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人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1的克隆及其蛋白表达、纯化
1
作者
招树涛
徐永健
陈浩云
《中国医药导报》
CAS
2018年第32期13-15,23,共4页
目的克隆与人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并在大肠埃希菌中表达,最后进行蛋白纯化、鉴定。方法根据基因库中收录的Caveolin-1基因序列,设计其上下游引物,经过PCR反应合成Caveolin-1双链,然后与pET28a(+)载体重组,筛选阳性克隆并...
目的克隆与人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并在大肠埃希菌中表达,最后进行蛋白纯化、鉴定。方法根据基因库中收录的Caveolin-1基因序列,设计其上下游引物,经过PCR反应合成Caveolin-1双链,然后与pET28a(+)载体重组,筛选阳性克隆并对DNA序列分析鉴定。将已构建好的重组质粒pET28a-Caveolin-1转入化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物经镍离子亲和层析(Ni^(2+)-NTA)纯化,SDS-PAGE检测和Western blot鉴定。结果 PCR扩增的Caveolin-1 DNA片段经鉴定确认为人Caveolin-1基因。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的含有pET28a-Caveolin-1重组质粒的DE3菌表达出重组人Caveolin-1融合蛋白。重组蛋白经Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化,获得了较高纯度的融合蛋白。结论本研究成功克隆了人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并对其进行蛋白表达、纯化,获得了较高纯度融合蛋白,为进一步的相关临床研究奠定了基础。
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关键词
血脑屏障
通透性相关基因
Caveolin-
1
克隆
表达
纯化
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职称材料
题名
人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1的克隆及其蛋白表达、纯化
1
作者
招树涛
徐永健
陈浩云
机构
广州中医药大学金沙洲医院重症医学部
出处
《中国医药导报》
CAS
2018年第32期13-15,23,共4页
基金
广东省中医药局科研项目(20161048)
文摘
目的克隆与人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并在大肠埃希菌中表达,最后进行蛋白纯化、鉴定。方法根据基因库中收录的Caveolin-1基因序列,设计其上下游引物,经过PCR反应合成Caveolin-1双链,然后与pET28a(+)载体重组,筛选阳性克隆并对DNA序列分析鉴定。将已构建好的重组质粒pET28a-Caveolin-1转入化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物经镍离子亲和层析(Ni^(2+)-NTA)纯化,SDS-PAGE检测和Western blot鉴定。结果 PCR扩增的Caveolin-1 DNA片段经鉴定确认为人Caveolin-1基因。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的含有pET28a-Caveolin-1重组质粒的DE3菌表达出重组人Caveolin-1融合蛋白。重组蛋白经Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化,获得了较高纯度的融合蛋白。结论本研究成功克隆了人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并对其进行蛋白表达、纯化,获得了较高纯度融合蛋白,为进一步的相关临床研究奠定了基础。
关键词
血脑屏障
通透性相关基因
Caveolin-
1
克隆
表达
纯化
Keywords
Blood-brain barrier
Permeability related gene
Caveolin-1
Cloning
Expressing
Purifying
分类号
R543.5 [医药卫生—心血管疾病]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1的克隆及其蛋白表达、纯化
招树涛
徐永健
陈浩云
《中国医药导报》
CAS
2018
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