采用可视化方法通透性处理大肠杆菌细胞生产海藻糖合成酶

采用一种新的工业过程操作优化方法——可视化优化方法,对利用生物表面活性剂硫酸粘杆菌素通透性处理重组大肠杆菌BL21生产海藻糖合成酶的工艺条件进行优化。结果表明:以1.40 g/L的硫酸粘杆菌素为渗透剂,35℃渗透处理72 min,即得透性化细胞海藻糖合酶,酶活是传统超声破碎法制得的2.09倍。所得透性化细胞间歇反应时,以30%麦芽糖为底物进行海藻糖转化实验,转化率可达70%,重复使用16批(12 h/批),转化率可保持在65%以上。

制霉菌素预处理选育麦考酚酸高产菌株

以短密青霉(Penicillium brevicompactum)TK1-41#为出发菌株,采用理性化筛选方式,对麦考酚酸(MPA)产生菌进行诱变育种研究。根据MPA产生菌的特点,设计了一种新的筛选方式。即通过制霉菌素预处理,改变了MPA产生菌细胞膜的通透性,提高了它对诱变剂的敏感性。最后再经过紫外诱变和添加高浓度自身代谢产物的方法,对MPA产生菌进行复合处理,获得了高产突变株TK93#,其在1T发酵罐上的产量比出发菌株TK1-41#提高了163%。

羰基还原酶产生菌Candida ontarioensis制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇

从实验室保藏的菌株中筛选获得Candida sp.PT2A,并通过18S rRNA鉴定为安大略假单胞菌Candida on-tarioensis。对C.ontarioensis不对称还原合成(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇的发酵产酶条件和转化条件进行优化,确定了最适的发酵产酶条件和转化条件:温度30℃,初始pH 6.5,摇床转速180 r/min,菌体质量浓度200 g/L。采用2-氯-1-(3-氯苯基)乙酮质量浓度为10 g/L时,还原反应72 h,(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇的e.e.值为99.9%,产率为99%;底物质量浓度提高至30 g/L时,产率下降为84.3%。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对C.ontarioensis细胞进行通透性处理(CTAB g/L,4℃下处理20 min),在30 g/L底物下反应24 h,产物的e.e.和产率分别达到99.9%和97.5%。