氟比洛芬酯对坐骨神经慢性缩窄性损伤模型大鼠肌肉中P物质及神经速激肽1受体表达的影响

目的观察氟比洛芬酯对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型大鼠疼痛阈值及肌肉中P物质(SP)及神经速激肽1受体(NK1-R)表达的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为4组,每组6只。A组:氟比洛芬酯治疗CCI大鼠(CCI大鼠暴露并结扎右侧坐骨神经,观察记录术前及术后第3、6、9、12、15日大鼠行为学改变并测定其疼痛阈值,在术后疼痛高峰期给予氟比洛芬酯5 mg/kg尾静脉注射);B组:未经治疗CCI大鼠;C组:氟比洛芬酯治疗假手术大鼠(假手术大鼠仅暴露但不结扎坐骨神经,术后给予氟比洛芬酯5 mg/kg尾静脉注射);D组:假手术大鼠。采用免疫组织化学法检测大鼠肌肉中SP及NK1-R表达。结果术后第15日,A、B组大鼠达到疼痛高峰;A组大鼠经氟比洛芬酯治疗后疼痛阈值显著升高(P<0.05);C组大鼠给予氟比洛芬酯后疼痛阈值亦升高,但差异无统计学意义(P>0.05);A组SP及NK1-R的表达呈弱阳性,B组表达为强阳性,两组差异有统计学意义(P<0.05);C、D两组表达均为弱阳性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论氟比洛芬酯对坐骨神经CCI模型大鼠坐骨神经慢性疼痛有明显的镇痛效果,其机制可能与降低肌肉中SP及NK1-R的表达有关。

精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨

目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/p GADT7、Tac1/p EGFP-N2重组质粒,将Tac1/p EGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/p GADT7与Spag6/p GBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。

速激肽1型受体(NK1R)在斑胸草雀脑干鸣唱控制相关核团及部分听觉核团内的分布

采用免疫组织化学的方法研究了速激肽1型受体(NK1R)在斑胸草雀脑干发声控制核团和部分听觉中枢内的分布及阳性标记特征.结果显示,NK1R广泛分布于斑胸草雀发声控制核团和部分听觉中枢内;1)发声控制相关核团:中脑丘间复合体背内侧核(DM)有大量的NK1R免疫阳性胞体标记,极少出现纤维;中脑腹侧被盖区(VTA)、黑质致密部(SNc)及周围脑区有大量的NK1R阳性胞体和NK1R免疫阳性纤维分布;2)听觉中枢:中脑背外侧核(MLd)和耳蜗核前庭外侧核(NM)有密集的胞体标记;而耳蜗核层状核(NL)及角核(NA)有少量NK1R阳性胞体分散分布,且角核可见大量密集深染纤维.本实验结果提示NK1R可能在鸣禽的发声控制及听觉中枢内具有重要的生理功能.

速激肽1型受体(NK1R)在斑胸草雀端脑发声核团的分布

应用免疫组织化学的方法,对斑胸草雀端脑发声控制核团内速激肽1型受体(NK1R)的表达进行初步研究.结果显示,NK1R在高级发声中枢(HVC,proper name)、巢皮质巨细胞核外侧部(lateral magnocellular nucleus of the anterior nidopallium,LMAN)和弓状皮质栎核(robust nucleus of the arcopallium,RA)均有大量的免疫阳性标记,但前脑基底神经节X区(Area X)仅有少量的表达,X区内的P物质和NK1R分布密度具有不一致性.结果表明:NK1R广泛分布于斑胸草雀发声控制核团中.提示NK1R可能参与鸣唱学习相关的重要生理过程.

