敏阈值(P<0.05,P<0.01),改善CCD大鼠步态(P<0.05,P<0.01),降低脊髓背角炎症因子表达(P<0.05,P<0.01),降低CCD大鼠脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达(P<0.05,P<0.01),并有效降低醋酸诱导的小鼠伤害性反应(P<0.05,P<0.01),且无耐受性;体质量检测、脏器指数、强迫游泳、轮替等实验结果显示OK无明显的不良反应。进一步的拮抗剂实验显示,与OK高剂量组比较,MRS1523、RS127445能逆转OK的瞬时镇痛效应(P<0.01)。结论:OK对CCD模型有良好的镇痛效应且无明显不良反应,其机制可能与激动ADORA3、HTR2B及抑制小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK等元件相关。

虾青素对过氧化氢诱导胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo的影响

目的观察虾青素通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶/活性氧(ROS)信号通路对过氧化氢(H2O2)诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo的影响。方法实验分为空白组、模型组和实验组,每组8个复孔;实验组HTR-8/SVneo细胞预先以10 nmol·L^-1虾青素处理24 h,之后实验组和模型组细胞均以250μmol·L-1H2O2作用24 h;空白组未进行任何药物干预。以噻唑蓝(MTT)法检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖情况,以DCF-DA荧光染色检测各组HTR-8/SVneo细胞内ROS水平,检测各组HTR-8/SVneo细胞培养上清中乳酸(LDH)及氧化应激指标含量,以蛋白质印迹法检测各组细胞NADPH氧化酶4(NOX4)、p22phox蛋白表达情况。结果干预后24 h,空白组、模型组及实验组HTR-8/SVneo细胞内ROS荧光强度值分别为2.76±0.43,34.15±2.34,15.61±1.85,LDH分别为(756.24±31.05),(1785.46±34.69),(1235.26±26.75)U·L^-1,超氧化物歧化酶(SOD)分别为(23.56±2.24),(10.04±2.02),(15.16±3.08)U·mg^-1,丙二醛(MDA)分别为(0.46±0.14),(0.96±0.21),(0.68±0.13)U·mg^-1,Nox4蛋白相对表达量分别为0.32±0.04,0.89±0.06,0.64±0.03,p22phox蛋白相对表达量分别为0.15±0.03,0.75±0.04,0.49±0.02,模型组分别与空白组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论虾青素对H2O2诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激损伤具有保护作用,可能与干扰NADPH氧化酶/ROS信号通路活性有关。

基于网络药理学四逆散治疗抑郁症的作用机制探讨

目的探讨四逆散治疗抑郁症的作用机制。方法借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索四逆散中柴胡、白芍、枳实、甘草的化学成分和作用靶点,通过OMIM、TTD、Drugbank、Digsee等多个数据库查询与抑郁症(depression)相关的基因。通过Uni Prot数据库查询靶点对应的基因,进而运用Cytoscape 3.2.1构建化合物-靶点(基因)网络、蛋白相互作用(PPI)网络筛选出核心靶点,最后通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测其作用机制。结果化合物-靶点网络包含121个化合物和相应靶点259个,关键靶点涉及PTGS2、CALM1、ESR1、HSP90AA1、AR等。PPI核心网络包含15蛋白,关键蛋白涉及CASP3、CHRM2、CYP3A4等。GO功能富集分析得到GO条目375个(P<0.05),其中生物过程(BP)条目307个,细胞组成(CC)条目37个,分子功能(MF)条目31个。KEGG通路富集筛选得到37条信号通路(P<0.05),涉及神经活性配体-受体相互作用信号通路、多巴胺信号通路、IL-17信号通路等。结论四逆散中的有效活性成分主要通过作用于CASP3、CHRM2、DRD1等15个关键靶点调节多条信号通路从而发挥抗抑郁作用。

miR-150对角叉菜胶诱导慢性非细菌性前列腺炎模型炎症调控作用及机制

目的 分析微小RNA-150(miR-150)对角叉菜胶诱导慢性非细菌性前列腺炎(CNP)模型的炎症调控作用及相关机制。方法 选取60只SFP级雄性大鼠,随机分为A、B、C、D组各15只,A组不做任何处理,剩余三组大鼠建立角叉菜胶诱导的CNP模型。C组做miR-150沉默转染、D组做miR-150过表达转染,A组、B组注射生理盐水。对比分析各组指标。结果 与A、B组相比,C组miR-150表达量降低,D组miR-150表达量升高(P<0.05)。相比B组,C组体质量、前列腺湿质量较低,D组体质量、前列腺湿质量较高(P<0.05);相比C组,D组体质量、前列腺湿质量较高(P<0.05)。相比B组,C组白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活性蛋白激酶(p-p38MAPK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量较高,D组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平及p38MAPK、p-p38MAPK、MMP-9蛋白表达量较低(P<0.05);相比C组,D组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平较低(P<0.05)。结论 miR-150过表达可能经作用于p38MAPK信号通路,最终发挥调控角叉菜胶诱导CNP局部炎症发挥作用。