卡维地洛对缺氧、再供氧心肌细胞缝隙连接通道蛋白43表达的影响

目的:检测卡维地洛(Cavedilol,CVD)对缺氧再供氧时心肌细胞缝隙连接通道蛋白43(Conexin43,CX43)的基因表达和CX43通道蛋白变化的影响。方法:原代培养心肌细胞,随机分为2组:未用药组,CVD组。建立缺氧、再供氧模型,分别于正常、缺氧30min、再供氧1h、2h、3h、6h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CX43 mRNA表达、蛋白免役印迹法(Western blot)检测CX43蛋白的含量。结果:未用药组的心肌细胞缺氧30min时CX43 mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异(P>0.05)。再供氧1h、2h、3h、6h则分别减少了39.16%、45.00%、46.67%、51.67%,和正常时相比差异显著(P<0.01)。其中再供氧1h下降幅度最大。用CVD干预后再供氧1h、2h、3h、6h则分别减少了22.95%、27.87%、30.33%、35.25%(P<0.01)。再供氧1h、6h的下降幅较未用药组分别减少了41.39%、31.78%,差异显著(P<0.01)。结论:心肌细胞缺氧再供氧时,其CX43基因表达和蛋白含量明显减少,卡维地洛可抑制CX43降解。

TAT-Gap19通过抑制啮齿动物星形胶质细胞的连接蛋白43半通道发挥抗惊厥作用

越来越多的证据表明,星形胶质细胞连接蛋白43(Cx43)信号在癫痫中发挥至关重要的作用。但是,由于通过实验方法鉴别Cx43间隙连接通道(GJCs)和半通道(HCs)的技术尚不成熟,导致目前尚无法确定哪个通道在癫痫的发生中发挥更重要的作用。因此,本研究观察TAT-Gap19(Cx模拟肽)是否通过抑制Cx43半通道而非Cx43间隙连接通道影响实验诱导的啮齿动物癫痫发作。急性海马切片小鼠染料摄取实验表明,星形胶质Cx43半通道响应化学惊厥毛果芸香碱的作用而开放,并且可被TAT-Gap19抑制。体内实验中,毛果芸香碱诱导的癫痫发作及相伴随的D-丝氨酸微透析液的增长水平被Cx43半通道的抑制所抑制。此外,TAT-Gap19的抗惊厥作用被外源性D-丝氨酸给药逆转,这表明,抑制Cx43半通道可以通过降低细胞外D-丝氨酸水平来防止癫痫发作。抑制Cx43半通道的抗惊厥特性在电癫痫小鼠模型(如急性6 Hz难治性癫痫发作模型和慢性6 Hz角膜点燃模型)中得到了进一步的证实。总而言之,这些结果表明,Cx43半通道在癫痫发作中可以起到一定作用,并且有成为癫痫治疗中新型用药靶点的潜力。

缺血再灌注对心肌细胞CX43表达的影响

目的检测缝隙连接通道蛋白43(Conexin43,CX43)在缺血再灌注中的心肌细胞基因表达和CX43通道蛋白变化情况,分析CX43变化的原因,判断CX43在心肌缺血再灌注中所起得作用。方法原代培养心肌细胞,建立缺血再灌注模型,分别于正常、缺氧30 min、再灌注1h、2 h、3 h、6 h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CX43mRNA表达、蛋白免役印迹法(Western blot)检测CX43蛋白的含量。结果未用药干预的心肌细胞缺氧30 min时CX43mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异(P＞0．05),再供氧1h、2 h、3 h、6 h则分别减少了39．16%、45．00%、46．67%、51．67%。和正常相比差异显著(P＜0．01)。其中再供氧1 h下降幅度最大。结论CX43在心肌细胞缺氧再灌注过程中mRNA表达与蛋白含量均是减低的,其中再供氧1 h下降幅度最大。