银屑病患者嗜酸性粒细胞P物质及受体神经激肽/速激肽受体1水平升高

目的研究银屑病患者外周血嗜酸性粒细胞P物质(SP)及其受体神经激肽/速激肽受体1(NK1R)的表达。方法流式细胞术检测银屑病患者和健康人外周血SP和NK1R的水平;用(0.1、1)μg/m L的蒿草花粉、梧桐花粉和尘螨过敏源粗提液刺激后,流式细胞术检测银屑病患者外周血嗜酸性粒细胞SP和NK1R的水平。结果银屑病患者SP+和NK1R+嗜酸性粒细胞的比例分别升高2.7倍和0.5倍,平均荧光强度分别增加1.5倍和0.2倍。此外,1μg/m L梧桐花粉过敏源粗提液刺激后,SP+嗜酸性粒细胞的百分比下调60%,而0.1μg/m L梧桐花粉过敏源粗提液刺激后NK1R+嗜酸性粒细胞的比例升高0.6倍。结论银屑病患者血液嗜酸性粒细胞SP和NK1R水平升高。

速激肽受体1基因启动子近端E盒点突变对下游基因调控的影响

目的研究NK1R转录起始位点上游启动子近端E盒点突变对下游基因转录活性的影响。方法定位NK1R基因转录起始点上游近端E盒结构,克隆含近端E盒的启动子序列,对E盒进行点突变,构建野生型和突变型荧光素酶报告基因载体,分别与内参荧光素酶报告基因载体p GL4.74 hluc转染MCF-7细胞,根据转染质粒类型分为PGL3野生型组、PGL突变型组、PGL3-basic组。结果 PGL3野生型组NK1R荧光素酶载体相对表达量为0.75±0.05;PGL3突变型组荧光素酶载体NK1R相对表达量0.60±0.07;PGL3-basic组相对表达量为0.38±0.05。结论 E盒结构可以影响所在启动子对下游基因的转录激活作用,点突变可以降低对下游基因的转录活性。

N端色氨酸修饰增强hemokinin-1拮抗绿脓杆菌的活性

为了明确色氨酸修饰是否增强HK1拮抗PA的活性,设计并合成了HK1及分别在其N端或C端进行的4个色氨酸修饰的短肽,采用猪皮模型测定了HK1及其色氨酸修饰肽对PA侵染率的影响,利用PA小鼠模型测定了HK1及其色氨酸修饰肽对PA感染小鼠的存活率及小鼠器官形态、重量的影响。结果表明:HK1及色氨酸修饰HK1能够显著降低PA对猪皮的侵染能力。其中,HK1的N端色氨酸修饰肽使PA相对侵染率降至3.4%,比HK1及其C端色氨酸修饰肽拮抗PA活性更强;HK1及其色氨酸修饰肽可增强小鼠抗PA感染能力,增加PA感染小鼠的存活率,减轻PA对主要器官的损害,其中HK1的N端色氨酸修饰肽促进小鼠抗PA感染的活性最强。

慢性自发性荨麻疹患者外周血SP、NK1R和ECP的表达

目的探讨慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)患者外周血P物质(substance P,SP)、神经激肽/速激肽受体1(neurokinin 1 receptor,NK1R)及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophil cationic protein,ECP)的表达情况。方法选取2020年1月至2020年12月上海市浦东新区人民医院皮肤科诊治的CSU患者15例,另选取15例体检健康者为对照组。采用流式细胞仪分析CSU组和对照组外周血SP、NK1R表达水平,采用ELISA检测2组外周血ECP的表达情况。结果与对照组相比,CSU组NK1R和ECP的表达显著升高,差异均有统计学意义[14.52%±0.932%vs 5.836%±0.882%,(14.54±1.255)ng/mL vs(7.456±0.982)ng/mL;P<0.05],而CSU组和对照组SP表达水平差异无统计学意义(1.907%±0.421%vs 1.813%±0.269%)。Pearson相关性结果显示,血清ECP水平与NK1R正相关(r=0.5357,P<0.05),与SP无相关性。结论CSU患者中NK1R和ECP的表达升高,且存在正相关,而SP无明显升高。推测NK1R可能促进嗜酸性粒细胞释放ECP,参与CSU的发生发展。

小鼠蓝斑内酪氨酸羟化酶阳性神经元向丘脑室旁核投射的形态学研究

目的:观察蓝斑(LC)内酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元向丘脑室旁核(PVT)内速激肽-1(TAC1)阳性神经元的投射,并从形态学上观察该通路是否参与伤害性信息的传递或调控。方法:利用TAC1-ires-Cre与Rosa26:CAG-LSL-tdTomato(Ai9)小鼠杂交,繁育TAC1-ires-Cre::Ai9小鼠,并制备坐骨神经分支损伤(SNI)模型,观察PVT内TAC1阳性神经元与FOS免疫阳性产物的共存情况,以及TAC1/FOS双标神经元与TH阳性轴突终末之间的密切接触。其次在C57BL/6小鼠PVT内注入荧光金(FG),在显微镜下观察LC内TH阳性神经元与FG逆标神经元的共标情况。最后在TAC1-ires-Cre小鼠的PVT注射RV逆行跨单突触三联病毒,观察LC内TH阳性神经元与RV逆标神经元之间的共存情况。结果:在TAC1-ires-Cre::Ai9小鼠脑内,TAC1阳性神经元为红色荧光所标记。SNI模型下PVT内可观察到部分TAC1阳性神经元同时表达FOS蛋白,且与TH阳性轴突终末之间形成密切接触。将FG注射入小鼠PVT后,在LC内可观察到大量的FG逆标神经元,且部分FG标记神经元同时表达TH阳性。利用RV逆行跨单突触示踪病毒,也可在LC内观察到PVT内TAC1阳性神经元的突触前神经元,且大部分突触前神经元为TH阳性。结论:LC内TH阳性神经元可向PVT内TAC1阳性神经元发出投射,形成LC^(TH+)-PVT^(TAC1+)神经通路,该通路可以被伤害性信息激活,提示其可能在痛觉信息的传递或调控过程中发挥一定的作用。

内热针干预腰椎间盘突出症大鼠模型的效果及其潜在机制

目的探讨内热针干预腰椎间盘突出(LDH)大鼠模型的效果及其潜在机制。方法将40只大鼠随机分为正常组、模型组、内热针组、电针组,每组10只。除正常组外,给予其余3组建立LDH模型。建模后,分别给予内热针组与电针组大鼠内热针与电针治疗,不给予正常组与模型组大鼠任何干预。干预2个疗程后,观察各组大鼠背根神经节组织病理变化,检测各组大鼠热刺激缩足阈值(TPWL)、神经传导速度、血清白细胞介素(IL)⁃6和IL⁃1β水平、背根神经节组织速激肽受体(NK)1和NK2蛋白表达水平。结果模型组大鼠神经元细胞肿胀及细胞凋亡明显,细胞核不规则改变且核仁模糊,胞浆中尼氏小体排列混乱并呈空泡形态,内热针组及电针组大鼠的上述改变有所改善。与正常组大鼠比较,其余3组大鼠TPWL降低,感觉和运动神经传导速度均减慢,血清IL⁃6、IL⁃1β水平及背根神经节组织NK1、NK2蛋白表达水平升高。模型组、电针组及内热针组大鼠的TPWL依次升高,感觉和运动神经传导速度依次增快,血清IL⁃6、IL⁃1β水平及背根神经节组织NK1、NK2蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论内热针可缓解LDH大鼠模型的疼痛,提高其感觉和运动神经传导速度,其作用机制可能与抑制NK1/NK2表达而减轻炎症反应有关。

慢性自发性荨麻疹患者血液嗜酸性粒细胞NK1R水平增加

目的检测慢性自发性荨麻疹(CSU)患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中P物质(SP)和神经激肽/速激肽受体1(NK1R)的表达。方法收集CSU患者和健康人外周血,用(0.1、1)μg/m L蒿草花粉、尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液刺激,流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群中SP及NK1R的表达。结果与健康人相比,CSU患者嗜酸性粒细胞比例增加1.2倍,NK1R+嗜酸性粒细胞上调66%,而SP+嗜酸性粒细胞的比例下调40%。0.1μg/m L尘螨过敏原可诱导CSU患者NK1R的表达上调1.11倍。结论 CSU患者嗜酸性粒细胞NK1R表达上调,阻断NK1R可用于CSU的治疗。