急性病毒性心肌炎与Cx43的相关实验研究

目的:通过对急性病毒性心肌炎组与正常组小鼠通道蛋白43、干扰素-γ及白介素-10水平的比较,探索病毒性心肌炎及其心律失常与通道蛋白43的关系并探讨可能机制。方法:20只雄性4周龄BALB/c小鼠予腹腔接种柯萨奇病毒B组3型建立病毒性心肌炎模型,6只予Eagle s液腹腔注射作为正常组。第14 d处死存活小鼠。ELISA法、实时定量PCR法测通道蛋白43、干扰素-γ和白介素-10改变,免疫组织化学法检测心肌细胞膜上通道蛋白43表达。结果:模型对照组通道蛋白43表达少于正常组。正常组通道蛋白43和白介素-10mRNA表达高于模型对照组(3.890±0.072对1.000±0.127,P<0.05和1.660±0.029对1.000±0.031,P<0.05),模型对照组干扰素-γmRNA高于正常组(1.000±0.061对0.139±0.032,P<0.01)。血清干扰素-γ、白介素-10的改变与其核酸水平的改变基本一致。结论:病毒性心肌炎急性期与心律失常有关的连接蛋白通道蛋白43明显减少,Th1/Th2免疫失衡在其减少的机制中起作用。

白藜芦醇预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中Cx43的作用

目的探讨白藜芦醇预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠,体重200~220 g。采用腹腔注射1%链脲佐菌素柠檬酸缓冲液30 mg/kg制备大鼠糖尿病模型。取糖尿病大鼠采用随机数字表法分为3组(n=10):糖尿病鼠假手术组(Sham组),糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(MIR组),白藜芦醇-糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(MIR+Res组)。取正常大鼠10只作为白藜芦醇-非糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(N+Res组)。采用结扎冠状动脉左前降支30 min,恢复灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。N+Res、MIR+Res组于缺血再灌注模型建立前5d腹腔注射生理盐水稀释的白藜芦醇15 mg/kg,Sham、MIR组不注射白藜芦醇,注射等量生理盐水。于再灌注120min时腹主动脉取血检测LDH、CK-MB,TNF-α,IL-6浓度。取心脏组织检测MDA,SOD含量,切片HE染色观察病理改变,Western blot检测心肌组织里Cx43蛋白表达水平。结果 Sham组心肌细胞肌原纤维排列整齐,胞浆内线粒体丰富,部分组织见炎症细胞浸润。MIR组心肌组织结构紊乱,心肌肌原纤维溶解,大量炎症细胞浸润。N+Res、MIR+Res组心肌结构紊乱及细胞水肿程度较MIR组明显减轻,可见少量炎性细胞浸润。其中,N+Res组病理学损伤较MIR+Res组轻。与MIR组比较,N+Res及MIR+Res组的CK-MB、LDH、TNF-α、IL-6等炎性指标浓度降低(P <0.05);MDA含量降低,SOD含量增高、Cx43表达上升(P <0.05)。结论白藜芦醇通过作用于Cx43,减轻了糖尿病心肌缺血再灌注损伤,起到了心肌保护作用。

缝隙连接蛋白-43半通道在大鼠脑缺血再灌注损伤中对神经元损伤的影响

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞CX43半通道对大脑海马区神经元损伤的影响.方法 128只SD雄性大鼠随机数字法分为四组,Sham组,I/R组,I/R＋ Gap26组,I/R＋NS组,每组32只.用TTC染色法检测各组再灌注24 h后大脑梗死体积;用免疫组化及Western印迹的方法检测脑缺血再灌注损伤后各组胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、星形胶质细胞CX43的表达情况;用尼氏染色及免疫组化来观察大脑海马区神经元死亡的情况.结果 与Sham组相比,I/R组大脑梗死体积[（132±7） mm3比0]增加、星形胶质细胞CX43[（2.45±0.56）比（1.15±0.43）]、GFAP蛋白表达[（146±11）比（76 ±5）]增加（P＜0.05）,神经元损伤程度增加;与I/R＋ NS组相比,I/R＋Gap26大脑梗死体积[（76±6）mm3）比（140±10）mm3]减少、星形胶质细胞CX43[（0.43 ±0.16）比（2.15±0.73）]、GFAP蛋白表达[（57±6）比（140±9）]降低（P＜0.05）,神经元损伤程度减轻.结论 阻断CX43半通道可以降低脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的活化,并且减轻了大脑海马区神经元的损伤.