小鼠中缝背核至丘脑室旁核参与伤害性信息的形态学研究

目的:观察中缝背核(DR)内5-羟色胺(5-HT)能神经元向丘脑室旁核(PVT)内速激肽-1(TAC1)免疫阳性神经元的投射,并观察该通路在伤害性刺激下的激活情况。方法:将逆行示踪剂荧光金(FG)注入小鼠PVT,观察FG逆标神经元在DR内的分布,同时利用免疫组织荧光染色技术观察DR内5-HT能神经元与FG逆标神经元之间的共存情况;继而选用TAC1-ires-Cre小鼠结合RV逆标病毒,在DR观察向PVT内TAC1阳性神经元发出投射的突触前神经元的分布;最后利用TAC1-ires-Cre与Rosa26:CAG-LSL-tdTomato(Ai9)杂交小鼠制备坐骨神经分支损伤(SNI)模型,观察PVT内被激活的TAC1阳性神经元与5-HT能神经终末之间的关系。结果:(1)将FG注入PVT后,在DR的吻、中、尾段均可见FG逆标神经元,其分布以中段为主,吻、尾段数量相对较少,并且在DR内观察到5-HT和FG的双标神经元。(2)向TAC1-ires-Cre小鼠的PVT内注射RV逆行跨突触三联病毒后,在DR内也可见RV标记的突触前神经元,主要分布于DR中段。(3)SNI模型下TAC1-Cre::Ai9杂交小鼠PVT内部分TAC1神经元被激活,且同时与5-HT能神经终末形成密切接触。结论:DR内5-HT能神经元向PVT内TAC1阳性神经元发出投射,形成DR 5-HT+-PVT TAC1+神经通路,该通路可以被伤害性信息激活,提示其可能在伤害性信息传递/调控过程中发挥一定的作用。

健脾补血方对Lewis肺癌小鼠化疗后5-HT和SP及其受体的影响

目的观察健脾补血方对Lewis肺癌小鼠化疗后血清中5羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、P物质(Substance P,SP)以及5羟色胺3A受体(5-hydroxytryptamine 3A receptor,5-HT3AR)、速激肽1受体(Neurokinin1 receptor,NK1R)的影响,探讨健脾补血方对化疗后恶心呕吐的改善作用。方法 C57BL/6小鼠腋下接种Lewis肺癌细胞,随机分为肺癌组,模型组,健脾补血方高、中、低剂量组。模型组及健脾补血方各剂量组连续尾静脉注射顺铂3 d(4,3,3 mg·kg^(-1))复制模型。健脾补血方高、中、低剂量组分别给予健脾补血方25,12.5,6.25 g·kg^(-1)生药量,肺癌组和模型组给予生理盐水,连续灌胃给药14 d,末次给药后禁食24 h取血液标本及脑组织,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中5-HT和SP的浓度,并采用蛋白印迹法(Western Blot)检测5-HT3AR和NK1R的蛋白表达。结果与肺癌组比较,模型组血清中5-HT和SP浓度明显升高,5-HT3AR和NK1R的蛋白表达量升高;与模型组比较,健脾补血方各剂量组可降低血清中5-HT及NK1R蛋白表达量,而健脾补血方高剂量组可降低SP浓度及5-HT3AR蛋白表达量。结论健脾补血方能降低Lewis肺癌小鼠化疗后血清中5-HT和SP浓度,并下调其受体5-HT3AR和NK1R的蛋白表达量,可能与抑制化疗后恶心呕吐因子表达有关,从而减轻化疗后恶心呕吐反应。

化疗相关性恶心与呕吐的治疗进展

恶心和呕吐是肿瘤病人化疗时最常出现的不良反应。根据恶心、呕吐出现时间的不同,将化疗相关性恶心、呕吐分为急性、延迟性及预期性3种类型。5-羟色胺受体拮抗剂与糖皮质激素的联合应用可将急性恶心、呕吐的控制率提高到70%,但延迟性恶心、呕吐的发生率仍高达40%。而速激肽NK1受体拮抗剂的问世显著提高了化疗相关性恶心、呕吐的控制率,尤其是延迟性恶心、呕吐的发生率显著降低。目前,5-羟色胺受体拮抗剂、地塞米松及速激肽NK1受体拮抗剂三者联用为标准止吐方案。本文就止吐药物在肿瘤病人中的应用做一简单综述。