钙通道激活蛋白43在结直肠腺瘤和结直肠癌组织的表达及其临床意义

目的检测钙通道激活蛋白43（Cap43）在正常结直肠黏膜、不同病理类型的结直肠腺瘤和结直肠癌组织中的表达，探讨Cap43在预示结直肠腺瘤恶变的作用方法利用免疫组织化学方法及实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测Cap43在80例结直肠腺瘤、60例结直肠癌以及60例正常结直肠黏膜组织中的表达。结果Cap43在正常肠黏膜组、结直肠腺瘤组、结直肠癌组中表达差异有统计学意义（P＝0.000），其阳性表达率分别为31.7%、63.8%、91.7%；而在管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤中亦明显增高，其阳性表达率分别为52.5%、60.0%、90.0%，差异有统计学意义（P＝0.016）。FQ-PCR结果显示Cap43特异性扩增，Cap43在正常结直肠黏膜、结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤及结直肠癌组织中的表达量分别为1.119±0.871、3.660±1.309、7.323±2.131、13.018±2.417、19.552±6.338（F＝25.943，P＝0.028）。结论Cap43与结直肠腺瘤的恶变及结直肠癌的发生相关。

基于Cx43/Glu/AMPAR通路探讨加减薯蓣丸对血管性痴呆大鼠海马髓鞘损伤的影响

目的:探讨加减薯蓣丸对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马髓鞘损伤的影响及其作用机制研究。方法:选取SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为假手术组,模型组,加减薯蓣丸高、中、低剂量组,每组12只。除假手术组外,其余4组均采用双侧颈动脉结扎改良法进行VD模型制备,造模结束后通过水迷宫筛选造模成功大鼠进行灌胃。加减薯蓣丸高、中、低剂量组灌胃剂量分别为10、5、2.5 g·kg^(-1)·d^(-1),其余组给予等体积生理盐水。28 d灌胃结束后,通过水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马区神经元结构,生化检测海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、谷氨酸(Glu)含量变化,免疫荧光检测海马髓鞘碱性蛋白(MBP)、活化星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半通道蛋白43(Cx43)的表达,电镜观察大鼠海马髓鞘结构,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体(AMPAR)、Cx43蛋白表达。结果:与假手术组比较,VD模型大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),穿越原平台次数和目标象限滞留时间百分比显著减少(P<0.01);海马CA1区神经元结构紊乱;髓鞘板层疏松,边缘模糊不清;海马CA1区神经元TNF-α、IL-6、Glu含量明显增多,以Glu最为显著(P<0.01);AMPAR蛋白表达显著降低(P<0.01),磷酸化(p)-AMPAR、Cx43蛋白表达显著升高(P<0.01);髓鞘MBP蛋白表达显著降低,GFAP与Cx43共标荧光显著增强。与模型组比较,给予加减薯蓣丸干预后,加减薯蓣丸中药组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越原平台次数和目标象限滞留时间百分比明显延长(P<0.05);海马神经元排列较紧密;髓鞘板层更致密,边缘清晰;海马TNF-α、IL-6、Glu含量明显降低,Glu下降最为显著(P<0.01);AMPAR蛋白表达显著升高(P<0.01),p-AMPAR、Cx43蛋白表达显著降低,以高剂量组最为显著(P<0.01);髓鞘MBP蛋白表达显著增加,GFAP与Cx43共标荧光显著降低、高剂量组改善最为明显。结论:加减薯蓣丸能改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制Cx43表达,减少Glu外排,抑制AMPAR介导的炎性反应并减少星形胶质细胞标记物GFAP产生,促进髓鞘MBP蛋白表达,缓解髓鞘损伤有关。