SDF—1α和c—MYC蛋白调控速激肽受体-1截短型mRNA表达的研究

目的 观察基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC蛋白对速激肽受体-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated,TACRI-Tr）转录水平的影响.方法 构建c-myc基因shRNA表达载体;用小干扰RNA方法沉默乳腺癌细胞MCF-7的c-myc基因,分成c-myc＋细胞组和c-myc-细胞组,相关实验组加SDF-1α细胞因子中和抗体,用实时定量PCR检测TYACR1-Tr mRNA表达水平.结果 c-myc基因shRNA表达载体构建成功;在正常培养条件下,c-myc-细胞组的TACR1-Tr转录水平低于c-myc＋细胞组（P〈0.05）;加了SDF-1α中和抗体后,c-myc-组TACR1-Tr的mRNA表达水平高于c-myc＋组（P〈0.05）.结论 MCF-7细胞在正常培养条件下,c-MYC蛋白可以反式激活TACRI-Tr的转录;但加入SDF-1α因子中和抗体后,c-MYC蛋白失去了这种激活作用.

速激肽-1受体小干扰RNA对变应性鼻炎多种炎性因子表达的影响

目的探讨速激肽-1受体小干扰RNA(neurokinin-1 receptor small interfering RNA,NK-1R-siRNA)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)鼻黏膜多种炎性因子表达的影响。方法将24只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为3组,分别为NK-1R-siRNA组、阴性小干扰RNA (negative control-small interfering RNA,NC-siRNA)组和生理盐水组,每组8只。将所有大鼠用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立AR动物模型,同时用NK-1R-siRNA、NC-siRNA和生理盐水滴鼻干预。观察各组大鼠的AR症状。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中OVA特异性IgE。实时定量聚合酶链反应(real time PCR,RT-PCR)及免疫组织化学(免疫组化)法检测各组大鼠鼻黏膜中NK-1R的表达情况。通过蛋白芯片技术比较各组大鼠鼻黏膜局部炎性因子的表达。使用SPSS 11.0软件,以单因素方差分析进行数据分析。结果与生理盐水组比较,NK-1R-siRNA组大鼠AR症状明显缓解[挠鼻(31.4±8.9)次/15 min比(69.5±17.9)次/15 min,喷嚏(7.2±1.9)次/15 min比(23.7±9.2)次/15 min,鼻分泌物(7.1±2.3)mg比(24.1±4.4)mg,t值分别为38.100、17.125、16.837,P值均<0.01]。与生理盐水组比较,NK-1R-siRNA组大鼠血清中OVA特异性IgE水平明显降低[(8.56±0.73)ng/ml比(18.05±1.22)ng/ml,t=9.787,P<0.01]。RT-PCR和免疫组化显示NK-1R-siRNA组大鼠鼻黏膜中NK-1R表达较NC-siRNA组和生理盐水组显著下降。蛋白芯片结果显示NK-1R-siRNA干预后,AR大鼠鼻黏膜中白细胞介素(interleukin,IL)1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13等多种炎性因子表达受到抑制,而γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、IL-10的表达明显升高。结论 NK-1R-siRNA可通过调节多种AR相关炎性因子的表达,减轻鼻黏膜局部变应性炎症。

六经头痛片对离体大鼠主动脉收缩及三叉神经降钙素基因相关肽表达的影响

目的观察六经头痛片对大鼠离体血管平滑肌收缩活动及三叉神经降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法制备大鼠离体主动脉血管环,采用麦氏浴槽法观察六经头痛片对血管平滑肌收缩活动的影响;培养三叉神经节组织,观察六经头痛片对三叉神经节CGRP表达的影响。结果六经头痛片可以减弱KCl及去甲肾上腺素(NE)引起的胸主动脉环收缩反应,对KCl收缩的半数抑制浓度(IC_(50))为0.97 mg/m L,对NE收缩的IC_(50)为0.55 mg/m L。而且,六经头痛片在1.4、0.14mg/m L时可明显减少离体培养24、48 h后三叉神经节CGRP阳性细胞的数量(P<0.05)。结论六经头痛片既可以对抗血管平滑肌的收缩,又可以降低三叉神经具有扩张血管作用的CGRP的量,说明六经头痛片具有稳定血管舒缩的作用。